1、動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養、動物細胞培養、 動物細胞核移植、動物細胞核移植、動物細胞融合、動物細胞融合、 單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養、植物組織培養、 植物體細胞雜交植物體細胞雜交強調：強調：動物細胞培養技術動物細胞培養技術是其他動物細是其他動物細胞工程技術的基礎。胞工程技術的基礎。 燒傷病人的治療通常燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植，但對于大進行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學們

2、想皮膚很有限，請同學們想一想如何來治療該病人？一想如何來治療該病人？ 取該患者的皮膚進行細胞培養取該患者的皮膚進行細胞培養, ,獲得獲得足量的細胞后再移植足量的細胞后再移植學習目標：學習目標：【知識能力知識能力】 1 1、動物細胞培養的過程、條件及應用、動物細胞培養的過程、條件及應用 2 2、應用細胞的基礎知識，分析細胞工程的理論基礎、應用細胞的基礎知識，分析細胞工程的理論基礎【情感態度與價值觀情感態度與價值觀】 1 1、討論細胞工程技術的社會意義、討論細胞工程技術的社會意義 2 2、認同細胞學基礎理論研究與技術開發之間的關系、認同細胞學基礎理論研究與技術開發之間的關系一、動物細胞培養一、動物

3、細胞培養 概念：概念：從動物機體中取出相關組織，將它分從動物機體中取出相關組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養基中，讓這些散成單個細胞，然后在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和繁殖。細胞生長和繁殖。 一、動物細胞培養一、動物細胞培養原理：原理：是細胞增殖是細胞增殖 （有絲分裂）（有絲分裂） 一、動物細胞培養一、動物細胞培養閱讀閱讀P53-55“哺乳動物細胞培養技術哺乳動物細胞培養技術”并思考：并思考： 1、 動物細胞生長特點是什么？動物細胞生長特點是什么？ 2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養材料？做動物細胞培養材料？ 3、為

4、什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞、為什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞分散？分散？ 4、用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間、用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間的物質主要是什么？胰蛋白酶真的不會把細胞消化的物質主要是什么？胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？掉嗎？為什么？ 5、動物細胞培養的條件有哪些？、動物細胞培養的條件有哪些？ 6、簡述動物細胞培養的操作過程、簡述動物細胞培養的操作過程1、動、動物細胞生長物細胞生長特點特點：細胞貼壁：細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。稱為細胞貼壁。要求：要求： 培養瓶或

5、培養皿的內表面光滑、無毒、培養瓶或培養皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。易于貼附。 接觸抑制：接觸抑制：細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，數量不斷增加，最后形成一個單層，此時細裂，數量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數量不再胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數量不再增加。增加。50代以后代以后失去接觸抑制失去接觸抑制接觸抑制接觸抑制動物細胞生長動物細胞生長特點特點部分細胞突變，獲得部分細胞突變，獲得不死性，向癌細胞方不死性，向癌細胞方向發展，糖蛋白減少，向發展，糖蛋白減少，失去接觸抑制（如腫失去接觸抑制（如腫瘤細胞）。瘤細胞）

6、。接觸抑制接觸抑制2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養材料？或組織做動物細胞培養材料？動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們的細胞分化程度低，增殖能力強，分裂旺的細胞分化程度低，增殖能力強，分裂旺盛，容易培養。盛，容易培養。一、動物細胞培養一、動物細胞培養3、為什么要對取出的動物組織進行處理，、為什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞分散？使細胞分散？ 分散的單個細胞容易攝取所需的營養，排出分散的單個細胞容易攝取所需的營養，排出代謝廢物。代謝廢物。一、動物細胞培養一、動物細胞培養4、用胰蛋白酶對動物組織

7、進行處理是因為細、用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間的物質主要是什么？胞間的物質主要是什么？胰蛋白酶真的不會把胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？細胞消化掉嗎？為什么？ 細胞間的物質主要是細胞間的物質主要是蛋白質（膠原纖維）。蛋白質（膠原纖維）。一、動物細胞培養一、動物細胞培養胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外，胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外，長時間的作用也會消化細胞膜蛋白，對長時間的作用也會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用，因此細胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋必須控制好胰蛋白酶的消化時間。白酶的消化時間。 5、動物細胞培養條件、動物細胞培養條件1 1、無菌、無毒的環境、無菌、

8、無毒的環境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）2 2、營養、營養（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清動物血清等。）等。）3 3、溫度和、溫度和PHPH 36.5+ 36.5+（- -）0.50.5度度, 7.2-7.4, 7.2-7.44 4、氣體環境：、氣體環境： O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）保證細胞順利的生長增殖一、動物細胞培養一、動物細胞培養一、動物細胞培養一、動物細胞培養6、過程：過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細胞懸

