1、會計(jì)學(xué)1a和和b地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷Thalassemia地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國南方不同高發(fā)地中國南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率區(qū)人群攜帶率 1 23%研究背景研究背景第1頁/共50頁中國南方中國南方和和地貧的人群攜帶率地貧的人群攜帶率第2頁/共50頁珠海珠海韶關(guān)韶關(guān)廣州廣州汕頭汕頭湛江湛江廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查血遺傳流行病學(xué)調(diào)查西西南南東東北北中中Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22. 第3頁/共5

2、0頁廣東省人群中廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率第4頁/共50頁廣東省人群中廣東省人群中地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率第5頁/共50頁廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測數(shù)據(jù)廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測數(shù)據(jù)（95%CI） 重型或中間型重型或中間型地貧：地貧： 645 （480，835） BartsBarts胎兒水腫綜合征：胎兒水腫綜合征：1714 （1498，1945） 血紅蛋白（血紅蛋白（HbHb）H H 病：病： 1677 （1467，1901）第6頁/共50頁廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率 (1998-2001) 第7頁/共50頁地貧純合子：致死性出生缺陷地貧純合子：致

3、死性出生缺陷重型重型 地貧地貧:胎兒水腫綜合征胎兒水腫綜合征 早產(chǎn)死胎或出生前后死亡早產(chǎn)死胎或出生前后死亡 可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥 無理想治療方法無理想治療方法重型重型 地貧地貧 出生后出生后1 1年內(nèi)發(fā)病年內(nèi)發(fā)病 多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折 輸血和去鐵治療可維持輸血和去鐵治療可維持, ,代價(jià)昂貴代價(jià)昂貴第8頁/共50頁研究地中海貧血的意義研究地中海貧血的意義 重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問題重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問題 通過產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施通過產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施 WHO優(yōu)先推薦在

4、發(fā)展中國家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病優(yōu)先推薦在發(fā)展中國家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病 預(yù)防地貧是中國南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求預(yù)防地貧是中國南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求研究背景研究背景第9頁/共50頁應(yīng)用于地貧應(yīng)用于地貧 控制的人群篩查策略控制的人群篩查策略 基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃 基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃 擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃第10頁/共50頁中國南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃中國南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃 時(shí)間：時(shí)間： 基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃: : 廣州市婦嬰醫(yī)院廣州市婦嬰醫(yī)院 占廣州市出生數(shù)的占廣州市出生

5、數(shù)的 1 / 17 策略：孕期雜合子篩查策略：孕期雜合子篩查 結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施第11頁/共50頁地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程被檢對象被檢對象（婚前或孕中期）（婚前或孕中期）血液學(xué)分析血液學(xué)分析（MCV ，Hb A2變化）變化）排除地貧排除地貧地貧攜帶地貧攜帶者者遺傳咨詢，配偶檢查遺傳咨詢，配偶檢查血液學(xué)分析血液學(xué)分析（MCV Hb A2變化變化）地貧攜帶者地貧攜帶者排除地貧排除地貧遺傳咨遺傳咨詢詢雙親基因分雙親基因分析析胎兒產(chǎn)前診斷胎兒產(chǎn)前診斷第12頁/共50頁篩查結(jié)果篩查結(jié)果第13頁/共50頁異常血紅蛋白篩查結(jié)果異常血紅

6、蛋白篩查結(jié)果第14頁/共50頁廣州市婦嬰醫(yī)院廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003 1993-2003 篩查計(jì)劃的結(jié)果篩查計(jì)劃的結(jié)果第15頁/共50頁( contd )第16頁/共50頁 篩查發(fā)現(xiàn)的陽性孕婦或陽性夫婦篩查發(fā)現(xiàn)的陽性孕婦或陽性夫婦 地貧地貧1 地貧地貧 地貧地貧 地貧地貧 %Total of 4503 couples screened 54例例Barts水腫兒和水腫兒和Hb H病病 18例例重型重型地貧地貧 2804 1783 198對對 83對對產(chǎn)前診斷：產(chǎn)前診斷：187 例例 地貧地貧 82例例 地貧地貧 廣州市婦嬰醫(yī)院廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003 1993-2003 篩查

7、計(jì)劃的結(jié)果篩查計(jì)劃的結(jié)果第17頁/共50頁產(chǎn)前診斷結(jié)果產(chǎn)前診斷結(jié)果第18頁/共50頁地中海貧血的產(chǎn)前診斷地中海貧血的產(chǎn)前診斷 胎兒取樣技術(shù)胎兒取樣技術(shù) DNA診斷技術(shù)診斷技術(shù) -地貧的診斷地貧的診斷 -地貧的診斷地貧的診斷第19頁/共50頁羊膜穿刺羊膜穿刺 (amniocentesis) 抽取胎兒樣品示意圖抽取胎兒樣品示意圖第20頁/共50頁DNADNA診斷技術(shù)診斷技術(shù) 多重多重PCR （multiplex PCR） 等位基因特異性性寡核苷酸雜交（等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO） 反向點(diǎn)雜交反向點(diǎn)雜交 （RDB） 變性高效液相色譜（變性高效液相色譜（DHPLC） 多重引物延伸多重引物延伸

