1、規則一、請嚴格遵守課堂紀律，按時到達驗中途因故需外出時應向任課教師請假。，切勿無故、或早退，實二、進入之前要換好實驗服，注意遵守安全警示；為了你的安全，切勿赤腳、穿背心進入。三、保持安靜，不要在內大聲喧嘩及隨意走動，實驗座位排定后，請不要隨便更動。四、嚴肅認真地進行實驗，實驗期間進行任何與實驗無關的活動。五、內各組儀器及器材由各組自行使用，私自互相調換。六、愛護儀器、設備和標本。如遇儀器損壞或不靈，應及告任課教師，以便修理或更換，不要自行亂修。損壞設備或器材者應按有關規定進行賠償。七、注意節約實驗材料、藥品和水、電等。八、示教標本按順序觀察，隨意移動標本，以免妨礙他人觀察。九、保持、內清潔整齊

2、。實驗結束后，個人應認真器材，然后擺放整齊。自己的實驗臺面，十、值日生負責清掃室內衛生，關好水、電開關和門、窗等，經教師允許后方可離開。十一、在進餐和飲水。十二、愛護實驗動物，動物尸體、紙片及實驗廢物應放到指定地點，切勿隨意丟棄。十二、上述要求者，任課老師終止其實驗，并取消當堂實驗成績。細胞生物學實驗要求(一) 預習學生在課前應認真預習實驗指導，必須在進入之前對本次實驗的內容、操作方法和基本原理有大致了解。(二) 講解為了培養工作和思考的能力，學生應嚴格地按照實驗指導的指示進行操作，因教師的講解只限于該次實驗內容的安排及注意事項，使學生有充裕的時間進行操作與觀察。實驗一般都由學生(三)操作與觀

3、察進行，學生在實驗進行過程中首先要根據實驗指導加以精確觀察，然后認真地實驗結果。有關基本技能的訓練，必須嚴格按照規定的操作程序進行，反復練習，務必切實掌握并達到一定的熟練程度。觀察和操作應認真細心，力求做到嚴肅、嚴格、嚴密。(四) 示教順序觀察，(五) 作業有些實驗項目除學生操作的內容外，尚有示教。示教標本按隨意移動標本，以免妨礙他人觀察。實驗報告必須根據各人自己的觀察，以實事求是和一絲不茍的精神忠實地作出，不得或其他同學的報告，若發現報告內容雷同，雷同者一律以“O”分計。實驗報告原則上應于體上有文字報告、填表和作圖三種。內做完當堂提交。其形式大(六) 總結意的問題。由教師對該次實驗的總體情況

4、進行點評、總結并指導今后應予注實驗一普通光學顯微鏡的構造和使用方法一、目的要求1.2.3.掌握低倍鏡、高倍鏡的正確使用方法；熟悉顯微鏡各部分的構造和調節方法； 初步掌握光學顯微鏡的維護方法。二、實驗用品(一) 實驗器材顯微鏡、擦鏡紙、香柏油(或石蠟油)、二甲苯(或乙醚(二) 實驗材料液)。字母裝片、頭發裝片、纖維裝片。顯微鏡(microscope)是一種復雜的光學儀器，它的作用是將微細結構作適當的放大，以便于觀察，它是生命科學包括醫學科學常用的工具之一。(一) 顯微鏡的構造光學顯微鏡多種多樣，常用的是復式顯微鏡。復式顯微鏡通常包括三個部分：(1) 機械部分；(2) 光學部分；(3) 照明部分(

5、圖 1-1)。1. 機械部分(1) 鏡座：為顯微鏡的基座，以支持著整個鏡體，起穩固作用。現代顯微鏡在鏡座內通常裝配內置電光源。(2) 鏡臂：鏡座上方的弓形結構部分，適用手握，各種機械裝置都直接或間接地附著在它上面。(3) 調節器：鏡柱上方的大小兩對齒輪，較大的一對稱為粗調焦器；較小的一對稱為細調焦器。轉動調焦器時能使載物臺上下移動來調節焦距。粗調焦器可使載物臺作較快的升降，一般使用低倍鏡時多用它；細調焦器可使載物臺緩慢地升降。在低倍鏡下使用粗調焦器找到物體后，在高倍鏡下用細調焦器來作精細的調節，借以實現對物體不同層次的結構做細致觀察。圖 1-1 顯微鏡的結構1.目鏡 2.鏡筒 3.物鏡轉換器

6、4.物鏡 5.通光孔 6.載物臺 7.聚光鏡 8.光圈 9.照明裝置 10.鏡臂 11.粗調焦器12.細調焦器 13.鏡座(4) 鏡筒：位于鏡臂前方，上端裝置目鏡，下端連接物鏡轉換器。(5) 物鏡轉換器：又稱旋轉盤，位于鏡筒下端一個可旋轉的圓形凹盤。一般裝有 2-4 個放大倍數不同的物鏡，旋轉它就可以轉換物鏡。旋轉盤邊緣有一固定卡， 當旋至物鏡和鏡筒成直線時，就發出“咔”的響聲，這時才能觀察標本。(6) 載物臺：又稱鏡臺，位于鏡臂下方的平臺，用以承放玻片標本。載物臺中央有一圓形的通光孔，光線可以通過它由下往上進行反射。(7) 推片器：位于鏡臺后方或側面邊緣，連接一可動弧形彈簧夾。載物臺下方一側

7、有與其相連的兩個旋鈕，轉動旋鈕調節推進器，可使標本前后或左右移動。標本推進器上有游標尺，用以標本在視野中的位置。游標尺一般由主標尺(A)和副標尺(B)組成。副標尺的分度為主標尺的 9/10。使用時，首先看副標尺的 0 點位置，然后看主、副標尺的重合點。如圖 1-2 所示，副標尺 0 點在主標尺 26與 27 之間，副標尺 2 與主標尺的 28 一致，即 6 與主標尺上的一個分度線正對，則此標尺所示的數值為 26.2 mm。2. 光學部分圖 1-2 游標尺及其用法(1) 目鏡：裝在鏡筒的頂端，放大倍數有 5-25 倍等數種，“5×”即放大 5 倍， “10×”即 10 倍。目

