1、甾體激素類藥物甾體激素類藥物的分析的分析基基 本本 要要 求求1 1掌握甾體結構類藥物的結構特點與分析方掌握甾體結構類藥物的結構特點與分析方 法之間的關系。法之間的關系。2 2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3 3掌握甾體類藥物的含量原理與方法。掌握甾體類藥物的含量原理與方法。4 4熟悉甾體類藥物雜質檢查的方法。熟悉甾體類藥物雜質檢查的方法?；窘Y構：環戊烷駢多氫菲基本結構：環戊烷駢多氫菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819 概述概述分類：分類：甾體激素甾體激素腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素

2、及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素OHOOHOCH2OHHHH 腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素氫化可的松氫化可的松OHOOHOHFHOCH3OHCH3腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OHOHOHCH3HHHOHFCH3O腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素曲安息龍曲安息龍OHOHCH3HHHHOFCH3OOPONaOONaOH腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉雄性激素雄性激素OCH3HHCH3OHHCH3甲睪酮甲睪酮OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睪酮丙酸睪酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍孕激素孕激素黃體酮黃體酮

3、OCH3HHHCH3OHCH3OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇OHCH3HHHCCHHO雌性激素雌性激素OHCH3HHHHHO雌二醇雌二醇OHOHHHCH3HCCH炔諾酮炔諾酮此外此外OHOHHHH3CHCCH炔諾孕酮炔諾孕酮一、結構與性質一、結構與性質 1. 1. 腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素主要活性基團主要活性基團性性 質質4 4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應劑反應 C C1717 醇酮基醇酮基還還 原原 性性2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團主要活性基團性性 質

4、質4 4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應劑反應 C C17 17 羥基羥基可成酯可成酯3. 3. 孕激素孕激素主要活性基團主要活性基團性性 質質4 4 3 3 酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應劑反應C C17 17 甲酮基甲酮基與亞硝基鐵氰與亞硝基鐵氰化納反應化納反應4. 4. 雌性激素雌性激素主要活性基團主要活性基團性性 質質A A環為環為3 3OH OH 苯環苯環UVUV、與重氮苯磺、與重氮苯磺酸鹽反應酸鹽反應C C17 17 乙炔基乙炔基與與AgNOAgNO3 3反應反應C C17 17 羥基羥基可成酯可成酯二、鑒別試驗二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應（一）與強酸

5、的呈色反應甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色H H2 2SOSO4 4 H H3 3POPO4 4 HClOHClO4 4 HClHCl（母核）（母核）與硫酸顯色反應與硫酸顯色反應 顯顯 色色 熒光熒光 加水稀釋加水稀釋潑尼松龍潑尼松龍 深紅深紅 絮狀絮狀灰灰潑尼松潑尼松 橙橙 黃黃藍綠藍綠炔雌醚炔雌醚 橙紅橙紅 黃綠黃綠 紅色紅色 炔雌醇炔雌醇 橙紅橙紅 黃綠黃綠 絮狀絮狀玫紅玫紅醋酸可的松醋酸可的松 黃或微黃或微 褪色并澄褪色并澄 帶橙帶橙 清清( (二二) ) 官能團的反應官能團的反應腎上腺腎上腺皮質激皮質激素藥物素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽OH1、C17 醇酮基醇酮基還原性還原性呈

6、色反應呈色反應此外還有斐林試此外還有斐林試液、多倫試液液、多倫試液甾酮類甾酮類激素藥激素藥物物呈色呈色羰基試劑羰基試劑2.C2.C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的羰基試劑：常用的羰基試劑：2,4-2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼具有甲酮具有甲酮基或活潑基或活潑亞甲基的亞甲基的甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納間二硝基酚間二硝基酚芳香醛芳香醛3.3.甲酮基甲酮基黃體酮黃體酮藍紫色藍紫色亞硝基鐵亞硝基鐵 氰化納氰化納其他甾體其他甾體淡橙色淡橙色不顯色不顯色有機氟有機氟F有機破壞有機破壞有機氯有機氯Cl4.4.有機鹵素有機鹵

7、素茜素氟藍茜素氟藍 硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀AgCl 呈色呈色 雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羥基酚羥基含炔基含炔基的甾體的甾體激素激素銀鹽沉淀銀鹽沉淀硝酸銀硝酸銀6. 乙炔基的沉淀反應乙炔基的沉淀反應RCCHAgNO3RCCAg ( (三三) )制備衍生物測定制備衍生物測定m.p.m.p.鹽酸氨基脲鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物1. 縮氨基脲的生成縮氨基脲的生成m.p.約約180（分解）（分解）2. 酯的水解酯的水解丙酸睪酮丙酸睪酮堿性條件堿性條件睪酮睪酮m.p.為為150150 156-3-3-酮酮、苯

8、環苯環、其他共軛結構、其他共軛結構（四）（四）UVUV法法1. 結構依據結構依據240nm240nm左右左右280nm左右左右2. 示例示例 結構特征：酚羥基、結構特征：酚羥基、C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO（五）（五）IRIR法法1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH 酚羥基酚羥基醇羥基醇羥基1615cm-1苯環的骨苯環的骨架振動架振動黃體酮黃體酮COHHHCH3O結構特征：結構特征：-3-3-酮、酮、C C1717- -酮基酮基1700cm-1 C=O20位酮基位酮基166

9、5cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H雙鍵雙鍵（七）（七）TLCTLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別制劑的鑒別 方法：對照品法方法：對照品法 要求供試品溶液所顯主斑點要求供試品溶液所顯主斑點的的顏色顏色和和位置位置與對照品溶液的主與對照品溶液的主斑點相同。斑點相同。（八八） HPLCHPLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）德軟膏、醋酸氟輕松軟膏） 方法：對照品法方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的的色譜