8、DHPLC（multiplex PE / DHPLC）第21頁/共50頁用于用于 和和 地貧產(chǎn)前診斷的方法地貧產(chǎn)前診斷的方法 (1993-2003 )(1993-2003 )第22頁/共50頁胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜Patient2Patient3FetalAdultoriginA2FABartsDiagnosisPatient 1 Barts hydrops fetalisPatient 2 Hb H diseasePatient 3 thal trait第23頁/共50頁本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù)本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù)第24頁/共50頁 -50kb -10kb 0k

9、b 10kb 20kb 30kb (-SEA) Deletion (- 4.2) Deletion (- 3.7) Deletion 2 1導(dǎo)致導(dǎo)致地貧的不同類型的基因缺失地貧的不同類型的基因缺失第25頁/共50頁采用采用Gap-PCRGap-PCR進(jìn)行進(jìn)行-SEA地貧基因缺失的基因分型地貧基因缺失的基因分型第26頁/共50頁- -SEASEA地貧缺失的基因分型結(jié)果地貧缺失的基因分型結(jié)果第27頁/共50頁三個(gè)三個(gè)地貧家庭的產(chǎn)前診斷結(jié)果地貧家庭的產(chǎn)前診斷結(jié)果第28頁/共50頁與美國商品化與美國商品化UBIUBI試劑盒的對比研究試劑盒的對比研究第29頁/共50頁第30頁/共50頁Transcrip

10、tionRNA splicingInitiator codonFrameshiftN o n s e n s e codonDouble heterozygote中國南方中國南方地貧突變的變異類型和位置地貧突變的變異類型和位置EXON 1IVS 1 EXON 2EXON 3 IVS 2第31頁/共50頁 Fragment size: A = 453 bp B = 364 bp C = 423 bp DHPLC DHPLC 分析人分析人珠蛋白基因珠蛋白基因: : 三個(gè)三個(gè)PCRPCR片段擴(kuò)增片段擴(kuò)增123ABC第32頁/共50頁DHPLCDHPLC的三種的三種 操作模式操作模式 非變性分析（非變

11、性分析（ 50 C ） 雙鏈雙鏈DNA大小測定大小測定 半變性分析（半變性分析（ 52-78 C ） 突變鑒定突變鑒定 全變性分析（全變性分析（ 78-80 C ） Oligo和和RNA分析分析第33頁/共50頁P(yáng)CRPCR產(chǎn)物的半變性分析產(chǎn)物的半變性分析（ 52-78 C ） Wild typeMutant HeteroduplexesHomoduplexes Reference Samples PCR Products第34頁/共50頁第35頁/共50頁DHPLC DHPLC 檢測檢測地貧突變的結(jié)果地貧突變的結(jié)果CD2/N-29/NCD2/CD14-15CD17/NCD2/CD27-28-

12、28/CD27-28/CD2/-98CD26/NCD27-28/N-73/N-73/N-28/NFragment A第36頁/共50頁CD71-72/IVS-16N/NCD41-42/IVS-16CD71-72/NIVS-16/NCD41-42/N？CD38/NCD71-72/NCD41-42/CD41-42Fragment BDHPLC DHPLC 檢測檢測地貧突變的結(jié)果地貧突變的結(jié)果第37頁/共50頁N/NIVS-654/NIVS-654/654IVS-666/NIVS-654/666Fragment CDHPLC DHPLC 檢測檢測地貧突變的結(jié)果地貧突變的結(jié)果第38頁/共50頁RDB

13、analysis: application to rapid prenatal diagnosisfor eight thalassaemia mutations.GenotypeFather CDs41-42 ( CTTT) / N MotherIVS-2-654 (C T) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N 第39頁/共50頁83 83 例例 地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果第40頁/共50頁( contd )第41頁/共50頁266 266 例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果 * Th

14、ree Hb H disease involved第42頁/共50頁 第43頁/共50頁 第44頁/共50頁廣東省廣東省 和和地中海貧血預(yù)防模式研究地中海貧血預(yù)防模式研究 現(xiàn)場：廣東省四會市現(xiàn)場：廣東省四會市 時(shí)間：時(shí)間： 人口人口: 40: 40萬萬 目標(biāo)目標(biāo): : 為制定為制定20062006年廣東省全境地貧年廣東省全境地貧 預(yù)防計(jì)劃提供方法和經(jīng)驗(yàn)預(yù)防計(jì)劃提供方法和經(jīng)驗(yàn) 第45頁/共50頁產(chǎn)前遺傳學(xué)的臨床和公共衛(wèi)生問題產(chǎn)前遺傳學(xué)的臨床和公共衛(wèi)生問題第46頁/共50頁( contd )第47頁/共50頁結(jié)論結(jié)論 我們建立的基于醫(yī)院水平的孕婦人群的篩查我們建立的基于醫(yī)院水平的孕婦人群的篩查 計(jì)劃可有效的降低計(jì)劃可有效的降低和和地貧的出生率地貧的出生率 第48頁/共50頁致謝致謝 廣州市婦嬰醫(yī)院廣