1、食品中合成著色劑的測(cè)定食品中合成著色劑的測(cè)定 色色素提取素提取2019.4.18課程目的：課程目的：掌握食品中合成著色劑的測(cè)定原理；掌握食品中合成著色劑的測(cè)定原理；了解高效液相色譜的任務(wù)原理及操作方了解高效液相色譜的任務(wù)原理及操作方法。法。著色劑：經(jīng)過(guò)使食品著色后改善其感官性狀，增進(jìn)食欲的著色劑：經(jīng)過(guò)使食品著色后改善其感官性狀，增進(jìn)食欲的一類(lèi)物質(zhì)。一類(lèi)物質(zhì)。天然著色劑：辣椒紅、甜菜紅、紅曲米、胭脂蟲(chóng)紅、高粱天然著色劑：辣椒紅、甜菜紅、紅曲米、胭脂蟲(chóng)紅、高粱紅、葉綠素銅鈉、姜黃、梔子黃、胡蘿卜素、藻藍(lán)素、可紅、葉綠素銅鈉、姜黃、梔子黃、胡蘿卜素、藻藍(lán)素、可可色素、焦糖色素等等。可色素、焦糖色素等

2、等。 合成色素：用人工合成的方法從煤焦油中制取，或以苯、合成色素：用人工合成的方法從煤焦油中制取，或以苯、甲苯、萘等芳香烴化合物為原料合成的有機(jī)色素。包括莧甲苯、萘等芳香烴化合物為原料合成的有機(jī)色素。包括莧菜紅、檸檬黃、亮藍(lán)、日落黃、誘惑紅、赤鮮紅等等。菜紅、檸檬黃、亮藍(lán)、日落黃、誘惑紅、赤鮮紅等等。合成著色劑的潛在危害致瀉性、致癌性國(guó)際：JECFA制定各種合成著色劑的ADI我國(guó)：食品平安國(guó)家規(guī)范、食品添加劑運(yùn)用規(guī)范GB2760-2019現(xiàn)狀：超量運(yùn)用，運(yùn)用工業(yè)色素、染料色素 方便、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中合成著色劑，是對(duì)其進(jìn)展有效管理的必要手段。測(cè)定手段GB/T 5009.35-2019：高效

3、液相色譜法薄層色譜法示波極譜法其他：紙上層析、分光光度法莧菜紅、亮藍(lán)、檸檬黃、日落黃莧菜紅、亮藍(lán)、檸檬黃、日落黃著色劑最大使用量（g/kg）檸檬黃0.1日落黃0.1莧菜紅 0.05亮藍(lán) 0.025合成著色劑在飲料中的最大運(yùn)用量合成著色劑在飲料中的最大運(yùn)用量GB2760-2019一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理1.聚酰胺吸附法提取合成著色劑聚酰胺吸附法提取合成著色劑 聚酰胺尼龍經(jīng)過(guò)氫鍵吸附著色劑，天聚酰胺尼龍經(jīng)過(guò)氫鍵吸附著色劑，天然著色劑影響測(cè)定在酸性條件下被洗脫去然著色劑影響測(cè)定在酸性條件下被洗脫去除，合成著色劑在堿性條件下被洗脫搜集，濃除，合成著色劑在堿性條件下被洗脫搜集，濃縮后上機(jī)測(cè)定。縮后上機(jī)測(cè)

4、定。吸附吸附洗滌洗滌解吸附解吸附濃縮濃縮上機(jī)上機(jī)理化測(cè)定普通步驟：除雜質(zhì)、搜集目的物、理化測(cè)定普通步驟：除雜質(zhì)、搜集目的物、調(diào)整濃度、上機(jī)調(diào)整濃度、上機(jī)2. 高效液相色譜法高效液相色譜法 高效液相色譜法高效液相色譜法HPLC：是色譜法的：是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分別后，有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分別后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)展檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分進(jìn)入檢

