1、西京醫院科研支撐平臺開放實驗項目目錄（2009版）目 錄一、腫瘤生物學國家重點實驗室（一）流式細胞儀工作站單元1.血細胞或淋巴細胞的亞群檢測2.細胞周期檢測3.細胞凋亡檢測4.細胞增殖檢測5.免疫表型分析6.可溶性分子檢測（二）熒光定量PCR儀工作站單元1. 基因型及基因表達差異分析（三）細胞培養基病毒載體功能單元1細胞的常規培養2重組病毒載體的包裝制備3病毒顆粒的收集4病毒滴度的測定5病毒載體對目的細胞的感染6病毒感染細胞的篩選與培養7倒置顯微鏡下攝像（四）蛋白質功能單元1. 光學分析檢測2. 亞細胞的分離3. 超聲破碎細胞樣品4. 凍干樣品5.真空離心干燥機6.Western blot 7

2、.雙向電泳：8.單克隆抗體的制備（五）基因克隆與體外操作功能單元1.用PCR或RT-PCR擴增目的基因的cDNA片段2.目的基因與載體的重組3.目的基因的定點突變4.目的基因截短體、結構域缺失等突變體的制備5.融合表達載體的制備6.質粒DNA的大量擴增與制備 正 文一、腫瘤生物學國家重點實驗室實驗室于2006 年被評為腫瘤生物學國家重點實驗室。實驗室總面積3300平方米，設備總值 700 萬元。實驗室設組織細胞培養和病毒載體包裝單元、蛋白質功能學、Q-PCR單元、流式細胞儀和基因操作分子克隆單元功能單元。主要研究方向為（1）消化道道腫瘤的發病機制和轉移機制（2）胃癌肝癌診斷的早期預警研究；（3

3、）慢性肝病的干細胞治療和膽汁性肝淤積發病機制研究。實驗室專職研究人員3名，其中正高2名、中級1名。在國家211工程經費資助下近年來實驗室新進購置了大量先進儀器，擁有美國BD公司流式細胞儀1臺、Roache 公司和MJ公司熒光定量PCR儀各1臺、Bio-rad凝膠電泳分析儀、SORVA高速低溫離心機、forma細胞培養箱6臺，熒光顯微鏡-正置、倒置-各1臺及照相系統一套（OLYMPUS）等，可為全院的科學實驗研究提供良好的實驗技術平臺。（一）流式細胞儀工作站單元具體位置：西京消化病院16樓單元簡介：本實驗室于2005年引進美國BD公司FACSCanto型流式細胞儀一臺。本儀器光學系統設計特點：1

4、）488nm，20mw固態激光器和633nm，17mw氦氖激光器；2）采用專利技術的光路設計擴展了可檢測的熒光信號（6色熒光參數，2個散色光），具有六個分別為488nm、530nm，585nm、670nm、780nm、660nm的熒光檢測通道3）高靈敏度，更適合檢測弱表達或含量極低的指標。可以通過熒光素標記對細胞顆粒熒光量的檢測并通過分析軟件獲取待檢樣本相應抗原的表達率、粒子表面特征。可應用于藥物篩檢、細胞周期分析、血液及骨髓細胞和淋巴細胞分析分選、癌癥研究、臨床檢驗等方面。該單元可提供血細胞或淋巴細胞的亞群檢測、細胞周期檢測、細胞凋亡檢測、細胞增殖實驗、免疫表型分析和可溶性分子檢測的檢測。本

5、實驗室提供一些常用的流式用熒光標記試劑，具體請咨詢腫瘤生物學國家重點實驗室。開放實驗項目：1.血細胞或淋巴細胞的亞群檢測（1）項目說明：本實驗室可以完成血細胞或淋巴細胞的亞群檢測。FCM采用各種抗血細胞表面分化抗原(CD)的單克隆抗體，借助于各種熒光染料測定一個細胞的多種參數，以正確地判斷出該細胞的屬性。各種血細胞系統都具有其獨特的抗原，當形態學檢查難以區別時，免疫表型參數對各種急性白血病的診斷和鑒別診斷有決定性作用。利用FCM可以測定出血細胞表達各種抗原的水平，協助臨床確診。淋巴細胞亞群的測定有助于了解機體免疫狀況及一些疾病的監測。臨床經常測定的淋巴細胞亞群包括T淋巴細胞 (CD3

