1、會計學1流式細胞術在白血病中的應用流式細胞術在白血病中的應用23白血病初發異常標記精確診斷準確預后指導治療科研資料殘留監測殘留監測靶向治療靶向治療免疫免疫/ /遺傳學靶標遺傳學靶標MICMMICM診斷診斷4WHO血液腫瘤新分類實驗技術平臺 實施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細胞、細胞遺傳和分子生物學實驗技術平臺以及掌握這類實驗技能并具有專業知識的人員。56Investigative Tools for MM diagnosis and Management(2008 ASH Education Program Book p298)Patient Evaluation 診斷單克隆蛋白數量和

2、特征血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量24小時尿蛋白；總蛋白；本周蛋白尿和血清免疫固定血清自由輕鏈和比例骨髓檢查和骨髓活檢Bone marrow aspiration and biopsy組化免疫分型-克隆檢定，及通過CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余 例患者正常漿細胞中找到檢測殘留MM細胞 終末器官損害評價 全血細胞計數；生化檢查: 血清肌酐和骨鈣測定 預后評估球蛋白，betta-2微球蛋白, LDH, CRP骨髓細胞遺傳學和FISH t(4;14), t(14;16), del 17p 針對某些特定患者的特殊研究7傳統流式細胞術在白血病免疫表型中的應用單參“白血病表型”，陽

3、性比率大多數細胞為腫瘤細胞多為形態學/細胞化學后的確認數據由臨床醫師判斷高分辨流式細胞的優點高分辨流式細胞的優點以多參數正常抗原表達為基礎結果類似病理報告用于原發性診斷與鑒別診斷用于疾病分期，治療選擇療效監測，預后判斷流式細胞術流式細胞術8n必須能涵蓋所有細胞9效地鑒別疾病狀態相關的改變10 I II III IV B Lymphoid Maturation CD 10 FMC 7 CD 34 CD 45 CD 19 CD 20 CD 22 TdT CD 5 CD 23 Antigen Expression 103 102 101 高 分 辨 流 式 細 胞 術 能 夠 鑒 別 和 分 類 所

4、 有 骨 髓 細 胞可可 以以 對對 每每 一一 個個 細細 胞胞 進進 行行 多多 特特 征征 性性 的的 檢檢 測測 并并 對對 其其 相相 應應 的的 系系 列列 和和 成成 熟熟 的的 階階 段段 進進 行行 分分 類類 至至 少少 檢檢 測測 一一 萬萬 個個 細細 胞，胞， 分分 辨辨 率率 達達 到到 0.5 %11 I II III IV V CD 45 CD 33 CD 11b CD 15 CD 34 HLA-DR CD 13 CD 16 Neutrophil Maturation Antigen Density 103 102101 12Wood (2004) Method

5、s Cell Biology 75:559-57613Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-57615髓中胸腺發育階段的T淋巴細胞n光散射異常：FSC和SSC1617R1R2R3R418R1R2R3R41920R1R2R3R4R521R1R2R3R4Date:Name:zhang yixiNo. 090824322R1R2R4R5R623R1R2R3R4R5R1R2R3R4R5MAL T+B 24R1R2R3R4R525R2R3R4R5R1Date:Name: xu zhongyuNo. 090817526R1R2R3R4R527大B細胞淋巴瘤28R1

6、R2R3R4R5R6Name: he yinyanDate:No. 090727829R1R2R3R430R1R2R3R4R5R6R73132R1R2R3R43334n35例，需結合多種檢查，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。36的殘存白血病細胞。的殘存白血病細胞。n如果能夠準確檢測患者體內殘存的白血如果能夠準確檢測患者體內殘存的白血病狀態，可以有的放矢地進行治療，使病狀態，可以有的放矢地進行治療，使患者避免許多不必要的痛苦。患者避免許多不必要的痛苦。37MRDCRPrimary leukemiaOSChemotherapiesAuto SCTAllo SCTInductionLeuk

7、emic cells1012 1010 109 108 107 106100%1% 0.1% 0.01 0.001 3839Molecular Measurements of Treatment ResponseClinical Application(2008 ASH Education Program Book p367) Application Action 檢測治療早期的反應佳 加強治療 檢測治療早期的反應差 無需加強治療 檢測復發加強治療，準備HSCT HSCT前MRD 評估 優化HSCT的時間 HSCT后MRD評估 調整免疫抑制治療時間，等 臨床試驗結束時的MRD評估 評價新的抗A

8、LL藥物或治療的結果40n殘存白血病細胞101010101001234data.002CD33 PE -462009.7 化療 D33D33：FCMFCM：可見殘留，CD33+CD19+細胞約占0.04%。基因基因： AML1/ETO 陽性。101010101001234data.004SSC-Height -101010101001234data.004CD33 PE -47101010101001234Data.004CD33 PE -101010101001234Data.002SSC-Height -48病例資料：病例資料：男，3歲，2007.3 初發初發FCMFCM印象印象：在CD4

9、5/SSC點圖上設門分析，CD45弱表達分布區域可見異常細胞群體，約占有核細胞的45%，表達HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴細胞白血病（普通型B-ALL）。 基因基因：BCR/ABL陰性。02565127681024Data.003SSC-Height -101010101001234Data.010CD10 FITC -492008.11 化療 第第2020個月個月：FCMFCM：未見明顯表型異常的殘留白血病細胞。（未附圖）基因基因：未做。2009.09 化療 第第3030個月個月：FCMFCM：可見殘留，在C

10、D45dim/-區域可見約1.87%的CD10+CD19+CD20-細胞和約1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+細胞，考慮為殘留白血病細胞。（見右圖）基因基因：未做。 101010101001234data.002CD10 FITC -101010101001234data.002CD10 FITC -101010101001234data.003CD34 PE -101010101001234data.003Anti-HLA-DR FITC -101010101001234data.002SSC-Height -502010.03 化療+DC-CIK 第第3636個月個月：FCMF

11、CM印象印象：在CD45/SSC點圖上設門分析， CD45陰性略向原始延伸的分布區域可見異常細胞群體，與有核紅細胞無分界，共約占有核細胞的89%，主要表達HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。提示：結合病史，考慮急性B淋巴細胞白血病（普通型B-ALL）復發。 基因基因：ALL基因篩查示TSL/ERG陽性，其余均陰性。 02565127681024Data.006SSC-Height -101010101001234Data.006CD22 PE -101010101001234Data.007CD10 FITC -101010

12、101001234Data.007CD10 FITC -51病例資料：病例資料：女，3歲，2008.10 初發初發FCMFCM印象印象：在CD45/SSC點圖上設門分析，原始細胞分布區域可見異常細胞群體，約占有核細胞的59%，與淋巴細胞分界不清，表達HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。提示：急性T淋巴細胞白血病 。 基因基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均陰性。02565127681024Data+.002SSC-Height -522009.05 化療 第第7 7個月個月：FCMFCM印象印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%） 、

13、CD34+cCD3+（0.11%） 、CD7+CD117+ （0.07%）等免疫表型明顯異常的T淋巴細胞，考慮為殘留白血病細胞。 基因基因：未做。 101010101001234Data.002CD33 PE -101010101001234Data.003CD7 FITC -101010101001234Data.005cCD3 PE -101010101001234Data.002Anti-HLA-DR FITC -101010101001234Data.002SSC-Height -53WHO血液腫瘤新分類實驗技術平臺 實施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細胞、細胞遺傳和分子生物學實驗技術平臺以及掌握這類實驗技能并具有專業知識的人員。54Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-576Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-57656R1R2R4R5R657例，