1、河 南 科 技 大 學高等教育自學考試畢業論文題目 三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析地 市 :學 校 :準考證號 :考生姓名 :指導老師 :年 月 日河南科技大學高等教育自學考試辦公室三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析摘 要目的 探討肺炎支原體（ MP）咽拭子快速液體培養法、咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清 MP被動凝集法（ MP-Ab）等方法在兒童 MP感染診斷治療過程中的敏感性方法 采用 3MP檢測法對 362 例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究， 每患兒取咽拭子做快速培養和 PCR，同時取血清做 MP-Ab檢測，對 3 種方法的檢測結果與臨床診斷治

2、療病例進行回顧性分析。結果 回顧臨床病例診斷 MP感染患兒 152 例。MP快速培養法檢出陽性78 例，陽性率為 51.3%，病程為（4.5 2.6 ）天；PCR法檢測出陽性 103 例，陽性率為 67.8%，病程為（6.2 3.5 ） 天 ；MP-Ab法檢測出陽性 127 例，陽性率 83.5%，病程（8.1 4.5 ）天。結論 3 種 MP檢測法的敏感性與病程有相關性，臨床醫生應根據患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。關鍵詞 肺炎支原體，快速培養法，咽拭子聚合酶鏈反應，血清抗體，配對研究目 錄前 言 .5第一章 文獻綜述 .61.1 肺炎支原體的定義 .61.2 肺炎支原體的發

3、病機制 .61.3 肺炎支原體的分類 .61.4 肺炎支原體的臨床表現 .61.5 肺炎支原體的臨床診斷 .7 1.6 肺炎支原體的實驗室檢查 .7第二章 材料和方法 .82.1 樣本 .82.2 方法概述 .82.3 臨床診斷 MP 感染的診斷標準 .82.4 實驗方法 .92.5 統計學方法 . .9第三章 結果 .10第四章 討論 . 11結 論 . 12參考文獻 . 12致 謝 . 13附錄 . 14。前 言肺炎支原體（ mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之， 臨床上表現為呼吸道感染綜合征， 其中約 3%10%可發展為支原體肺炎。但只

4、根據臨床癥狀很難鑒別由 MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3 種 MP檢測法對 362 例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協助臨床準確做出診治。第一章 文獻綜述 1.1 肺炎支原體的定義小兒肺炎支原體肺炎多見于 515 歲兒童，嬰幼兒患病常表現為毛細支氣管炎。多數為亞急性起病，發熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛， 頭痛等癥狀。 X線改變明顯， 多為單側病變， 也可見雙側病變，以下葉為多見，有時病灶呈游走性，少數呈大葉性陰影；病程23

5、周不等，X線陰影完全消失比癥狀消退更延長 23 周之久，偶有延長至 6 周者。 1.2 肺炎支原體的發病機制肺炎支原體肺炎（ Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP）的發病機制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、 MP直接侵入和免疫學發病機制等學說，其中免疫調節異常在 MPP的發生發展中可能起重要作用 1.3 肺炎支原體的臨床表現1. 多數為亞急性起病，發熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。2. 可出現多系統多器官的損害，皮膚粘膜表現為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見非特異性肌痛和游走性關節痛；也有表現心血管系統、神經系統損

6、害、血尿及溶血性貧血等。3. 全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低及少許干濕羅音者 1.4 肺炎支原體的臨床診斷病原學診斷肺炎支原體快速鑒定培養法優于被動凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期可提供重要的依據，可做為臨床診斷MP感染的優先試驗 8 ；氣管肺泡灌洗液 MP-DNA測定不僅能診斷 MP感染, 且支氣管肺泡灌洗術可促進呼吸道癥狀的改善及體征恢復，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液 MP-DN，A痰液 MP-DNA及血清 MP抗體檢測陽性率沒有差異。 CRP的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法，一定程度可區分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(PCR)技術檢測 MP