10、圖中，供試品峰的t tR R與與對照品峰的對照品峰的t tR R一致。一致。三、三、 特殊雜質檢查特殊雜質檢查（一）其他甾體的檢查（一）其他甾體的檢查檢查方法（具有一定分離能力）檢查方法（具有一定分離能力） TLCTLC法（高低濃度對比法）法（高低濃度對比法） HPLCHPLC法（類似高低濃度對比法）法（類似高低濃度對比法）（1 1）TLCTLC法（高低濃度對比法）法（高低濃度對比法） 判定方法：判定方法：v 規定雜質斑點數目規定雜質斑點數目v 規定雜質斑點顏色規定雜質斑點顏色例：氫化可的松中其他甾體的檢查例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：供試液：本品本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9

11、 9：1 1） 濃度：濃度：3.0mg/ml3.0mg/ml對照液：對照液：供試液（供試液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 層析：層析：供試液供試液 點樣、展開、斑點檢出。點樣、展開、斑點檢出。 對照液對照液判斷：判斷：供試液如顯雜質斑點，不得多于供試液如顯雜質斑點，不得多于3 3個，其顏個，其顏 色與對照液的主斑點比較，不得更深。色與對照液的主斑點比較，不得更深。（2 2）HPLCHPLC法（主成分自身對照法）法（主成分自身對照法） 判定方法：判定方法：v 規定雜質峰數目規定雜質峰數目v規定雜質峰面積規定雜質峰面

12、積硒的檢查硒的檢查（二）（二）來源來源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脫氫脫氫有毒有毒方法方法藥物藥物氧瓶燃燒氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定二氨基萘比色法測定（三）有機溶劑殘留量的檢查（三）有機溶劑殘留量的檢查（靈敏度法）（靈敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 檢測限檢測限= 3.1ng= 3.1ng丙酮丙酮 5.0%5.0% 內標法內標法 + + 校正因子校正因子以地塞米松磷酸鈉為例以地塞米松磷酸鈉為例 GCGC法法地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉檢查檢查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 精密稱取本品精密稱取本品0.16g，置，置10ml量瓶量瓶中，精密加內標溶液中，精密加內標溶

13、液2ml，加水稀釋至，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)與丙酮與丙酮100l(79mg)置置100ml量瓶中，精密加內標溶液量瓶中，精密加內標溶液20ml，加水至刻度，作為對照液。照氣相色譜加水至刻度，作為對照液。照氣相色譜法測定，含丙酮不得過法測定，含丙酮不得過5.0%，并不得，并不得出現甲醇峰。出現甲醇峰。（二）游離磷酸鹽的檢查（二）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉對照品比色法對照品比色法 POKHPOH%.%.L %. （一）（一）HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPL

14、C（大多內標法）（大多內標法）（甾體激素類藥物常含有結構相似的其（甾體激素類藥物常含有結構相似的其他甾體雜質，對利用結構特征設計的比他甾體雜質，對利用結構特征設計的比色法有干擾）色法有干擾）四、含量測定四、含量測定（二二）UV法法-3-酮酮 240nm（）腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥孕激素、口服避孕藥 苯環苯環 280nm（）雌激素雌激素腎上腺皮質激素、腎上腺皮質激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基（1） 原理原理異煙腙（黃）異煙腙（黃）酮基酮基異煙肼異煙肼 CHCl（縮合）（縮合）1.

15、異煙肼比色法異煙肼比色法（三）比色法（三）比色法CONHNOHN異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）（2 2）方法）方法對照品法對照品法異煙肼異煙肼揮去乙醇揮去乙醇對照液對照液供試液供試液A CHCl暗暗45（3 3）討論）討論反應速度（反應專屬性）反應速度（反應專屬性）A.C C3 3= O = O C C1717= O = O 、 C C2020= O= O C C1111= O = O 不反應不反應反應專屬性反應專屬性 C C3 3酮基酮基B. 溶劑的選擇溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇甲醇、乙醇無水甲醇無水甲醇無水乙醇無水乙醇C.C.水分、溫度、水分、溫度、O O2 2與光線的影響

16、與光線的影響 含水量含水量腙水解腙水解A%不揮發溶劑、不吸收水分時不揮發溶劑、不吸收水分時 O O2 2與光線無影響與光線無影響t D. 酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸酸: :異煙肼異煙肼 = 2:1= 2:1最大最大A A 腎上腺皮質激素類腎上腺皮質激素類C C17 17 -醇酮基醇酮基強還原性強還原性（1 1）原理）原理2. 四氮唑比色法四氮唑比色法有色甲瓚有色甲瓚四氮唑鹽四氮唑鹽醇酮基醇酮基 a a 77COH - 還原還原 CNNNNH三苯甲瓚三苯甲瓚深紅深紅CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（紅四氮唑（RT）nmmax4904

17、80 e2 HCl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3藍四氮唑藍四氮唑（BT）（2）方法方法對照品法對照品法氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨對照液對照液供試液供試液ATTC4045暗暗（3 3）討論）討論A. 基團對反應速度的影響基團對反應速度的影響C11= O C11OHC21OH C21-酯酯B. 溶劑、水分的影響溶劑、水分的影響以無醛乙醇為溶劑以無醛乙醇為溶劑C. OC. O2 2與光線的影響與光線的影響避光避光隔絕空氣、快速、充隔絕空氣、快速、充N N2 2D. D. 堿的種類及加入順序堿的種類及加入順序以以氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨的結果最佳的結果最佳加入順序：加入順序：堿試液堿試液四氮唑鹽四氮唑鹽皮質激素溶液皮質激素溶液E. E. 溫度與時間溫度與時間（1 1）原理）原理max=465max=515雌激素雌激素3.