1、第十一章第十一章基本要求基本要求一、掌握抗生素類藥物的結構特點與分析方法一、掌握抗生素類藥物的結構特點與分析方法之間的關系。之間的關系。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原理、測定方法與計算。理、測定方法與計算。四、熟悉抗生素類藥物雜質檢查的方法。四、熟悉抗生素類藥物雜質檢查的方法。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。第一節第一節 概述概述1. 抗生素藥物的特點抗生素藥物的特點化學純度較低化學純度較低活性組分易發生變異活性組分易發生

2、變異穩定性差穩定性差2. 微生物學法與理化法的比較微生物學法與理化法的比較微生物檢定法微生物檢定法理化法理化法以抗生素對微生物的殺傷或抑制程以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標衡量抗生素的生物效價度為指標衡量抗生素的生物效價 根據抗生素結構特點，利用其根據抗生素結構特點，利用其特有的理化性質測定其含量特有的理化性質測定其含量已知或新發現的抗生素、精致品或已知或新發現的抗生素、精致品或粗制品均能測定粗制品均能測定 測定化學結構已知、已提純的測定化學結構已知、已提純的抗生素抗生素靈敏度高、樣品需用量小、反映抗靈敏度高、樣品需用量小、反映抗生素的醫療價值，但操作步驟多、生素的醫療價值，但操作步驟多

3、、費時、費時、誤差大誤差大 迅速、準確、專屬性高、樣品迅速、準確、專屬性高、樣品需用量小、操作簡單、省時需用量小、操作簡單、省時3.3.抗生素的活性以效價單位來表示：抗生素的活性以效價單位來表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某種抗生素的有效成中含有某種抗生素的有效成分的多少，用單位（分的多少，用單位（u u）或）或g g 表示。表示。 1 1mgmg青霉素青霉素G G鈉鹽定為鈉鹽定為16671667單位單位 1 1mgmg青霉素青霉素G G鉀鹽的單位（鉀鹽的單位（u u） =1667=1667356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分類分類（按結

4、構與性質）：（按結構與性質）： 內酰胺類、氨基糖苷類、內酰胺類、氨基糖苷類、 四環素類、大環內酯類、四環素類、大環內酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗生素類第二節第二節 內酰胺類抗生素內酰胺類抗生素 青霉素類青霉素類NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（母核（6-6-氨基青霉烷酸）氨基青霉烷酸）AB頭孢菌素類頭孢菌素類7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素鉀、鈉）（青霉素鉀、鈉）NH2CONSOHNCOOHC

5、H3CH3CH2氨芐西林氨芐西林（氨芐青霉素）（氨芐青霉素）阿莫西林阿莫西林（羥氨芐青霉素）（羥氨芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素頭孢氨芐頭孢氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2頭孢拉啶頭孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性結構特點與性質結構特點與性質一、一、NaN

6、a與堿金屬與堿金屬(Na(Na+ +、K K+ +) )成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 與有機堿與有機堿( (普魯卡因普魯卡因) )成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NOS頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共軛體系（三）共軛體系 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數有苯環取代基多數有苯環取代

7、基 NOS UVUV（四）（四）內酰胺環內酰胺環 水溶液水溶液 不穩定不穩定 干燥純凈干燥純凈 穩定穩定 不穩定不穩定性因素性因素四元環張力大四元環張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（某些金屬離子） （溫度）（溫度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反應青霉素的降解反應青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羥胺酸?；u胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類 -

8、內酰胺酶內酰胺酶降解降解失效失效（一）呈色反應（一）呈色反應1. 1. 羥肟酸鐵反應羥肟酸鐵反應-內酰胺類內酰胺類呈色呈色羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物Fe3+/3H+鑒別試驗鑒別試驗 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 內酰胺類內酰胺類NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （紅、棕、褐）（紅、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反應茚三酮反應 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 藍紫色藍紫色3. 雙縮脲反應雙縮脲反應- - - CONH（開環分解）（開環分解） - 內酰胺類內酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅紫紫