8、鏡內常常還裝有一根指針，用以指示觀察標本。(2) 物鏡：嵌裝在旋轉盤上，一般分為低倍鏡、高倍鏡和油鏡三種。其上刻有8×或 10×為低倍鏡；40×或 45×為高倍鏡；90×或 100×為油鏡，油鏡頭末端常有一黑色或紅色的圈，有的標有 oil 等字樣，以便識別。另外，物鏡上還標有 0.25、0.65、1.25 等數字，表示鏡口率(NA)的符號，數字越大，表示其分辨能力越大。各物鏡的長短不同，一般是越短的放大率越低，越長的放大率越高。有的鏡頭還標有160/0.17，160 表示目鏡至物鏡轉換器平面的距離不能小于 160 mm，0.17 表示

9、蓋玻片厚度不得超過 0.17 mm，如蓋玻片厚度超過 0.17 mm，超過物鏡的焦距調節范圍， 就不能看清楚標本。顯微鏡放大倍數=目鏡放大率×物鏡放大率。例如所使用的目鏡是 10×，物鏡是 40×，則放大倍數為 400 倍。3. 照明部分(1) 鏡座上有內置電光源，可通過旋轉鏡座側面的光強調節旋鈕來調節視野照明度。(2) 聚光鏡：由幾組透鏡組成，裝于載物臺下方，其作用是匯聚光線，增強視野的亮度(鏡下所看的范圍叫視野)，聚光器的一側有一個螺旋，旋動它可升降聚光鏡。聚光鏡上升時可增強反射光，下降時可減弱反射光。(3) 光圈：聚光鏡底部的一個圓環結構，為多片半圓形的薄金

10、屬片疊合組成。在圓環外緣有一突起的小柄，撥動它能使金屬薄片弱，使物象更清晰。或合攏，用以控制光線的強(二) 顯微鏡的使用方法用右手握住鏡臂，左手托鏡座，從鏡箱內取出顯微鏡，把顯微鏡放在身前稍左側的實驗臺上，鏡臂對著胸前，使鏡筒向前方。鏡座與桌邊距離約 6.66 cm(2 寸)， 坐于適當高度的實驗凳上進行操作。1. 低倍鏡的使用(1) 先向上轉動粗調焦器，使載物臺上升直至遇到阻力。轉動旋轉盤，使低倍鏡對準通光孔，即能聽到“咔”的固定響聲，同時手也感到有阻力，說明物鏡與鏡筒已經成一直線。(2) 對光：打開光圈，旋轉聚光器升降螺旋，使聚光器升到差不多與載物臺平齊的位置。(3) 放置玻片標本：將標本

11、片有蓋玻片的一面（標本面）向上置于載物臺上，玻片兩端以彈簧夾，然后調節推片器，使標本對準通光孔。(4) 調焦：從側面觀察，轉動粗調焦器，使載物臺上升，當低倍鏡頭距標本約0.5 cm 時，從目鏡上觀察（注意兩眼須同時觀察），慢慢向下或向上轉動粗調焦器，直至視野出現清晰的物象為止。如物象不在視野，可調節推進器移動玻片標本的位置，注意玻片移動方向與物象移動方向恰好相反。2. 高倍鏡的使用：使用高倍鏡須依照上述步驟，先在低倍鏡下找到物象后，然后把要進一步觀察的部分移到視野，調節到最清晰的程度后，才能進行以下操作：(1) 轉動旋轉盤，使高倍鏡與鏡筒成一直線，轉換高倍鏡時速度要慢，特別當心高倍鏡是否碰觸到

12、玻片，如碰到玻片表明低倍鏡的焦距沒有調好，應重新調節。(2) 調焦：用左眼從目鏡觀察，這時物象往往不甚清楚，可用細調焦器慢慢向上或向下轉動(切勿用粗調焦器)，轉動范圍不宜過大，一般只需向上或向下轉動一圈，就能清晰地看到物象。需要更換玻片標本時，先轉動粗調焦器使載物臺下降后，才能取下玻片標本。(三) 低倍鏡和高倍鏡使用練習1. 觀察字母裝片：取一張字母裝片，先用低倍鏡觀察，反復練習對光、調光， 標本放置和調節焦距等。如將玻片前后左右移動時，注意物象與玻片移動方向是否一致，玻片上的字母是正象還是反象？為什么？2. 觀察頭發交叉裝片：取一張頭發交叉裝片，先用低倍鏡觀察，找到兩根頭發后，再將頭發交叉點

13、移動視野，然后換高倍鏡觀察，再微微轉動細調焦器，觀察不同層次，判定哪條頭發在上方，哪條位于下方。3. 觀察纖維交叉裝片：取一張纖維交叉裝片，先用低倍鏡觀察，找到兩根纖維后，將纖維交叉點移動視野，然后換高倍鏡觀察，再轉動細調焦器，觀察不同層次，判定哪條纖維在上方，哪條位于下方。四、注意事項(一) 持取顯微鏡時應右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，不能用以防止目鏡從鏡筒滑出。隨便斜提，(二) 顯微鏡用完后，必須將物鏡、目鏡等用擦鏡紙沿順時針方向順序擦拭， 切勿口吹、手摸或用粗布揩擦，勿用乙醇及其他試劑，以免侵蝕載物臺或鏡頭。(三) 使用顯微鏡應先用低倍鏡調節光源，如觀察組織細胞或染色較淺的標本時，要適當關

14、小光圈，使物象清晰。(四) 放置玻片標本時，應將有蓋玻片的一面（標本面）向上，用標本夾輕輕玻片的兩端，再把要觀察的部分對準通光孔的正不僅不易找到物象，并且容易壓碎玻片，損傷物鏡。如果玻片標本放反了，(五) 觀察時要兩眼齊睜，用左眼從目鏡中尋找物象，仔細觀察，用右眼看紙繪圖。使用低倍鏡用粗調焦器調節物距，使用高倍鏡必須用細調焦器調節物距。粗、細調焦器都不能只做單方向旋轉，如一直上升粗調焦器會使載物臺被鎖死。反之， 如一直下降會壓碎玻片。(六) 不要隨意取出物鏡，以防灰塵落入。切勿拆卸任何零件，以防意外損失。(七) 顯微鏡用完后，應轉動粗調焦器使載物臺徐徐下降，取下玻片，并轉動旋轉盤，使物鏡離開聚

