1、免疫沉淀類實驗南華大學預防醫學與放射衛生實驗教學中心.教學對象：高等醫學院校衛生檢驗專業學生實驗課時：6學時課程類型：專業實驗課課程要求：必修每組人數：2人.實驗目的與要求掌握單向瓊脂分散實驗、雙向瓊脂分散實驗、對流免疫電泳的原理、結果分析及運用； 熟習火箭免疫電泳、免疫電泳的原理及運用。 .實驗內容單向瓊脂分散實驗雙向瓊脂分散實驗對流免疫電泳示教：火箭免疫電泳免疫電泳.一、單向瓊脂分散實驗.實驗原理： 將適量的抗體均勻混入瓊脂內制成瓊脂板，打孔，在孔中參與一定量的待測抗原，抗原向周圍呈輻射狀分散，與抗體相遇，在比例適宜時構成白色沉淀環沉淀環直徑的大小與抗原含量成正比，可從用不同濃度規范抗原制

2、成的規范曲線上，查出待檢樣品中抗原的含量。 一、單向瓊脂分散實驗.試劑與器材商品IgG、IgM、IgA單向瓊脂分散板；37恒溫箱、濕盒、可調微量加樣器等；待檢血清。方法分別取商品IgG、IgM、IgA單向瓊脂分散板1塊，按闡明書操作。用微量加樣器分別準確汲取不同稀釋度待測血清10mL加于孔內。將瓊脂板放入濕盒中，置于37恒溫箱分散24小時。一、單向瓊脂分散實驗.本卷須知：加樣量一定要準確，并且不同逸出孔外，否那么結果不好察看；實踐檢測過程中，規范曲線必需與樣品測定同時制備。一、單向瓊脂分散實驗 結果察看分別量取各孔樣品沉淀環的直徑，從相應闡明書提供的參考規范曲線，計算待檢血清中各種免疫球蛋白的

3、含量。.二、雙向瓊脂分散實驗. 實驗原理：在含有電解質的瓊脂中，抗原抗體分子相互彌漫分散，當比例適宜時可出現肉眼可見的白色沉淀線。沉淀線的外形、位置，與抗原的濃度、分散速度相關。 二、雙向瓊脂分散實驗.試劑與器材含15g/L生理鹽水的瓊脂糖待檢血清、抗人血清載玻片、濕盒、吸管、打孔器、37恒溫箱、可調微量加樣器等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理鹽水的瓊脂糖，于一干凈的載 玻片；打孔：待瓊脂板凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，每孔之間的間隔約4 5mm，根據需求，可打成呈梅花狀、三角狀的孔；加樣：用可調微量加樣器根據需求在不同孔內參與待檢血清和抗人血清10mL；分散：將瓊脂糖

4、凝膠板放濕盒中，置37溫箱中24h后，取出察看結果。二、雙向瓊脂分散實驗.本卷須知：加樣量一定要準確，并且不同逸出孔外，否那么結果不好察看；制板時，玻片要清潔，邊緣要整齊，加瓊脂糖時要防止產生氣泡；打孔時留意防止產生裂痕或將瓊脂與玻片脫離。二、雙向瓊脂分散實驗結果察看：沉淀線的位置、數目與外形等。圖4 抗原特異性與沉淀線外形的關系a、b：抗體 A、A、B：抗原A、B完全不同 A、A部分一樣.三、對流免疫電泳建立在雙向瓊脂分散實驗的根底上，經過電流，使蛋白質抗原、抗體在電場中作定向加速度雙分散，從而加速沉淀的構成。 . 實驗原理：在一定的離子強度、pH8.4以上的緩沖液中，大多數抗原解離帶負電，

5、在電場中向陽極挪動，而抗體大部分是IgG，其等電點與環境中的pH接近，很少解離。另外，由于分子量大，加上電滲作用緩慢向陰極挪動，在短時間內，在兩孔之間或抗體另一側構成沉淀線。 三、對流免疫電泳.試劑與器材1.5%巴比妥緩沖液瓊脂糖 待檢血清、抗人血清 0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液 載玻片、吸管、打孔器、可調微量加樣器、電泳儀、電泳槽等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理鹽水的瓊脂糖，于一干凈 的載玻片；打孔：待瓊脂板凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，每孔之間的間隔約 45mm，根據需求，可打成呈梅花狀、三角狀的孔；加樣：在孔中相向參與10mL抗原和抗體 ；電泳：將

6、抗原置于陰極側，抗體置于陰極側， 以4V/cm電壓電泳30min1h。 三、對流免疫電泳.結果察看：封鎖電源，翻開電泳槽，察看沉淀線的位置、數目與外形等。本卷須知：加樣量一定要準確，并且不同逸出孔外，否那么結果不好察看；制板時，玻片要清潔，邊緣要整齊，加瓊脂糖時要防止產生氣泡；孔距約0.5cm左右，太遠看不到實驗景象。三、對流免疫電泳.示 教火箭免疫電泳 將適量的抗體均勻混入瓊脂內制成瓊脂板，冷凝后，在瓊脂板的一端打一排小孔，分別參與一定量的待測樣品進展電泳。抗原在電泳過程中，與抗體相遇，在比例適宜時可構成錐形沉淀峰，其外形如火箭，故名火箭電泳。火箭峰的高度與抗原含量成正比，以峰高為縱坐標，知的抗原濃度為橫坐標，繪制規范曲線圖，就可知待檢樣品中抗原的含量。.示 教免疫電泳： 免疫電泳技術是利用蛋白質分子量以及其所帶電荷的不同，在電場作用下，