6、+), T 輔助細胞 (CD3+CD4+), T 抑制細胞(CD3+CD8+), B 淋巴細胞（CD19+或CD20+），NK 細胞 (CD3-CD56+)等。（2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。（3）聯系方式：2.細胞周期檢測（1）項目說明：本實驗室可以進行動物細胞、培養細胞等各種細胞的細胞生長周期分析。在細胞的生長周期中，由于各個時期的DNA含量的不同，我們可以通過PI單染法標記DNA，并通過流式細胞儀分析各期中熒

7、光素量的同步，最后通過軟件分析處細胞各期的分布狀態，計算出G0G1,S, G2M，可以了解細胞的周期分布和增值活性。（2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。 （3）聯系方式：3.細胞凋亡檢測（1）項目說明： 本實驗室可完成腫瘤細胞、組織細胞、培養細胞等各種細胞的凋亡檢測。在細胞凋亡的過程中，由于細胞膜表面特定蛋白表達的改變，我們可以通過相應的熒光素標記這種特異蛋白，從而得到各期細胞（早期凋亡、晚期凋亡、活細胞以及壞死細胞）在總細胞中的比率。 （2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）

8、。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。（3）聯系方式：4.細胞增殖檢測（1）項目說明：本項目可對惡性腫瘤DNA含量進行分析。細胞用熒光染料(碘化吡啶PI)染色后，FCM對細胞的DNA含量進行分析，將不易區分的群體細胞分成三個亞群(G1期，S期和G2期)，DNA含量直接代表細胞的倍體狀態，非整倍體細胞峰的存在可為腫瘤診斷提供有力的依據。（2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。 （3）聯系方式：5.免疫表型分析（1）項目說明： 提供各種細胞表面抗原分析，包括細胞的膜抗原、核抗原等。我們通過特異性熒光

9、素標記目標抗原，而后通過流式細胞儀讀取各種熒光素的量，再通過軟件中單標、雙標甚至三標的分析，獲取相應抗原的表達率。為了解疾病的發病機理等提供直接或間接的支持依據。（2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。 （3）聯系方式：6.可溶性分子檢測（1）項目說明：本實驗室提供血清、血漿、培養液、腹水、關節液等各種體液中可溶性分子的檢測。我們通過流式微球分析技術，將包被各種抗原抗體的不同大小的微球與待測的相應成分形成抗原抗體復合物，再加入熒光微球標記的二抗，通過流式細胞儀檢測并通過軟件分析，得到所測的可溶性分子的含量。（2

10、）收費標準：（2）收費標準：不提供試劑30元/樣本（院內）； 40元/樣本（院外）。提供試劑70元/樣本（院內）；80元/樣本（院外）。 （3）聯系方式：（二）熒光定量PCR儀工作站單元具體位置：西京消化病院15樓單元簡介 本實驗單元擁有Roche 公司480型和MJ公司Chromo4熒光定量PCR儀各1臺。其中，LightCycler® 480是羅氏推出的最新型多功能定量PCR儀，具有當前定量產品中最高的特異性和靈敏度。可同時檢測96或384孔板樣品，結果可以通過PCR循環過程中實時熒光采集和軟件分析進行定量和基因型的分析。復雜的光學檢測系統可以進行多重PCR檢測，并適用于多種檢測

11、模式，序列特異的探針模式（雜交探針模式，簡單探針模式，水解探針模式或其他如分子信標，Scorpions等模式）以及非序列依賴的探針模式（SYBR Green I）。可進行熔解曲線分析進行突變檢測，產物分型和SNP研究。本實驗單元可提供核酸基因型及基因表達差異檢測分析。開放實驗項目：1. 基因型及基因表達差異分析：（1）項目說明：實時熒光定量 PCR 技術是 DNA 定量技術的一次飛躍。運用該項技術，我們可以對 DNA 、 RNA 樣品進行定量和定性分析。定量分析包括絕對定量分析和相對定量分析。前者可以得到某個樣本中基因的拷貝數和濃度；后者可以對不同方式處理的兩個樣本中的基因表達水平進行比較。除