15、光鏡，下降鏡筒使物鏡接近載物臺，再裝入箱內。1. 思考題：(1) 怎樣區分低倍鏡、高倍鏡和油鏡？為什么在使用高倍鏡的時候，必須從低倍鏡開始？(2) 如在高倍鏡下未找到你所要看的物象，可能的原因有哪些？(3) 經過哪些步驟才能在物鏡下找到清晰的物象？2. 實驗作業：簡述光學顯微鏡的使用方法。(李麗)實驗二細胞的基本形態與結構一、目的要求1.掌握普通光學顯微鏡下動物細胞的基本形態結構，了解細胞所處位置、形態及其與功能的關系；初步掌握臨時制片和顯微繪圖的方法；進一步掌握顯微鏡的正確使用方法。2.3.二、實驗用品(一) 實驗器材顯微鏡、小鑷子、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、擦鏡紙、吸水紙、香柏油(或石蠟

16、油)、二甲苯(或乙醚(二) 實驗試劑液)。生理鹽水、0.25%亞甲基藍染液(或碘液)。(三) 實驗材料人口腔上皮細胞、小鼠小腸上皮切片、牛脊髓神經標本、平滑肌縱切片、蛙血涂片、肝組織切片。(一) 扁平細胞人口腔上皮制片在載玻片滴一滴生理鹽水，取一根牙簽，用鈍端在口腔面頰部輕刮幾下，將刮下的細胞洗于玻片上的生理鹽水中，吸一滴 0.25%亞甲基藍染液(或碘液)滴在標本上，染色 12 分鐘，然后用小鑷子夾取一蓋玻片，使其一側邊緣與載玻片上的液體接觸，慢慢放下，以免產生氣泡。圖 2-1 人口腔上皮細胞圖 2-2 小腸上皮細胞將制好的臨時玻片標本置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡觀察，可見被染成的細胞，成群

17、或分散存在。選擇完整而輪廓清楚的細胞移至視野，再轉換高倍鏡仔細觀察(圖 2-1)。(二) 柱狀細胞小鼠腸上皮切片取小鼠腸上皮切片，先在低倍鏡下找到后，再換高倍鏡進行觀察，可見小鼠腸管內壁有許多向腸腔面突起的褶皺(小腸絨毛)，每一個褶皺的表面都是由一層排列整齊的長柱狀細胞構成(圖 2-2)。(三) 星狀細胞牛脊髓神經細胞在牛脊髓神經細胞標本中有許多被染成的，具有星芒狀突起的細胞為神經細胞，其胞體為不規則的三角形或菱形，周圍有長短不等的突起(稱為樹突與軸突，但不易分辨)。細胞核呈圓形，染色較深(圖 2-3)。(四) 梭形細胞平滑肌切片低倍鏡下可見平滑肌細胞呈長梭形，彼此交錯排列，細胞核呈棒狀或橢圓

18、形，常位于肌細胞的(圖 2-4)。圖 2-3神經細胞圖 2-4 平滑肌細胞圖 2-5圖 2-6 肝細胞蛙紅細胞(五) 圓形細胞蛙血涂片(圖 2-5)(六) 小鼠肝細胞切片的觀察取小鼠肝細胞切片，先在低倍鏡下找到染色均勻、細胞邊界清楚的細胞群， 可見形態各異的肝細胞，轉換高倍鏡，選擇染色適中的細胞，多數肝細胞是不規則的多邊形(圖 2-6)，并進行細胞結構的觀察。繪制人口腔上皮細胞圖，并注明各部分結構的名稱。(一) 碘液稱取碘化鉀 2 g，加 5 ml 蒸餾水，加熱使之溶解，然后溶入 1 g 結晶碘，配成母液，裝入棕色瓶中可長期保存。母液以蒸餾水稀釋成 100 ml，此液可用于細胞結構的顯示。(二

19、) 0.25 %亞甲基藍0.25 g 亞甲基藍溶解于 100 ml 蒸餾水，室溫保存。【附錄】生物學繪圖的要求和方法1. 繪圖基本工具：鉛筆（HB、2B）、直尺、橡皮、繪圖紙等。2. 生物繪圖必須真實、繪圖前應選擇優良的、有代表性的標本，按照實物的形狀、各部分比例、位置及毗鄰關系進行描繪。3. 繪圖需按一定比例，布局整齊美觀，大小適中，圖的下方標注該圖名稱。4. 圖的注釋，應從各部分結構作出水平引線，結構名稱寫于引線末端，書寫要整齊。5. 圖的明暗和立體感可用細圓點的疏密度來表示，必要時可用彩色描出標本的顏色。（陳凌）實驗三細胞的顯微測量法一、目的要求1.2.掌握細胞的顯微測量方法；熟悉細胞顯

20、微測量的原理。二、實驗用品(一) 實驗器材光學顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺。(二) 實驗材料蛙血涂片。細胞的大小，一般可用測微尺加以測量。測微尺由目鏡測微尺和鏡臺測微尺組成(圖 3-1、3-2)。目鏡測微尺是放入目鏡內的標尺，是一塊特制的小玻片，其上有50 或 100 個等分的刻度，每一刻度(小格)的長度隨物鏡放大倍數而發生改變。所以在使用前，應在所采用的放大倍數的物鏡下，用鏡臺測微尺加以標定后，才能代表其實際長度。因為鏡臺測微尺的每格長度是已知的，其標定及測量方法如下：圖 3-1 目鏡測微尺（左）和鏡臺測微尺（右）圖 3-2 目鏡測微尺(上)和鏡臺測微尺(一) 目鏡測微尺標定1. 將鏡臺測