7、具有可靠、特異性高的特點，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。 1.5 肺炎支原體的實驗室檢查急性期 MPP患兒血清 hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG 明顯升高， IgA 明顯降低；而恢復期 hs-CR、IgG 仍然較高，而 IgM 和 IgA 均沒有明顯變化，補體 C3、C4在恢復期內也沒有明顯變化，因此血清 C-反應蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監測對診斷急性期或恢復期 MPP有重要意義。 MP-IgM和冷凝集試驗同時檢測可提高小兒支原體肺炎實驗診斷的準確率；支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占 80%，中性粒細胞增高占 61%；65.6%患兒 C-反應蛋白增高； 53.6%患兒血沉增快

8、；58.4%患兒心肌酶譜增高； 24.0%患兒肝酶增高； 16.8%患兒尿酸增高。 5 流行病學特點及進展MP 肺炎發生率約為 22.3%，912 歲感染率最低 ,3 6 歲最高,10 12 月是發病高峰月 , 小兒支原休肺炎發病率有所上升 , 發病年齡有趨小傾向 , 秋冬季發病率高, 肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播，尤其發病率較高的地區，局部區域每隔 3-5 年可發生一次肺炎支原體感染，每 2-6 年可發生一次大范圍的肺炎支原體感染，每次感染的時間都持續較長，有的感染可持續一年左右，因此，有關部門一定要采取相應的預防措施，切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發生和流行具有重大意義。控制支原體感

9、染的發生和流行。第二章 材料和方法 2.1 樣本收集黃河中心醫院檢驗科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在兒科就診住院患兒病例，有呼吸道感染癥狀，已經初診為非細菌性感染的患兒362 例作為研究對象，其中男 175 例，女 187 例；年齡為 2 個月12 歲，病程為 190 天。2.2 方法具體方法有：（1）用 MP快速培養法、 PCR法和 MP-Ab法等 3 種 MP檢測法對362 例研究對象同時進行檢測，記錄結果。 （2）通過研究對象病歷回顧統計 MP感染的例數，并按年齡、病程和 3 種 MP檢測法結果進行統計學分析。2.3 臨床診斷 MP感染的診斷標準按文獻 1、臨床癥狀、體征

10、標準，包括回顧性診斷即患兒經紅霉素治療有效，經青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實驗室檢查3 種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。 2.4 MP 快速培養法支 原 體 分 離 鑒 別 培 養 液 由 珠 海 市 浪 峰 生 物 技 術 有 限 公 司 提 供 。 清晨 患 兒 未 洗 漱 用 咽 拭 子 取 咽 部 分 泌物，嚴格按說明書進行，將咽 拭 子用 無 菌 生 理 鹽 水 處 理 ， 接 種 到 預 溫 的 培 養 基 中 ， 37 培 養 ； 培 養 基液 體 顏 色 由 紫 紅 色 變 為 草

11、 綠 色 或 嫩 綠 色 且 清 亮 ， 并 且 在 靜 置 時 ， 瓶 底有 藍 色 顆 粒 或 物 質 沉 淀 為 陽 性 ， 5 天 后 培 養 基 顏 色 不 變 或 無 藍 色 顆 粒或 物 質 沉 淀 為 陰 性 。 PCR法：試 劑 由 中 山 大 學 達 安 基 因 股 份 有 限 公 司提 供 。 應 用 PCR 法 檢 測 MP-DNA， 嚴 格 按 試 劑 盒 說 明 書 進 行 ， 以 在 紫外 燈 下 出 現 180 bp 擴 增 帶 結 果 判 為 陽 性 。 每 次 試 驗 均 設 陽 性 、 陰 性對照（ 陽 性 對 照 為 MP質粒，陰 性對照為無菌生理鹽水）

12、，由專人進行操作，質 量控制。MP-Ab 法：試 劑 為 日 本 瑞 必 歐 株 式 會 社 MP-Ab 檢 測試 劑 SERODIA-MYCO 凝 集 試 驗 試 劑 盒 ， 嚴 格 按 試 劑 盒 說 明 書 操 作 ，抽 取 患 兒 靜 脈 血 3 ml ， 采 用 明 膠 顆 粒 被 動 凝 集 法 ， 用 血 清 檢 測 ， 結果 以 1 40 判斷為陽性。每 次 試 驗 均 設 未 致 敏 明膠顆粒、致 敏 明 膠顆 粒 和 陽 性 、 陰 性 血 清 進 行 測 定 。 2.5 統計學方法計量資料用均數 標準差（ x s）表示，各年齡組與 3 種檢測方法結果比較用 Spearma