12、此之外我們還可以對 PCR 產物或樣品進行定性分析：例如 利用熔解曲線分析識別擴增產物和引物二聚體，以區分非特異擴增；利用特異性探針進行基因型分析及 SNP 檢測等。（2）收費標準：不含試劑100元/次（院內）； 130元/次（院外）。（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522（三）細胞培養基病毒載體功能單元具體位置：西京消化病醫院16樓單元簡介：病毒載體系統（包括腺病毒載體、逆轉錄病毒載體、慢病毒載體）已經成為介導基因對哺乳動物細胞轉染的重要手段。與質粒DNA載體相比，病毒載體系統轉染效率高、目的基因表達效率高，表達水平穩定等優點。可提供：細胞的常規培養，重組病毒載體的包裝制備，重組病毒

13、載體的包裝，病毒顆粒的收集，滴度的測定，病毒載體對目的細胞的感染，倒置顯微鏡下攝像等服務。開放實驗項目：1. 細胞的常規培養（1）項目說明：本實驗室擁有的主要設備：SterilGARD Advanve生物安全柜2臺，超凈工作臺6臺，forma細胞培養箱6臺，普通倒置顯微鏡3臺，熒光顯微鏡-正置、倒置-各1臺及照相系統一套（OLYMPUS），低溫離心機1臺及相應的配套設備。細胞培養室24小時開放，定期定時室內消毒滅菌。可進行細胞的原代培養，復蘇與凍存，常規培養等。（2）收費標準：每人每天15元（院內），20元（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 847715222. 重組病毒載體的包裝制備（1）

14、項目說明：病毒載體攜帶的外源基因的表達往往會有一定的細胞毒性，甚至有時沒有細胞毒性的基因的中度水平的表達也會明顯阻礙病毒載體的復制和擴增。通過對病毒載體的重組，轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白，利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝。我們擁有豐富的腺病毒及慢病毒等的重組改裝經驗，能根據需要包裝制備不通的病毒載體。（2）收費標準：500元/病毒株（院內），700元（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 847715223. 病毒顆粒的收集（1）項目說明：通過表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基

15、中，通過低溫高速離心后，除去細胞碎片。濾器過濾，再次離心，反復2次，得到病毒濃縮液。分裝、-80保存。我們技術成熟，病毒濃縮液的滴度可達到1010TU/mL。能高效的進行感染及治療。 （2）收費標準：200元/病毒株、（院內），250元（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 847715224病毒滴度的測定（1）項目說明：通過倍比稀釋法將不同濃度梯度的病毒原液或病毒濃縮液感染293細胞，4 天后，觀察熒光表達情況。熒光細胞數隨稀釋倍數的增加而減少。采用GFP熒光FACS計數法來檢測病毒的滴度。該方法操作簡單，重復性好，是理想的檢測方法。（2）收費標準：100元/病毒株（院內），140元（院外）（

16、3）聯系方式：喬泰東 電話 847715225病毒載體對目的細胞的感染（1）項目說明：病毒載體具有感染的宿主細胞范圍廣，感染效率高，不僅可以感染正在分化的細胞，也可以感染靜止及非分裂的細胞，能高效地將目的基因轉導入體內和體外培養的細胞中去等優點。對于難感染的細胞，加入適當濃度的polybrene，可提高病毒感染效率2-8倍，提高MOI值，降低病毒用量。（2）收費標準：400元/細胞系（院內），200元（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 847715226病毒感染細胞的篩選與培養（1）項目說明：病毒載體感染細胞2448小時后，可檢測目的基因的表達及開始篩選。通過病毒載體的抗性表達，選擇合適的藥

17、物進行加壓篩選，1012天后可獲得穩定表達目的蛋白的細胞克隆。獲得穩定表達目的蛋白的細胞株后，可凍存或直接擴大培養用于體內體外實驗。（2）收費標準：每人每天160元（院內），200元（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 847715227. 成套服務：2000元/病毒株7倒置顯微鏡下攝像（1）項目說明：本實驗室擁有的倒置熒光顯微鏡，由倒置顯微鏡和落射熒光顯微鏡組成，儀器配有長工作距離平場消色差物鏡、大視野目鏡，倒置觀察時配置長工作距離平場相襯物鏡和帶相襯裝置的特長工作距離聚光鏡，熒光觀察時可進行激發濾色片組切換，具有成像清晰，視場廣闊，結構緊湊，造型美觀，操作舒適等特點，主要適用于培養瓶或培養