21、微尺置于載物臺，先用低倍鏡，找到鏡臺測微尺的刻度。每一大格為 0.1 mm，每一小格為 0.01 mm（即 10 m）。2. 目鏡測微尺已事先裝入目鏡筒中，轉動鏡筒或移動鏡臺測微尺，使兩標尺之間完全平行。3. 轉換高倍鏡，在視野中使物鏡測微尺任一刻度線與目鏡測微尺的任一刻度線重合為起點，沿兩標尺平行方向，再找到另一重合刻度線為終點，下兩重合線間兩標尺各自的格數，即可算出目鏡測微尺每小格的長度。如低倍鏡下所標定的目鏡測微尺的全長為 50 格，相當于鏡臺測微尺的 68 倍，即可求出目鏡測微尺每小格等于 13.6 m。50681XX1.36 格1.36×10 （m）13.6（m）(二) 細

22、胞的顯微測量1. 取下鏡臺測微尺，換上需要測量的玻片標本，用目鏡測微尺的刻度來測量細胞長度（格數），所得的細胞長度（格數）乘以標定值微米數（m），即為細胞的實際長度。2. 蛙紅細胞的測量：在測量過程中，為了避免細胞之間的誤差，要求分別測量 5 個蛙紅細胞的長徑和短徑，列表并算出其平均值。如果選用不同倍數的目鏡和物鏡時，需重新計算，方法如前述。1. 思考題：細胞測量時，在低倍鏡下標定目鏡測微尺的長度，轉換高倍鏡測量細胞長度，是否需要重新標定？為什么？2. 實驗作業：列表5 個蛙紅細胞的長徑和短徑，并算出其平均值(表 3-1)。表 3-1 蛙紅細胞顯微測量結果：mm編號12345平均長徑短徑（陳凌

23、）實驗四細胞的某些生理活動一、目的要求1.2.3.掌握實驗的基本操作技能和實驗的方法；熟悉細胞膜的滲透性和細胞吞噬作用的原理；了解動、植物細胞膜的滲透性和細胞吞噬作用的過程。二、實驗用品(一) 實驗器材載玻片、蓋玻片、注射器、吸管、尖鑷子、小剪刀、記號筆、吸水紙以及試管。(二) 實驗試劑氯化鈉溶液（10%、0.85%、0.01%）、1%雞紅細胞懸液、肝素抗凝劑（5 00u/ml）、 6%淀粉肉湯（含 0.3%臺盼藍）。(三) 實驗材料洋蔥、雞紅細胞懸液、小鼠腹腔液。(一) 細胞膜的滲透性1. 實驗原理細胞通過細胞膜與周圍環境進行有選擇性的物質交換。物質交換的形式有多種，水常以簡單擴散的方式通過

24、細胞膜。如果細胞內、外存在著滲透壓差別，水較多地由滲透壓低（水的密度高）的一側向滲透壓高（水的密度低）的一側擴散，水較少地向滲透壓低的一側擴散。因此，在高滲環境中，動物細胞因失水而皺縮，而植物細胞由于有細胞壁的存在，細胞膜向細胞內皺縮產生質壁分離現象。在低滲環境中，動物細胞能吸水膨脹直至破裂。2. 實驗方法(1) 雞紅細胞的滲透性在編號 1、2、3 的三張載玻片，各滴雞血一小滴。然后在編號 1 的載玻片上加 1 號溶液一滴，編號 2 的載玻片上滴 2 號溶液一滴，編號 3 的載玻片上滴 3 號溶液一滴，蓋上蓋玻片。5 分鐘后，在顯微鏡下觀察，各載玻片上紅細胞的形態發生了什么變化？將紅細胞的變化

25、結果填入表 4-1。(2) 洋蔥鱗莖內表皮細胞的滲透性(示植物細胞的質壁分離現象)先用吸管滴一滴蒸餾水于干凈的載玻片，然后取一塊洋蔥鱗莖，用尖鑷子撕下一小片內表皮，置于載玻片展平，勿使其折疊和皺縮，再用鑷子夾取一片蓋玻片，并使其與載玻片成 45 度角慢慢放下，將此做好的洋蔥表皮細胞臨時制片置低倍鏡下觀察，可見洋蔥表皮是由許多長方形細胞組成，細胞內有圓形細胞核。換用高倍鏡觀察，每個細胞的外邊均有一層厚厚的細胞壁，細胞壁內側緊貼細胞膜（但不易分辨），在細胞膜與細胞核之間是細胞質。正常細胞的細胞質緊靠著細胞壁內側的細胞膜，并無分離現象。用吸管滴一滴 10%氯化鈉溶液在蓋玻片的一側（不要直接滴在蓋玻片

26、上），隨即用吸水紙在蓋玻片對側邊緣吸水，此時氯化鈉溶液隨之流入蓋玻片下方，再用高倍鏡觀察洋蔥表皮細胞，可觀察到質壁分離現象。3. 實驗結果(1) 雞紅細胞的滲透性在 10% NaCl 的高滲溶液中，雞紅細胞失水皺縮；在 0.85% NaCl 的等滲溶液中，細胞形態維持不變；在 0.01% NaCl 的低滲溶液中，細胞吸水膨脹至破裂。(2) 洋蔥鱗莖內表皮細胞的滲透性當 10% NaCl 溶液流入蓋玻片下方，與洋蔥表皮細胞接觸時，細胞質失水，由于存在細胞壁，細胞膜向細胞內皺縮產生質壁分離現象。(二) 細胞的吞噬作用1. 實驗原理中性粒細胞和巨噬細胞能伸出偽足，把周圍環境中的微生物和其他一些顆粒物

27、質包圍起來，在細胞內形成吞噬泡，然后加以消化。本實驗以注射淀粉肉湯的方法首先誘導小鼠體內巨噬細胞數量增多，再向小鼠腹腔注射雞紅細胞，觀察巨噬細胞吞噬雞紅細胞的過程。2. 實驗方法在實驗前 2 天，每天給小鼠行腹腔注射 6%淀粉肉湯 l ml（含 0.3%臺盼藍，起標記巨噬細胞作用）。實驗時，每個取 23 只注射過淀粉肉湯的小鼠，每只小鼠腹腔各注射 1%雞紅細胞懸液 l ml，25 分鐘后再注射 0.9 %氯化鈉溶液 0.5ml。3 分鐘后，用頸椎脫臼法（一只手用鑷子鼠頸，另一只手捏住鼠尾，向兩端牽拉，直至頸椎脫臼而死）處死小鼠。剖開腹腔，用未裝針頭的注射器直接抽取腹腔液，制成臨時標本片，先用低