9、4. 與重氮苯磺酸反應與重氮苯磺酸反應橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮5. 與變色酸與變色酸- -硫酸反應硫酸反應活潑活潑“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基側側鏈鏈含含“（分解分解）變色酸變色酸顯色顯色1. K+、Na+的火焰反應的火焰反應（二）各種鹽的反應（二）各種鹽的反應 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + Ac白白 K+2. 沉淀反應（青霉素鹽）沉淀反應（青霉素鹽）

10、遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素鈉青霉素鈉青霉素鉀青霉素鉀緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反應偶合反應 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反應偶合反應紅紅 芳伯氨基芳伯氨基4. 與三硝基苯酚反應與三硝基苯酚反應 三三硝硝基基苯苯酚酚二二芐芐基基乙乙二二胺胺芐芐星星青青霉霉素素NaOH二芐基乙二胺二芐基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光譜法光譜法（三）（三）1、 UV法法樣品、分解產物樣品、分解產物n

11、m339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光譜譜圖圖頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素V鈉鈉 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排2、IR法法3180cm-1 N-H內酰胺內酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林為例以阿莫西林為例色譜法色譜法（四）（四）1、 TLC法法對照品對照法對

12、照品對照法和和斑斑點點顏顏色色比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件fR2、 HPLC法法Rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件三、雜質檢查三、雜質檢查 藥物藥物 檢查項目檢查項目 檢查方法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關物質和異構體有關物質和異構體 HPLCHPLC法法 頭孢氨芐頭孢氨芐 有關物質有關物質 反相反相TLCTLC法法 青霉素鉀（鈉）青霉素鉀（鈉） 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 1. 1.頭孢他啶聚合物的測定頭孢他啶聚合

13、物的測定 固定相：葡聚糖凝膠固定相：葡聚糖凝膠G-10G-10（ 40120m 40120m ） 流動相流動相A A：3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.01mol/L0.01mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 流動相流動相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉 對照品溶液：頭孢他啶對照品對照品溶液：頭孢他啶對照品 100g/ml100g/ml1 1）系統適用性試驗：理論塔板數和拖尾因子）系統適用性試驗：理論塔板數和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml藍色葡聚糖藍色葡聚糖20002000、流動相、流動相A A測定；重測定；重復性用對照品溶液、流動相復性用對照品溶液、流動相B

14、B測定。測定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面積的，峰面積的RSDRSD應小于應小于5.0%5.0%。2 2）測定方法）測定方法 進樣供試液，用流動相進樣供試液，用流動相A A；進樣對照液，；進樣對照液，用流動相用流動相B B。以外標法計算，含頭孢他啶聚合。以外標法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過物以頭孢他啶計不得超過0.3%0.3%。2.2.頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查 固定相：固定相：ODSODS 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇（甲醇（62:38

15、62:38） 1 1）頭孢呋辛酯）頭孢呋辛酯2 2- -異構體的制備：頭孢呋辛酯對異構體的制備：頭孢呋辛酯對 照品照品+ +流動相流動相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2 2- -異構體。異構體。2 2）系統適用性試驗：各異構體之間的）系統適用性試驗：各異構體之間的R1.5R1.5，以，以 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯A A異構體計算異構體計算n1500n1500。 3 3）異構體：）異構體： ttR1R1 相對保留時間相對保留時間 r r1212=- 1-=- 1-被測物被測物 ttR2 R2 2-2-標準物標準物異構體異構體 相對保留時間相對保留時間 判斷判斷B B異構體異構體 0.85 0.85 供試液譜