5、測(cè)器進(jìn)展檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。析。 檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器 3.結(jié)果分析結(jié)果分析保管時(shí)間定性：根據(jù)樣品中各物質(zhì)被保管時(shí)間定性：根據(jù)樣品中各物質(zhì)被洗脫至檢測(cè)器的時(shí)間差別來(lái)進(jìn)展定性分析；洗脫至檢測(cè)器的時(shí)間差別來(lái)進(jìn)展定性分析；峰面積定量：根據(jù)樣品峰面積與規(guī)范峰面積定量：根據(jù)樣品峰面積與規(guī)范品峰面積的比較來(lái)進(jìn)展定量分析。品峰面積的比較來(lái)進(jìn)展定量分析。試劑試劑配方配方作用作用聚酰胺粉吸附檸檬酸溶液20g檸檬酸，100mL水溶解調(diào)PHPH 4的水（70） 水+檸檬酸溶液，調(diào)至PH=4，加熱洗滌甲醇-甲酸溶液60mL甲醇+40mL甲酸洗滌無(wú)水乙醇-氨水-水70mL乙醇+20m

6、L氨水+10mL水 解吸附乙酸銨溶液1.54g乙酸銨，純水定容至1000mL，乙酸調(diào)PH至4流動(dòng)相合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.05mg/mL定量分析50%乙醇定容樣品其他乙酸、甲醇、氨水、蒸餾水水二、試劑與器材二、試劑與器材二、試劑與器材二、試劑與器材器材：器材：燒杯、玻棒、吸管、移液管、燒杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽濾瓶漏斗、抽濾瓶*2、針筒、溫度計(jì)、針筒、溫度計(jì)、5mL玻璃離心管玻璃離心管電子天平、水浴鍋電子天平、水浴鍋三、實(shí)驗(yàn)步驟三、實(shí)驗(yàn)步驟取樣、脫氣取樣、脫氣 稱(chēng)取飲料稱(chēng)取飲料20g，倒入，倒入50mL燒杯，碳酸飲料用電爐加熱除燒杯，碳酸飲料用電爐加熱除去去二氧化碳。已脫氣。二氧

7、化碳。已脫氣。2. 色素吸附色素吸附 稱(chēng)取聚酰胺稱(chēng)取聚酰胺3g，用少許，用少許PH4的水的水70調(diào)成糊狀，參調(diào)成糊狀，參與待與待測(cè)樣品，攪拌測(cè)樣品，攪拌5min。3. 除雜質(zhì)除雜質(zhì) 組裝好組裝好G3漏斗，將樣品倒入漏斗，抽濾；漏斗，將樣品倒入漏斗，抽濾； PH4的水的水70洗滌洗滌3次，每次次，每次20mL洗滌沉淀物；洗滌沉淀物； 甲醇甲醇-甲酸洗滌甲酸洗滌3次，每次次，每次20mL洗滌天然色素；洗滌天然色素； 400mL PH4的水洗滌。的水洗滌。4. 解吸附解吸附 改換抽濾瓶。用乙醇改換抽濾瓶。用乙醇-氨水氨水-水溶液洗滌三次水溶液洗滌三次5mL、10mL、5mL，搜集解吸液。，搜集解吸液

8、。5. 樣品濃縮樣品濃縮 解吸液倒入蒸發(fā)皿中，解吸液倒入蒸發(fā)皿中，80水浴蒸發(fā)至約水浴蒸發(fā)至約2mL，以乙酸，以乙酸一小滴調(diào)理一小滴調(diào)理PH至至6。搜集樣品至玻璃離心管，加水定容至。搜集樣品至玻璃離心管，加水定容至5mL。3g聚酰胺聚酰胺20g飲料飲料70 PH4水，糊狀加熱脫氣混合攪拌混合攪拌5minG3漏斗抽濾漏斗抽濾70 PH4水，水，20mL，洗，洗3次次甲醇甲醇-甲酸，甲酸，20mL，洗，洗3次次70 PH4水，水，400mL洗滌洗滌乙醇乙醇-氨水氨水-水，洗三次，水，洗三次，5ml、10mL、5mL改換抽濾瓶改換抽濾瓶搜集濾液，搜集濾液，80水浴至水浴至2mL乙酸調(diào)乙酸調(diào)PH至至6，離心管定容至，離心管定容至5mL，冰箱保管，冰箱保管抽濾過(guò)程留意抽濾過(guò)程留意攪拌、倒廢液攪拌、倒廢液清洗漏斗：自來(lái)水清洗漏斗：自來(lái)水-鹽酸鹽酸-蒸餾水蒸餾水目的物目的物6. 上機(jī)測(cè)定上機(jī)測(cè)定 30