28、倍鏡找到標本后，再轉高倍鏡觀察。在高倍鏡下可看到許多圓形或形狀不規則的巨噬細胞，因未染色故不易見到細胞核。其細胞質中含有數量不等的圓形顆粒，這是吞入含臺盼藍的淀粉肉湯造成的。在細胞質中，還可見到少量黃色橢圓形的有細胞核的雞紅細胞，慢慢移動玻片標本，仔細觀察，可見到巨噬細胞吞噬雞紅細胞過程的不同階段的情況：有的紅細胞緊附在巨噬細胞表面；有的紅細胞已部分被巨噬細胞吞入；有的巨噬細胞內已吞入了一個或多個紅細胞形成吞噬泡。四、注意事項(1) 進行活細胞觀察時，由于細胞比較透明，沒有明顯的明暗反差，需適當降低視野亮度。(2) 進行雞紅細胞滲透性觀察時，觀察視野應避開細胞密集部位，多觀察幾個視野，進行比較

29、分析。(3) 小鼠腹腔液注射雞紅細胞后，鏡檢腹腔液時，視野下往往存在這兩種細胞相互重疊，要注意和巨噬細胞的正常吞噬過程區別開來。1. 思考題(1) 在給輸液時，為什么要用等滲溶液(0.9% 氯化鈉溶液)?(2) 解釋洋蔥表皮細胞發生質壁分離的原因。2. 實驗作業(1) 填下表(表 4-1)果進行分析。雞紅細胞在三種不同氯化鈉溶液中的形態變化，并對結表 4-1 在三種不同濃度氯化鈉溶液中雞血紅細胞的形態變化溶液編號NaCl 濃度紅細胞形態變化原因分析(2) 繪小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的過程圖(包括開始、進入和吞入胞內三個階段)，并注明各部分結構的名稱。6% 淀粉肉湯稱牛肉膏 0.3 g、蛋白

30、胨 1.0 g、氯化鈉 0.5 g、可溶性淀粉 6.0 g、臺盼藍 0.3 g， 順序溶解于 100 ml 蒸餾水，煮沸滅菌，4保存，使用時熱水浴融化。(周常文)實驗五細胞的化學成分一、目的要求1.2.3.掌握生物大在細胞內的存在部位；熟悉細胞內化學成分的顯示原理；了解細胞內化學成分的檢測方法。二、實驗用品(一) 實驗器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸水紙。(二) 實驗試劑燈、火柴、刀片、小燒杯、剪刀、鑷子、吸管、碘液、乙醚、95%乙醇、甲基綠-派洛寧液、2 %過氧化氫液、5 %三氯醋酸液、聯苯胺混合液、1 %番紅液、0.1 %酸性固綠液、0.1 %堿性固綠液、5 %硫酸銅液。(三) 實驗材料動物

31、肝糖原切片、馬鈴薯、小鼠。(一) 淀粉的觀察淀粉(starch)是植物細胞中重要的多糖物質。1. 實驗原理淀粉有直鏈和支鏈之分，遇碘液顯反應，加熱時消失，冷卻時又重新出現。的產生是由于直鏈淀粉遇碘形成不穩定的化合物碘化淀粉之故。2. 實驗方法取馬鈴薯于顯微鏡下觀察。3. 實驗結果徒手切片，放在載玻片上，加一滴革蘭氏碘液，蓋上蓋玻片，低倍鏡下，可見多角形的馬鈴薯細胞內、外有許多大小不一、深淺不同的藍色淀粉顆粒。(二) 細胞內 DNA 和 RNA 的顯示1. 實驗原理甲基綠派洛寧(Methyl green-Pyronin)為堿性，它能分別與細胞內的DNA、RNA 結合而呈現不同顏色。當甲基綠與派洛

32、寧作為混合時，甲基綠和染色質中 DNA 選擇性結合顯示綠色或；派洛寧與核仁、細胞質中的 RNA 選擇結合顯示紅色。其原因可能是兩種的混合染液中有競爭作用，同時兩種核酸都是多聚體，而其聚合程度有所不同。甲基綠易與聚合程度高的 DNA 結合呈現綠色。而派洛寧則與聚合程度較低的 RNA 結合呈現紅色，但解聚的 DNA 也能和派洛寧結合呈現紅色。即 RNA 對派洛寧親和力大，被染成紅色，而 DNA 對甲基綠親和力大，被染成藍綠色。2. 實驗方法：(1) 涂片：將用乙醚麻醉后，打開胸腔，剪開心臟，取心臟血血涂片(圖 5-1)，室溫晾干。(2) 固定： 將晾干的涂片浸入95 %乙醇中固定 510 分鐘，室

33、溫晾干。(3) 染色：在標本上滴數滴甲基綠-派洛寧染色液，染色 510 分鐘，用蒸餾水沖洗，用吸水紙吸去多圖 5-1 血涂片的余水分(注意不要吸得過干)。(4) 觀察：蓋上蓋玻片，鏡檢。3. 實驗結果光鏡下可見細胞核呈綠色，細胞質和核仁區呈淡紅色。(三) 細胞內酸性蛋白和堿性蛋白的顯示1. 實驗原理由于不同的蛋白質所帶的酸性和堿性基團的數目不同。在不同的 pH 溶液中，整個蛋白質所帶的凈電荷多少不同。如果在生理條件下，整個蛋白質所帶負電荷多，則為酸性蛋白質；帶正電荷多，則為堿性蛋白質。據此，可將標本經三氯醋酸處理抽提掉核酸后，用帶負電荷的固綠堿性染液(pH8.28.5)染色，使在此 pH 環境