16、圖中供試液譜圖中A A異構體的峰面積異構體的峰面積A A異構體異構體 1.0 1.0 與與A A、B B異構體峰面積和之比應異構體峰面積和之比應 為為0.0.480.55.55。 3.3.頭孢氨芐中有關物質的檢查頭孢氨芐中有關物質的檢查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅膠固定相：活化后的硅膠G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干 展開劑：展開劑：0.1mol/L0.1mol/L枸櫞酸枸櫞酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氫二磷酸氫二 鈉鈉- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供試液

17、：本品供試液：本品 50mg/ml 50mg/ml 對照液（對照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（2 2）：）：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（3 3）：）：7-7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸氨基去乙酰氧基頭孢烷酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml結果判斷結果判斷：供試液如顯雜質斑點，與對：供試液如顯雜質斑點，與對照液（照液（2 2）（）（3 3）位置相同上所的斑點比）位置相同上所的斑點比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質斑較，其顏色不得更深；如顯其他雜質斑 點，與對照液（點，與對照液（1 1）所顯的主斑點

18、比較，）所顯的主斑點比較，其顏色不得更深。其顏色不得更深。4.4.青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查：青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查： 供試液供試液 1.80mg/ml1.80mg/ml， 結果判斷：結果判斷：A A280280不得大于不得大于0.100.10- -8 8I2 2 I+ +H碘量法碘量法（一一）1. 原理原理水解產物水解產物6 6 2 2 2 22 22 22 2OSNaNaIOSNaI定量過量定量過量剩余剩余ChP四、含量測定四、含量測定（水解水解）NaOH頭孢菌素族頭孢菌素族青霉素族青霉素族反應分兩步進行：反應分兩步進行：1. 1. 水解反應水解反應( (按化學計算量進行按化學計算量進

19、行) )2. 2. 氧化氧化- -還原反應還原反應( (無固定的量關無固定的量關系，受溫度、系，受溫度、PHPH值和時間等因素值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定用標準品平行對照測定) )NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+ 5H2O+ 2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+2NaCl+8HI第一步第一步第二步第二步V樣空樣空V樣樣對照液對照液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 V對空對空V對對2

20、. 方法方法供試液供試液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 空白試驗空白試驗A、消除樣品已降解產物的干擾消除樣品已降解產物的干擾B、消除樣品中其他消耗碘的雜消除樣品中其他消耗碘的雜 質的干擾質的干擾C、消除碘揮發造成的誤差消除碘揮發造成的誤差 以未經水解的樣品作空白測定以未經水解的樣品作空白測定空白空白樣品樣品I2Na2S2O3I-I2 采用標準品平行對照測定采用標準品平行對照測定A、可消除溫度、可消除溫度、pHpH、操作、環、操作、環 境等條件的影響境等條件的影響B、使本法測定結果與微生物檢定使本法測定結果與微生物檢定 法一致法一致3. 條件條件

21、（1）弱酸性弱酸性 pH4.5堿堿 I2 IO3- + I-酸酸 普魯卡因與碘在酸性條件普魯卡因與碘在酸性條件 下會產生復鹽沉淀下會產生復鹽沉淀（2）溫度溫度 2426溫度溫度38 未水解的供試品亦消耗碘未水解的供試品亦消耗碘（3）水解時間水解時間以水解以水解2020分鐘后的耗碘量最大分鐘后的耗碘量最大（4）反應時間反應時間反應反應2020分鐘后，耗碘量隨時間的分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小，可減小含量測定的誤變化較小，可減小含量測定的誤差。差。4. 特點特點（1）靈敏度高靈敏度高樣品樣品 : 碘碘 = 1 : 8（2）反應條件、實驗操作要求高反應條件、實驗操作要求高V對對、V對空對空V樣樣、