18、皿內活體細胞和組織、流質、沉淀物等顯微觀察，也可應用于未染色透明活體和熒光切片的熒光顯微觀察。（2）收費標準：20元/小時（院內），25元/小時（院外）（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522（四）蛋白質組學功能單元具體位置：西京消化病醫院16樓單元簡介：蛋白質組學研究是后基因組時代生命科學的一個重大研究方向。我實驗室的蛋白質組學功能單元為新興試驗單元，擁有從蛋白分離、制備、分析到檢測等一套完整技術方法和相配套設備。現有儀器設備主要包括：Sorvall超低溫高速離心機、超聲儀、Bio-rad酶標儀、Thermo多功能酶標儀、Bio-rad雙向電泳儀、Bio-rad電泳儀、Bio-rad半

19、干轉膜儀、Kodak洗片機、Bio-rad凝膠成像儀、Virtis凍干機、Savant離心濃縮機、ElISA洗板機；擬購置設備包括：Beckman低溫超速離心機、質譜分析儀。目前可提供的服務主要包括：亞細胞的分離；蛋白質濃縮；雙向電泳、Western blot以及單克隆抗體的制備。開放實驗項目：1. 光學分析檢測（1）項目說明：我實驗室擁有Varian 公司的CARY50型紫外分光光度計、Bio-rad Model680酶標儀和Thermo多功能酶標儀各一臺，可滿足所有的光學分析檢測。其中，CARY50型紫外分光光度計檢測的波長范圍為190nm-1100nm；Model680型酶標儀，可以進行

20、波長為405nm、450nm、490nm、630nm的樣品檢測。Thermo多功能酶標儀將熒光、比色、化學發光檢測和分液功能完美的結合，最多一次可同時完成384個樣本的檢測。（2）收費標準：CARY50型紫外分光光度計和Bio-rad Model680酶標儀50元/次（院內）； 80元/次（院外）。Thermo多功能酶標儀80元/次（院內）；100元/次（院外）。注：不含試劑。（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522；2. 亞細胞的分離（1）項目說明：亞細胞器的分離是保證蛋白質組學研究必不可少的工具。本實驗室利用密度梯度離心的方法、建立了細胞核、細胞漿、線粒體、內質網以及細胞漿膜蛋白成熟

21、的分離體系。本實驗室提供技術指導。另外，我實驗室配有超低溫高速離心機(Maxg X10,0000g)，可以在低溫環境中完成各種生物細胞、病毒、血清等有機物、無機溶液、懸浮液及膠體液的分離、濃縮和提取工作。主要可以提供細菌、蛋白、核算沉淀和細胞、細胞膜、亞細胞組份的分離。（2）收費標準：超低溫高速離心機30元/小時（院內）； 60元/小時。亞細胞器分離技術服務：面議。（3）聯系方式喬泰東 電話 84771522；3. 超聲破碎細胞樣品（1）項目說明：超聲破碎儀是利用一種超聲波在液體中產生空化效應的多功能、多用途的儀器；它能用于各種動植物細胞、病毒細胞、細菌及組織的破碎；可用于各類無機物質的破碎重

22、組；同時可用來乳化、分離、勻化、提取、消泡清洗及加速化學反應等。（2）收費標準：不含試劑100元/10分鐘（院內）； 130元/10分鐘（院外）。（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522；4.Western blot （1）項目說明：Western blot是蛋白質研究過程必不可少的研究方法。本實驗室提供Western blot的相關儀器、試劑和技術服務。配備的儀器主要包括Bio-rad酶標儀、Bio-rad電泳儀、Bio-rad半干轉膜儀、Bio-rad濕轉儀、Kodak自動洗片機、Bio-rad凝膠成像儀。（2）收費標準：技術服務（含試劑，不包括一抗）：300元/膠（一抗自帶）；全套