34、中帶正電荷的堿性蛋白質顯示出來。2. 實驗方法(1) 涂片：將室溫晾干。用乙醚麻醉后，打開胸腔，剪開心臟，取心臟血血涂片，(2) 固定：將晾干的血涂片做好標記，于 95 %乙醇固定 5 分鐘，室溫晾干；(3) 三氯醋酸處理：將已固定的血涂片浸在 60的三氯醋酸中處理 30 分鐘， 流水反復沖洗(一定要反復沖洗去除殘留的三氯醋酸，這是染色成功的關鍵)。(4) 染色：取兩張三氯醋酸處理過的血涂片，分別放入 0.1 %酸性固綠和 0.1 %堿性固綠染液中，分別染色 5 分鐘和 15 分鐘，水洗、晾干、鏡檢。3. 實驗結果顯微鏡下可見經酸性固綠染色的片子因細胞質和核仁中有酸性蛋白分布被染成綠色，細胞核

35、未著色；經堿性固綠染色的片子，只有細胞核被染成綠色，這是堿性蛋白分布的部位。圖 5-2 蛙紅細胞內的酸性蛋白圖 5-3 蛙紅細胞內的堿性蛋白(四) 細胞內過氧化氫酶的顯示1. 實驗原理在生物體內，細胞代謝過程會產生對機體有害的過氧化氫。存在于動、植物組織中的過氧化氫酶，能使過氧化氫分解，生成水放出氧氣，對機體起保護作用。過氧化氫酶系還能把許多胺類氧化為有色化合物，如用聯苯胺混合液處理標本，細胞內的過氧化氫酶能把聯苯胺氧化為或棕色產物(為中間產物聯苯胺藍不穩定，可自然轉變為棕色的聯苯胺腙)。2. 實驗方法(1) 馬鈴薯過氧化氫酶顯示：馬鈴薯徒手切片，取一薄片置于載玻片上，滴加新配制的 2 %過氧

36、化氫溶液，可見組織周圍立即放出大量氣泡，提示植物活組織中有過氧化氫酶存在。若將上述組織放入開水后，再重復上述實驗，觀察其結果是否與上面一致。(2) 小鼠骨髓細胞過氧化氫酶的顯示1) 取小鼠 1 只，以頸椎脫臼法將其處死，迅速剖開其后肢骨的一端剪斷，用注射器針頭吸出骨髓一滴滴到載玻片上，出股骨，將股涂片，室溫晾干。2)3)4)將涂片放入 0.5 %硫酸銅中浸 30 秒1 分鐘。取出涂片，直接放苯胺混合液中反應 5 分鐘，清水沖洗。放入 1% 番紅水溶液中染 1 分鐘，清水沖洗，室溫晾干，鏡檢。3. 實驗結果涂片中可見一些細胞中有或棕色顆粒，為過氧化氫酶存在位置。四、注意事項(一) 制作細胞涂片時

37、只能手持玻片邊緣，切勿觸及玻片表面，以保持玻片清潔，干燥，中性、無油膩。(二) 制作良好的細胞涂片，要求厚薄適宜，頭、體和尾分明，分布均勻，邊緣整齊，兩側留有適當空隙。思考題：簡述細胞內 DNA 和 RNA、過氧化氫酶的顯示原理。實驗作業：繪制酸性蛋白、堿性蛋白、DNA 和 RNA 在細胞中的分布。(一) 碘液稱取碘化鉀 2 g，加 5 ml 蒸餾水，加熱助溶，然后溶入 1 g 結晶碘，配成母液，裝入棕色瓶中可長期保存。母液以蒸餾水稀釋成 300 ml，用于淀粉顯示。(二) 1M 醋酸緩沖液（pH4.8）1. 儲備液A 液：冰醋酸 6 ml 加蒸餾水至 100 ml。B 液：醋酸鈉 13.5

38、g 以 100 ml 蒸餾水溶解。2. 工作液取 A 液 40 ml 與 B 液 60 ml 混勻，調節 pH4.8，4冰箱保存備用。(二) 甲基綠-派洛寧染液1.儲備液 A5%派洛寧水溶液2%甲基綠水溶液蒸餾水配好后置 4冰箱保存備用。儲備液 B1M 醋酸緩沖液(pH4.8) 工作液臨用時混合 AB 液(現用現配)。配制時注意事項(1) 派洛寧可適當加熱助溶。6 ml6 ml16 ml2.16 ml3.4.(2) 甲基綠因批號不同，染色效果差別很大。商品甲基綠常常混雜甲基紫，影響染色效果，應先把藥品放在分液漏斗中，加入足量的氯仿，用力振蕩，然后靜置， 直到洗脫甲基紫為止，最后干燥備用。(三)

39、 0.1 %酸性固綠A 液：取 0.1 g 固綠溶解于 100 ml 蒸餾水。B 液：稱取 50 mg Na2CO3 溶解于 100 ml 蒸餾水。臨用時 A 液和 B 液等體積混合，調節 pH8.28.5。(四) 0.1 %堿性固綠A 液：取 0.1 g 固綠溶解于 100 ml 蒸餾水。B 液：取 0.109 ml HCl，加入蒸餾水至總體積 100 ml。臨用時 A 液和 B 液等體積混合，調節 pH2.02.2。(五) 0.5 %硫酸銅稱取 0.5 g 硫酸銅溶解于 100 ml 蒸餾水。(六) 聯苯胺混合液0.2 g l00 ml 2 滴聯苯胺95%乙醇3%過氧化氫此液臨用時配制。(

40、七) 1 %番紅液稱取 1 g 番紅溶解于 100 ml 蒸餾水。（宋軍）實驗六細胞器的觀察一、目的要求1.2.3.掌握油鏡的使用方法；熟悉組織化學法顯示細胞骨架和線粒體的基本原理和方法；熟悉光學顯微鏡下高爾基復合體、線粒體、中心體和細胞骨架的形態及其在細胞內的分布。二、實驗用品1. 實驗器材顯微鏡、擦鏡紙、香柏油(或石蠟油)、乙醚毒牙簽、吸水紙。2. 實驗試劑中性紅詹納斯綠染液。3. 標本材料混合液、載玻片、蓋玻片、消牛脊神經節切片(示高爾基復合體)、人口腔上皮細胞臨時制片(示線粒體)、小鼠小腸橫切片(示線粒體)、人成纖維細胞骨架制片(示細胞骨架)、馬蛔蟲(示中心體)。切片(一) 油鏡的使用