22、V樣空樣空1份含量份含量加試劑次序、反應時間、滴定速度相同加試劑次序、反應時間、滴定速度相同4I28I-5. 計算計算原料原料%WWVVVV對對照照品品）（）（含含量量樣樣對對對對對對空空樣樣樣樣空空 - - -相當于標示量%=S0 -SR0 -RCUWU0D平均裝量 100%制劑制劑HPLCHPLC法法ChPChP 內標法校正因子內標法校正因子外標法外標法特點特點 快速、高效、靈敏快速、高效、靈敏 專屬性強、重現性好專屬性強、重現性好 一法多用（鑒別、檢查、含測）一法多用（鑒別、檢查、含測）第三節第三節 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素苷苷苷苷元元糖糖縮縮合合 + +氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元

23、氨基糖氨基糖縮合縮合 + +鏈霉素鏈霉素 雙氫鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素慶大霉素慶大霉素 巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +

24、脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龍霉糖巴龍霉糖巴龍胺巴龍胺苷元苷元巴龍二糖胺巴龍二糖胺 糖糖 D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺D-D-核糖核糖巴龍霉糖巴龍霉糖OOOOHOCH2OHHONH2HOOOHNH2NH2OHOOHR2NH2CH2OH*R1慶大霉素慶大霉素 糖糖 苷元苷元絳紅糖胺絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2O

25、OHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺慶大霉素慶大霉素C復合物復合物 慶大霉素慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉素慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一一、結構與性質結構與性質多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3 3個個慶大霉素慶大霉素 5 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性（一）（一）水溶性水溶性溶解性

26、溶解性（二）（二）鏈霉素鏈霉素 pH57.5慶大霉素慶大霉素 pH212 穩定穩定穩定性穩定性（四四）UV（三三）NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反應坂口反應N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反應糖胺反應麥芽酚反應麥芽酚反應二二、 鑒別鑒別 茚三酮反應茚三酮反應（一一）藍藍紫紫色色慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素茚茚三三酮酮羥基胺結構羥基胺結構 Molisch 試驗試驗（二二）氨基糖苷類氨基糖苷類H+ 糠醛糠醛羥甲基糠醛羥甲基糠醛 -萘酚萘酚 蒽酮蒽酮呈色呈色OHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH紅紫色紅紫色N-N-甲基葡萄糖胺反

27、應甲基葡萄糖胺反應（三三）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素水解水解- -N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+紅色紅色（Elson-Morgan反應反應）慶大霉素慶大霉素NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(縮合縮合)323COCHCOCHCH- -OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N紅色紅色對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麥芽酚反應麥芽酚反應（四四） 鏈霉

28、素特征反應鏈霉素特征反應鏈鏈霉霉糖糖鏈鏈霉霉素素- -OH麥麥芽芽酚酚紫紫紅紅色色 + +3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫紅紫紅麥芽酚麥芽酚鏈霉胍特有反應鏈霉胍特有反應橙橙紅紅羥羥基基喹喹啉啉鏈鏈霉霉胍胍鏈鏈霉霉素素次次溴溴酸酸鈉鈉- - -8OH（或或-萘酚萘酚）NOH8-8-羥基喹啉羥基喹啉坂口反應坂口反應（五五）-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH（六六）- -24SO反應反應白白 - -2 2 + +2 2BaSOSOBaH

29、+UV法法（七七）慶大霉素無慶大霉素無UVUV吸收吸收nmmax2020= = 鏈霉素鏈霉素（八）色譜法（八）色譜法（1 1）TLCTLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色 對照液對照液 判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位 置應一致。置應一致。 點樣：供試液點樣：供試液 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 + + 硫酸硫酸 新霉素標準品新霉素標準品+ + 硫酸卡那霉素標準品硫酸卡那霉素標準品判定法：供試

30、液中主斑點的位置、顏色、大小判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小 應與對照液應與對照液 相同，相同， 對照液對照液應顯示分離清晰的應顯示分離清晰的3 3個斑點個斑點 否則試驗無效。否則試驗無效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 比較供試液與對照液各組分的保留比較供試液與對照液各組分的保留時間。時間。三三、 特殊雜質檢查特殊雜質檢查鏈霉素雜質鏈霉素雜質（一）（一）鏈霉素鏈霉素B B（甘露糖鏈霉素）（甘露糖鏈霉素） 方法方法 TLCTLC中的對照品法（中的對照品法（BPBP）1. 來源來源 反應中間體反應中間體對微生物的活性無明顯差異對微生物的活性無明顯差

