1、2022-5-3現代儀器分析現代儀器分析modern Instrumental Analysis 2022-5-32022-5-3第三章第三章 多標記分析儀多標記分析儀 PE VictorTM X4 2022-5-3第三章第三章 多標記分析儀多標記分析儀功能：功能：比色讀數功能比色讀數功能化學發(fā)光功能化學發(fā)光功能熒光讀數功能熒光讀數功能時間分辨熒光讀數功能時間分辨熒光讀數功能第一節(jié)、多標記分析儀原理第一節(jié)、多標記分析儀原理2022-5-3一、比色讀數功能一、比色讀數功能b*c*IIlogAbsorbance02022-5-3酶聯免疫檢測酶聯免疫檢測ELISA*AntibodyEnzyme Co

2、njugateSubstrateStop SolutionPhotometricMeasurementCoating= Antibody= Enzyme*= Incubation, Washing, AspirationPatient Sample (Antigen)= AntigenTest Procedure2022-5-3二、化學發(fā)光功能二、化學發(fā)光功能Luminescence = the emission of light from any substance occurs from electronically excited statesChemiluminescence = li

3、ght emitted by a chemical reactionBioluminescence = type of chemiluminescence chemical reaction is catalyzed by an enzyme important in studies of gene expression and gene regulation2022-5-3三、熒光讀數功能三、熒光讀數功能分子熒光：分子熒光： 基態(tài)基態(tài)( (S0)激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)( (S1、S2激發(fā)態(tài)振動能級激發(fā)態(tài)振動能級) )：吸收特定頻：吸收特定頻率的輻射。率的輻射。符合什么公式？符合什么公式？ 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)

4、基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢。命最短的途徑占優(yōu)勢。符合什么公式？符合什么公式？ 分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。 濃度很低時，熒光強度濃度很低時，熒光強度 If = 2.3 I0 l c = Kc 2022-5-3 鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經紫外光激發(fā)后不鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經紫外光激發(fā)后不僅熒光強度高，而且其衰變時間也長，可達幾百個僅熒光強度高，而且其衰變時間也長，可達幾百個

5、s s，而樣品中蛋白質天然本底熒光的衰變時間為而樣品中蛋白質天然本底熒光的衰變時間為1-10ns1-10ns，相差，相差5-65-6個數量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利個數量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除了非特異干擾的影響。了非特異干擾的影響。 四、時間分辨熒光讀數功能四、時間分辨熒光讀數功能2022-5-3背景熒光背景熒光激激 發(fā)發(fā) 周周 期期超長衰減時間超長衰減時間發(fā)射光強度發(fā)射光

6、強度時間時間檢測窗口檢測窗口四、時間分辨熒光讀數功能四、時間分辨熒光讀數功能2022-5-32022-5-3第二節(jié)第二節(jié) 多標記分析儀的光學系統(tǒng)多標記分析儀的光學系統(tǒng)2022-5-3Photodiode一一 光吸收模塊光路圖光吸收模塊光路圖2022-5-3二二 化學發(fā)光模塊光路圖化學發(fā)光模塊光路圖2022-5-3三三 熒光檢測模塊光路圖熒光檢測模塊光路圖2022-5-3激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒光單色器及設有門控的檢測器光單色器及設有門控的檢測器四四 時間分辨熒光模塊光路圖時間分辨熒光模塊光路圖2022-5-3五五 與分光光度計不同之處

7、與分光光度計不同之處1 1、光路不同、光路不同2 2、樣品池不同、樣品池不同3 3、單色器不同、單色器不同4 4、通量不同、通量不同5 5、樣品量不同、樣品量不同6 6、應用學科不同、應用學科不同2022-5-32022-5-3第三節(jié)第三節(jié) 多標記分析儀的應用多標記分析儀的應用2022-5-3核酸和蛋白質的光吸收檢測核酸和蛋白質的光吸收檢測酶聯免疫檢測（酶聯免疫檢測（ELISA）細胞活性檢測（細胞活性檢測（MTT）酶動力學分析酶動力學分析細菌內毒素檢測細菌內毒素檢測濃度測定濃度測定乙酰膽堿脂酶檢測乙酰膽堿脂酶檢測環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測一、光吸收主要應用一、光吸收主要應用2022-5-3報告基因基因檢

8、測報告基因基因檢測化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光免疫分析核酸定量核酸定量 ( (PCR Quantification) )酶活分析酶活分析活性氧分析活性氧分析二、發(fā)光主要應用二、發(fā)光主要應用2022-5-3濃度檢測濃度檢測活性分析活性分析熒光熒光ELISA酶聯免疫檢測（酶聯免疫檢測（ELISA）研究分子之間相互作用研究分子之間相互作用三、熒光主要應用三、熒光主要應用2022-5-3時間分辨熒光免疫時間分辨熒光免疫激素：甲狀腺激素、甾體類激素。激素：甲狀腺激素、甾體類激素。病毒性肝炎標志物。病毒性肝炎標志物。腫瘤相關抗原。腫瘤相關抗原。藥物。藥物。多肽類。多肽類。四、時間分辨熒光主要應用四、時間分辨熒光主要應用2022-5-3 更廣的動力學范圍更廣的動力學范圍 更強的靈敏度更強的靈敏度 每孔更少的試劑每孔更少的試劑 更少的實驗步驟更少的實驗步驟 信號穩(wěn)定性超過信號穩(wěn)