41、1. 使用油鏡時必須先在低倍鏡下看到一清晰的物像之后，再換高倍鏡觀察，并使觀察的物象位于高倍鏡的視野。2. 轉動物鏡轉換器，使高倍鏡移向一側，在所要觀察部分的蓋玻片上滴上一滴香柏油（或石蠟油），從側面觀察，轉動物鏡轉換器使油鏡鏡頭移至鏡筒下方與鏡筒成一直線，使油鏡鏡頭與香柏油接觸（注意不宜用力過猛、速度過快，以免壓碎玻片標本，碰碎鏡頭），用兩眼觀察目鏡，慢慢轉動細調焦器，直至視野現清晰的物象為止。3. 油鏡使用完畢后，應立即鏡頭，用出擦鏡紙沾少許二甲苯(或乙醚混合液)順序將鏡頭、玻片標本上的香柏油擦拭（順時針方向） 干凈。(二) 高爾基復合體(Golgi complex)的觀察取牛脊神經節切片

42、，在低倍鏡下觀察，可見到許多大小不等、被染成黃色的近圓形神經節細胞。選擇神經節細胞較多的部位，換用高倍鏡仔細觀察。在高倍鏡下，可見到細胞有一圓形、圖 6-1 脊神經細胞（示高爾基體）空泡狀細胞核，有的核內可見有 12 個發亮的呈淡黃色的核仁。在細胞核周圍的細胞質中，散布著被染成棕褐色、呈細長彎曲的線狀、粒狀和網狀的結構，即是高爾基復合體。換油鏡可更清晰地觀察到高爾基體在細胞內的分布及其形態(圖 6-1)。(三) 線粒體(mitochondrion)的觀察1. 人口腔上皮細胞線粒體的(1) 實驗原理染色及觀察線粒體是細胞內一個重要的細胞器，是細胞進行呼吸的場所。詹納斯綠(JanusGreen B

43、)是線粒體的專一性染色劑，線粒體中細胞色素氧化酶可使保持氧化狀態而呈藍綠色，而在周圍的細胞質中，被還原，成為無色狀態。若用中性紅詹納斯綠混合染色，可使線粒體顯示更為清楚。(2) 實驗方法將清潔的載玻片平放在桌上，然后在載玻片的滴上 23 滴中性紅詹納斯綠染液，再用牙簽鈍端輕刮、獲取口腔上皮細胞，于載玻片染液中混勻，蓋上蓋玻片，染色 78 分鐘，直接鏡檢。(3) 實驗結果高倍鏡下可見在口腔上皮細胞的細胞質中， 散在分布一些被染色呈亮綠色的粒狀或短棒狀 的顆粒，即為線粒體。2. 小鼠小腸上皮細胞線粒體的觀察取小鼠小腸橫切片，依次在低、高倍鏡下進行觀察。低倍鏡下小腸橫切面為一閉合環狀，在環狀內側有向

44、內的突起(絨毛)，突起最上層即為柱狀的小腸上皮細胞，選取一突起移動到視野的正中央，換高倍鏡觀察。在高倍鏡下可以觀察到，突起的最外層細胞排列緊密，細胞多為長方形，細胞核基本位于細胞基底部，突起的細胞排列比較松散，細胞沒有固定形態。最外層細胞即所需觀察的腸上皮圖 6-2 小腸上皮細胞（示線粒體）細胞，選取最外層細胞移動至視野正油鏡進行觀察。，轉換油鏡下，可以觀察到上皮細胞內部靠細胞核和外側細胞膜附近有大量的小黑點，即線粒體。各細胞中的線粒體，其形態、大小及數目不盡相同。(四) 人成纖維細胞骨架(cytoskeleton)的觀察成纖維細胞呈梭形，其中細胞核被染成色小點為核仁。在細胞質中分布著許多被染

45、成深，核內有 23 個大小不等的深藍的纖維，這些是由許多微絲聚集而成的最大微絲束，也稱張力纖維。纖維大多沿不同方向分布，有的則交織成網狀結構(圖 6-3)。(五) 中心體(centrosome)的觀察觀察馬蛔蟲的橫切片。在低倍鏡下，可以看到內有許多處于不同時期的卵，有一層厚厚的膜（注意不要誤以為卵的細胞膜），膜內為大的圍卵腔。尋找其卵處于有絲中期的細胞，然后換高倍鏡觀察。可見細胞兩極各有一粒被染成深的圓形小點（由于切片的關系，有的細胞只能在一極看見，有的在兩極都看不見），這就是中心粒(圖 6-4)。在中心粒的周圍有一層較致密的物質，稱為中心球。中心粒和中心球合稱為中心體。在中心體的周圍，隱約可

46、見纖細放射狀的星射線。星射線一部分參與形成細胞中的紡錘體，高等植物(如洋蔥細胞)沒有中心體。圖 6-3 人成纖維細胞的細胞骨架圖 6-4 馬蛔蟲的中心體思考題：線粒體和細胞骨架染色的原理是什么？實驗作業：繪制光鏡下高爾基復合體的分布圖。中性紅詹納斯綠染液1. 儲備液(1) 1:15 000 中性紅水溶液：中性紅 5 mg 溶于 75 ml 蒸餾水中。(2) 1 %詹納斯綠B 染液：稱取 1 g 詹納斯綠B 溶于 100 ml 蒸餾水，稍加熱（30 45）使之快速溶解，濾紙過濾，即為 1 %原液，裝入棕色瓶備用（為了保持其充分的氧化能力，最好現用現配）。(3) 1 %中性紅溶液：稱取 0.5 g

47、 中性紅溶于 50 ml 蒸餾水中。2. 中性紅詹納斯綠染液：A 液：將 6 滴 1 %詹納斯綠B 水溶液加入到 10 ml 無水乙醇中，然后再加入 2 ml1:15 000 中性紅水溶液，并用黑紙包好貯于冰箱中。B 液：在 10 ml 無水乙醇中，加入 4060 滴 1 %中性紅溶液。將 A 液和 B 液混合在一起，即成中性紅詹納斯綠混合染液，臨用前配制。(林炤華)實驗七細胞的亞顯微結構一、目的要求觀察細胞器的電鏡，掌握細胞各部分亞顯微結構的特點。二、實驗用品各種細胞器的電鏡。觀察電鏡(一) 細胞膜，借助電鏡，認真觀察、辨認各種細胞器的亞顯微結構。細胞膜(cell membrane)又稱質膜