9、浮液細胞懸浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代細胞代細胞原代培養原代培養50代細胞代細胞傳代培養傳代培養細胞株細胞株無限傳代無限傳代細胞系細胞系單個細胞單個細胞加培養液加培養液遺傳物質遺傳物質未改變未改變遺傳物質遺傳物質已改變已改變（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）從機體取出后立即培從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。養的細胞為原代細胞。一般培養的一般培養的第第1 1代細代細胞與傳胞與傳1010代以內的細代以內的細胞稱為原代細胞培養。胞稱為原代細胞培養。將原代細胞從培養瓶將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶或兩個以上的培養瓶中繼續培

10、養，中繼續培養，一般一般培培養的第養的第1111代細胞與傳代細胞與傳4040代或代或5050代代稱為傳代稱為傳代培養。培養。植物組織培養和動物細胞培養的比較植物組織培養和動物細胞培養的比較比較項目比較項目植物組織培養植物組織培養動物細胞培養動物細胞培養原理原理細胞的全能性細胞的全能性細胞增殖細胞增殖培養基狀態培養基狀態 固體培養基固體培養基液體培養基液體培養基培養基特有培養基特有成分成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素 葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清培養結果培養結果植物體植物體細胞株、細胞系細胞株、細胞系培養目的培養目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株無病毒植株獲得細胞或細胞分獲得細胞或細胞分

11、泌蛋白泌蛋白細胞的全能性細胞的全能性細胞增殖細胞增殖固體培養基固體培養基液體培養基液體培養基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清植物體植物體細胞株、細胞系細胞株、細胞系快速繁殖、快速繁殖、培育無病毒植株培育無病毒植株獲得細胞獲得細胞或細胞分泌蛋白或細胞分泌蛋白 1.用動、植物成體的體細胞進行離體培養，下用動、植物成體的體細胞進行離體培養，下列敘述正確的是列敘述正確的是 A都需用培養箱都需用培養箱 B都須用液體培養基都須用液體培養基 C都要在無菌條件下進行都要在無菌條件下進行 D都可體現細胞的全能性都可體現細胞的全能性C鞏固練習鞏固練習： 2、下列屬于動物細胞培養與植物組織培

12、養主要、下列屬于動物細胞培養與植物組織培養主要區別的是區別的是 A.培養基成分不同培養基成分不同 B.動物細胞培養不需要在無菌條件下進行動物細胞培養不需要在無菌條件下進行 C.動物細胞可以傳代培養，而植物細胞不能動物細胞可以傳代培養，而植物細胞不能 D.動物細胞能夠大量培養，而植物細胞只能培動物細胞能夠大量培養，而植物細胞只能培養成植株養成植株A 3、動物細胞工程技術的基礎是、動物細胞工程技術的基礎是A.動物細胞融合動物細胞融合 B.單克隆抗體單克隆抗體 C.胚胎移植胚胎移植 D.動物細胞培養動物細胞培養D 4、細胞株的特點是、細胞株的特點是A遺傳物質沒有改變，可以無限傳代遺傳物質沒有改變，可

13、以無限傳代B遺傳物質發生改變，不可無限傳代遺傳物質發生改變，不可無限傳代C遺傳物質沒有改變，不可無限傳代遺傳物質沒有改變，不可無限傳代D遺傳物質發生改變，且有癌變特點，可以遺傳物質發生改變，且有癌變特點，可以無限傳代無限傳代 5、在動物細胞培養中有部分細胞可能在培養、在動物細胞培養中有部分細胞可能在培養條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為: A原代培養原代培養 B傳代培養傳代培養 C細胞株細胞株 D細胞系細胞系CD6 6、用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚、用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要胎或出

14、生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞原因是這樣的組織細胞 A.A.容易產生各種變異容易產生各種變異 B B.具有更強的全能性具有更強的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D.分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強D回答下列有關動物細胞培養的問題：回答下列有關動物細胞培養的問題： 在動物細胞培養的過程中，當貼壁細胞分裂在動物細胞培養的過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面生長到細胞表面 時，細胞會停止分時，細胞會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的裂增殖，這種現象稱為細胞的 。此時，。此時，瓶壁上形成的細胞層數是瓶壁上形成的細胞層數是 ，要使貼壁的細，要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是是 。 隨著細胞傳代次數的增多，絕大部分