31、異毒副作用和耐藥性不同毒副作用和耐藥性不同發酵菌種不同發酵菌種不同工藝差別工藝差別C C組分比例組分比例不一致不一致規定控制各組分的相對百分含量規定控制各組分的相對百分含量ChPUSPBPJP慶大霉素慶大霉素C C組分的測定組分的測定（二二）+ + + 1010.pH吲哚衍生物吲哚衍生物巰基醋酸巰基醋酸鄰苯二醛鄰苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基異吲哚衍生物異吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOHRPHPLC方法方法 2.規定規定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 205

32、0%計算計算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa1 10 00 0 + + + += =2 22 21 11 1峰面積歸一化法峰面積歸一化法四四、 含量測定含量測定微生物檢定法微生物檢定法 各國藥典主要采用各國藥典主要采用HPLC法法 常用于體內藥分常用于體內藥分 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1第四節第四節 四環素類抗生素四環素類抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四環素四環素（TC）tetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHC

33、H3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四環素氯四環素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四環素氧四環素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多西環素多西環素 (DOXC) doxycycline脫氧土霉素脫氧土霉素美他環素美他環素（METC） metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH22CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1一、一、 結構與性質結構與性質兩性兩性（一）（一）1. 與酸、堿均能成鹽與酸、堿均能成鹽2.強

34、酸或強堿中溶解度強酸或強堿中溶解度 酚羥基、烯醇型羥基酚羥基、烯醇型羥基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱堿性弱堿性與金屬離子生成有色配位化合物與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV UV和熒光性質和熒光性質（三三）與金屬離子絡合與金屬離子絡合（四四）pH3 7.5 熒光熒光 （二）（二）旋光性旋光性HOHOCaOOOOHOHOO不穩定性不穩定性（五）（五）1. 差向異構化差向異構化差向金霉素差向金霉素差向四環素差向四環素金霉素金霉素四環素四環素- - - - 6 62 2pH淡黃淡黃黑黑藍色熒光藍色熒光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向

35、四環素差向四環素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO（土霉素、多西環素不易差向異構化土霉素、多西環素不易差向異構化）2. 降解反應降解反應（1）酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黃色橙黃色脫水金霉素脫水金霉素脫水四環素脫水四環素金霉素金霉素四環素四環素 2 2pH2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脫水四環素脫水四環素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3H

36、CH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH2（2）堿性下降解堿性下降解異四環素異四環素四環素四環素- -OHHOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二二、 鑒別試驗鑒別試驗 濃濃H H2 2SOSO4 4反應反應（一一）黃色黃色朱紅色朱紅色綠綠藍藍深紫色深紫色鹽酸多西環素鹽酸多西環素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環素鹽酸四環素 2 2SOH鹽酸美他環素鹽酸美他環素橙紅色橙紅色FeCl3反應反應（二二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色紅棕色紅棕色鹽酸多西環素鹽酸多西環素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環素鹽酸四環素 FeClTLCTLC法法（三三）鹽酸土霉素的鑒別鹽酸土霉素的鑒別 HPLC HPLC法法（五五）EDTAEDTA 克服痕量金屬造成的克服痕量金屬造成的 拖尾現象拖尾現象比較保留時間比較保留時間三三、 特殊雜質檢查特殊雜質檢查 4-4-差向四環素（差向四環素（ETCETC） 脫水四環素脫水四環素（ATCATC） 差向脫水四環素差向脫水四環素（EATCEATC） 鹽酸金霉素鹽酸金霉素（CTCCTC） 有關物質有關物質（一一）HPLCHPLC法（法（20002000版）版）鹽酸四環素鹽酸四環素四環素有