48、(plasma membrane)，是包圍在細胞外的一層薄膜，能使細胞具有一定形態并與外環境分隔，也是細胞與外環境發生一切從而維持細胞內環境穩定的重。人紅細胞膜一般比較厚，1525nm(150250Å)呈三層結構，內外兩層為致密的深色帶(暗帶)，中間一層為疏松的淺色帶(亮帶)，細胞膜的這種結構模式稱為單位膜(unit membrane，圖 7-1)。圖 7-1 人紅細胞質膜的電鏡觀察圖 7-2 線粒體的超微結構(二) 線粒體線粒體(mitochondria)是由兩層化的重要場所。膜圍成的封閉囊狀結構，是細胞進行物質氧電鏡下線粒體由兩層膜圍成，外層叫外膜，內層叫內膜。外膜光滑，內膜向內

49、折疊成為嵴。內外膜之間的腔隙叫膜間腔(外腔)，嵴內的腔嵴叫嵴內腔，外腔與嵴內腔相通。嵴與嵴之間的腔隙叫嵴間腔(內腔)，其中充滿線粒體基質(圖 7-2)， 另外還可見高電子密度的深色顆粒，稱基質顆粒。(三) 內質網內質網(endoplasmic reticulum, ER)由一層膜圍成的相互連通的片層性狀結構。根據其膜上有無白體附著，可分為兩種類型：1. 粗面內質網(rough endoplasmic reticulum, rER)是附著有核糖體的內質網。在線粒體周圍可見許多緊密平行排列的扁囊狀結構，膜的外表面附著許多黑色的顆粒狀結構，此即粗面內質網，顆粒為附著核糖體。上附著的核糖體，并能看到游

50、離的核糖體。顯示(圖 7-3)小鼠肝細胞 rER2. 滑面內質網(smooth endoplasmic reticulum, sER)是無核糖體附著的內質網， 為許多大小不等的分支的囊泡狀或短管狀結構。膜外表面光滑，無核糖體附著，這就是滑面內質網(圖 7-4)。圖 7-3 電鏡下的粗面內質網圖 7-4 滑面內質網電鏡觀察圖 7-5 多聚核糖體圖 7-6 高爾基體的電鏡觀察(四) 核糖體核糖體(ribosome)是由 rRNA和蛋白質組成的非膜相細胞結構，直徑為 1525nm(150-250Å)的致密顆粒。多聚核糖體，是多個核糖體由一條 mRNA 串聯而形成的(圖 7-3、5)結構。(

51、五) 高爾基復合體高爾基復合體(Golgi complex, Golgi)是由一層膜構成的三種不同形態的囊泡狀結構組成，包括以下三個組成部分(圖 7-6、7)：1. 扁平囊：通常由 310 層膜性片層平行排列而成，囊腔狹長。2. 大囊泡：由片層狀扁平囊的末端或聚物質增多而脫落(離開片層扁囊)，形成面逐漸擴大而成，隨著大囊泡內積囊泡。3.泡：常見于扁平囊泡的形成面或其周圍，主要是從內質網上脫落下來，并向扁平囊轉移的過渡性囊泡，因此又叫轉移囊泡。在大囊泡是從面有大囊泡，在形成面有泡面遷移而來的，并含有泡來源于附近的 rER 的過渡成分，蛋白逐漸濃縮成的顆粒。(六) 溶酶體溶酶體(lysosome)

52、是由一層膜圍成的囊泡狀結構，其中充滿各種不同的酸性水解酶，形態差異較大，根據溶酶體內是否含有水解底物可分為兩大類型(圖 7-8、9)：初級溶酶體(primary lysosome)是從高爾基復合體分離出來剛形成的溶酶體，其中含有多種水解酶，尚未進行消化作用。次級溶酶體(secondary lysosome)是正在進行消化作用的溶酶體。圖 7-7 高爾基體的膜囊結構圖 7-8 初級溶酶體圖 7-9 次級溶酶體(七) 細胞骨架細胞質骨架系統包括微管(microtubule, MT)、微絲(microfilament, MF)和中間纖維(intermediate filament, IF)(圖 7-

53、10)：1. 微管的主要成為為微管蛋白，呈中空的纖維狀結構，其外徑為 2025nm， 分散存在于細胞質中，也可構成紡錘體、纖毛、鞭毛、中心體等細胞器。2. 微絲為實心纖維狀結構，直徑為 56nm，分散存在或交織成網狀，或緊密排列成束。3. 中間纖維是介于微管和微絲之間的纖維狀結構，直徑 1020nm，主要存在于上皮、神經和肌細胞中。圖 7-10 電鏡下的細胞骨架圖 7-11 電鏡下中心粒橫截面的結構圖 7-12 電鏡下纖毛橫截面的結構(八) 中心粒中心粒(centriole)在動物細胞有絲過程中比較容易見到。在電鏡下中心粒并不是顆粒狀，而是由兩個短筒狀小體互相垂直排列組成。每個短筒狀小體的筒壁

54、是由九束環狀結構環列而成，略似渦輪及旋葉。每束由 A、B、C 三個更小的微管所組成，稱為三聯微管(圖 7-11)。(九) 纖毛(cilium)纖毛的結構，從纖毛的橫切面觀察，構成筒壁的九組結構中的微管數不是三個而是兩個，筒狀部分還有兩根單微管(圖 7-12)。(十). 細胞核結構的電鏡觀察1. 核膜(nuclear membrane)：核膜是細胞內整個內膜系統的組成部分，由兩層膜構成，包圍著核物質，使之集中于細胞質一定區域內并形成特定形態的核，核膜的兩層膜之間的腔隙稱為核周間隙。內膜平滑，外膜上有的有核糖體附著，其形態與粗面內質網相似。核孔(nuclear pore)周圍有環狀結構組成的核孔復合體(圖7-13、14)。2. 染色質(chromatin)是間期核中能被堿性著色的物質，根據其形態與功能分為兩種類型：常染色質(