1、（measurement of plant hormones） 生物測定法是通過激素作用于植株或離體器官后生物測定法是通過激素作用于植株或離體器官后所產生的生理生化效應的強度，從而間接測定植物激所產生的生理生化效應的強度，從而間接測定植物激素含量的一種常用的方法。如生長素的生物測定，可素含量的一種常用的方法。如生長素的生物測定，可用小麥胚芽鞘切段伸長法，即將小麥胚芽鞘對生長素用小麥胚芽鞘切段伸長法，即將小麥胚芽鞘對生長素敏感的部分切成一定長度的小段，漂浮在含有生長素敏感的部分切成一定長度的小段，漂浮在含有生長素的溶液中，這些切段在生長素溶液中伸長。在一定濃的溶液中，這些切段在生長素溶液中伸長。

2、在一定濃度范圍內，芽鞘切段的伸長與生長素濃度的對數成正度范圍內，芽鞘切段的伸長與生長素濃度的對數成正比，因而把芽鞘切段在樣品提取液中的伸長與標準液比，因而把芽鞘切段在樣品提取液中的伸長與標準液中的切段伸長相比，即可測到樣品中的生長素含量。中的切段伸長相比，即可測到樣品中的生長素含量。一、生物測定法一、生物測定法n 薄層層析法（薄層層析法（thin layer chromatography，TLC）n 氣相色譜（氣相色譜（gas chromatography ，GC）n 高效液相色譜（高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）n 質譜法

3、（質譜法（mass spectrography，MS） 大都是基于不同物質在不同介質中有不同的分配系大都是基于不同物質在不同介質中有不同的分配系數，生長素測定用這樣的方法靈敏度可達到數，生長素測定用這樣的方法靈敏度可達到10-12g的水平，的水平，相當于一個豌豆莖切段或一個玉米谷粒中的生長素含量。相當于一個豌豆莖切段或一個玉米谷粒中的生長素含量。 二、物理和化學方法二、物理和化學方法三、免疫分析法三、免疫分析法n 放射免疫檢測法放射免疫檢測法(radioimmunoassay， RIA)n 酶聯免疫吸附檢測法酶聯免疫吸附檢測法(enzyme linked immunosorbent assay

4、， ELISA)n 動物體對進入其血液中的外來物質具有免疫性。動物體對進入其血液中的外來物質具有免疫性。n 將含激素的抗原導入兔子等動物血液中后，動物天然的保衛機將含激素的抗原導入兔子等動物血液中后，動物天然的保衛機制便產生了專一的抗體蛋白質，即該激素的專一抗體。抗體是免制便產生了專一的抗體蛋白質，即該激素的專一抗體。抗體是免疫球蛋白，存在于血液的血清部分，只要在注射了抗原幾十天后，疫球蛋白，存在于血液的血清部分，只要在注射了抗原幾十天后，把血液進行離心，即可得到抗體部分。抗血清中含有許多球蛋白把血液進行離心，即可得到抗體部分。抗血清中含有許多球蛋白（抗體），但只有一種對注射的抗原起反應。（抗

5、體），但只有一種對注射的抗原起反應。n 當抗體和抗原相互接觸時產生沉淀，可用不同的已知濃度的抗當抗體和抗原相互接觸時產生沉淀，可用不同的已知濃度的抗原對抗原抗體沉淀量作圖得出標準曲線，如用放射性抗原，可測原對抗原抗體沉淀量作圖得出標準曲線，如用放射性抗原，可測定放射性來定量，常用的有定放射性來定量，常用的有3H，125I 等。等。（一）原（一）原 理理RabbitIAA + BSAAntibodyinjectionSerum3H-IAA甲酰化甲酰化標準標準 3H-IAA-Met植物樣品植物樣品提取純化提取純化樣品中樣品中IAA免疫反應；免疫反應；（NH4）2SO4沉降沉降3H-IAA-Anti

6、bodyIAA-Antibody放射性比活度測定放射性比活度測定less tracermore tracermore sample IAALess sample IAA樣品樣品IAA濃度與濃度與3H的比活度的負半對數成線性相關的比活度的負半對數成線性相關 蒸餾水沖洗液氮處理冷凍干燥低溫保存新鮮植物材料（二）植物樣品的采取和預處理（二）植物樣品的采取和預處理-60樣品稱重80%甲醇4勻漿4浸提過夜離心去殘渣上清液真空冷凍離心濃縮復溶0.1MNH4Ac離心27000g20min 上清液(4保存)超聲波 洗脫（三（三 ）植物激素的提取）植物激素的提取pH9.0（四）植物激素的純化和分離（四）植物激素

7、的純化和分離上清液PVPP 柱DEAE 柱C18Sep-pak 柱酸性激素堿性激素(CKs)(IAAGAsABA)HPLC測定法：P 色譜儀：島津LC-9A型高效液相色譜分析儀 SPD-6AV紫外檢測器 Waters C18反相柱（4.6250mm,5m）P 色譜條件：柱溫40 流動相40%甲醇 (pH3.4) 進樣15l 流速 0.5ml.min- 1 UV254nm紫外檢測 外標法定量, 并測定回收率（五）植物激素的定量測定（五）植物激素的定量測定植物激素標準樣品色譜圖：植物激素標準樣品色譜圖：待測樣品中植物激素色譜圖：待測樣品中植物激素色譜圖：回收率測定：回收率測定： 將配制的混合標準植物激素樣品將配制的混合標準植物激素樣品(含含 IAA