13、n檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用 2 檢驗；3 種檢測方法陽性結果與病程之間的比較用 q 檢驗。第三章 結果 3.1 陽性樣本經過回顧性診斷，在配對研究組 362例研究對象中有 152例符合 MP感染的診斷標準，即有 152 例確診病例，其中肺炎 45 例，支氣管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支氣管哮喘 2 例。MP快速培養法檢測出 78 例陽性，PCR法檢測出 103例陽性， MP-Ab法檢測出 127例陽性。 3.2 結果分析各確診病例的年齡分布， 見表 1。表 1 顯示兒童 MP感染的年齡以 34 歲年齡段的病例最多，為 46例，陽性率最高，為 70.77%，與其余年齡組段

14、比較 P0.05。不同病程患兒 3 種檢測法的檢測結果，見表 2，表 2 顯示 MP快速培養法為陽性的患兒病程均值較短為（ 4.5 2.6 ）天，PCR法為陽性的患兒病程均值為（6.2 3.5 ）天，MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為（ 8.1 4.5 ）天。3組之間兩兩比較，差異有統計學意義（ P0.05）。表 1 不同年齡組 MP感染確診病例和 3 種檢測方法結果對比分析注：代表與年齡組34 歲組段比較結果表 2 不同病程患兒 3 種檢測方法陽性結果對比分析注：代表三組之間的兩兩比較第四章 討論1 MP 感染的臨床表現常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患

15、兒有下列癥狀： （1）發熱呈弛張熱或不規則熱。刺激性咳嗽非膿性痰， 偶帶血絲。（2）可有咽痛、 頭痛、 胸痛，全身癥狀比體征明顯。（3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。 （4）WBC正常或升高。（5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環內酯類抗生素有效。（6）實驗室 MP檢驗有 1 項或 1 項以上陽性具備以上 2 個條件或以上者可初步診斷為 MP感染。多時候，臨床醫生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據患兒的癥狀、體征和病史做 MP感染的診斷性治療，但應與肺結核相互鑒別。2 近年來由于診斷技術的提高， MP感染報道日漸增多，一般認為 MP感染以年長兒發病較多，本文表

16、 1 資料顯示， 28 歲年齡段是發病的高峰期 2。占同期呼吸免疫科住院患兒的 9.3%，比有關文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發病的 10%20%低。說明 MP感染的發病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現愈不典型。3 臨床實驗室檢測 MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷 MP感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響 3。本文采用配對資料研究，對疑為 MP感染的患兒進行 3 種 MP檢測法， 以探討 MP快速培養法、PCR法和 MP-Ab法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫生根據患兒不同的病程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。4 MP快速培養法是利用 M

17、P生長代謝產物使培養基液體中指示劑顏色發生改變來判斷 MP生長；標本中的其他支原體和細菌則因培養基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結果可 48h 檢出。結果顯示，培養法陽性率為 51.3%（78152） ，低于另外兩種方法的陽性率。可能與在檢測前患兒已經用了MP敏感藥物有關。表 2 結果顯示，該法陽性病例病程最短。提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。 MP培養是診斷 MP的金標準 4 。5 咽拭子 PCR法檢測質粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術可從患兒痰中檢測 MP-DNA。由于此方法相當敏感，易受污染，故實驗室操作時應特別小心。統計結果顯示，該法的陽性率為 6

18、7.76%（103152），高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的 MP不能通過快速培養法檢出的病例。 表 2 結果顯示，該法陽性病例，病程為（ 6.2 3.5 ）天。詳細資料顯示，有病程在 30天以上的患兒經抗 MP治療，該法仍可為陽性，說明 MP的生存力相當強，要系統化治療。血清 MP-Ab法陽性率是 3 種檢測方法中最高的，為 83.55%（127152），該法是檢測患兒血清中的 MP抗體，而非直截了當檢測 MP本身，因而陽性結果并不能確診是 MP感染。對患兒狀態的綜合評估應包括對患者臨床癥狀和試驗結果的嚴謹分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些MP感染的患者2 結不產生抗體或