23、儀器設備使用，50元/天（院內）； 80元/天（院外）。 成套服務： 1000元/一目的蛋白、組（2-8樣品）（重復3次），（3）聯系方式： 喬泰東 電話 84771522；7.雙向電泳：（1）項目說明：本實驗擁有Bio-rad雙向電泳儀一臺，并提供雙向電泳相關技術服務。（2）收費標準：不含試劑，雙向電泳儀，100元/次（院內），150元/次（院外）；技術服務：面議。（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522；8.單克隆抗體的制備（1）項目說明：本實驗提供單克隆抗體制備和驗證的技術服務，蛋白樣品自備，試驗結束時提供特異性單抗兩株。（2）收費標準：單克制備及驗證，8000元/蛋白（院內），1

24、2000元/蛋白（院外）。（3）聯系方式：喬泰東 電話 84771522；（五）基因克隆與體外操作功能單元具體位置：西京消化病醫院15樓單元簡介：目前的醫學科學研究，無論是分子生物學水平還是細胞生物學水平，也無論是轉基因小鼠還是基因敲除小鼠的制備，實質上都是針對單個基因或蛋白質的“分子解剖性”研究。而要操縱一個基因或蛋白質的表達，離不開對其編碼基因或cDNA的克隆與操作。基因克隆與體外操作功能單元為國家認可的基因擴增檢測專業實驗室，擁有從DNA/RNA制備與目的基因檢測一套完整的技術方法，配備了MJ PCR和Roache熒光定量PCR儀、Bio-rad凝膠電泳分析儀、SORVA高速低溫離心機、

25、PICO臺式高速冷凍離心機、上海悅豐生化培養箱和東聯細菌培養搖床等，能獨立進行引物設計、真核細胞和原核細胞DNA/RNA提取、反轉錄、常規PCR、梯度PCR、實時熒光定量PCR等系列試驗，主要進行基因的體外擴增、克隆以及定點突變、截短、缺失和融合等改造，并進行各種DNA的大量擴增與制備，最終為后續的基因轉染提供條件。同時本實驗室具有豐富的基因克隆與體外操作實驗經驗，能更好的為實驗的開展提供技術上的支持。本單元我們可以提供用PCR或RT-PCR擴增目的基因的cDNA片段、目的基因與載體的重組、目的基因的定點突變、目的基因截短體、結構域缺失等突變體的制備、融合表達載體的制備、質粒DNA的大量擴增與

26、制備等技術支持和實驗服務。本實驗室備有常規的檢測試劑，具體請咨詢西京消化病醫院實驗室。開放實驗項目：1.用PCR或RT-PCR擴增目的基因的cDNA片段（1）項目說明：PCR技術全稱聚合酶鏈式反應,利用模板變性、引物退火和引物延長的多個循環來將一段目的DNA序列擴增到十萬到百萬倍，以便通過肉眼觀察到結果，是檢測核酸的一種高特異性、高靈敏度和高精確度的技術。RT-PCR即逆轉錄-聚合酶鏈反應，是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術，使檢測靈敏性提高了幾個數量級，更易于分析極為微量RNA樣品。PCR技術主要用于：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針

27、、構建RNA高效轉錄系統。本實驗室擁有多臺進口PCR儀，建立了RNA提取與目的基因檢測的一套較完整的技術方法，配備了凝膠電泳分析儀等設備，能進行引物設計、真核細胞RNA提取及反轉錄PCR（RT-PCR）、瓊脂糖電泳等實驗。可提供引物的設計合成、普通PCR方法的建立及分析等服務。（2）收費標準不含試劑：100元/樣本（院內）；140元/樣本（院外）。（3）聯系方式喬泰東 電話 847715222.目的基因與載體的重組（1）項目說明：目的基因與載體重組是將外源DNA與載體分子連接，重新組合DNA，包括粘端連接法和平端連接法。重組DNA技術一般包括四步：獲得目的基因；與克隆載體連接，形成新的重組DN

28、A分子；用重組DNA分子轉化受體細胞，并能在受體細胞中復制和遺傳；對轉化子篩選和鑒定。應用重組DNA技術可以克隆和擴增某些原核生物和真核生物的基因，從而可以進一步研究它們的結構和功能。另外還可以用于動植物育種和基因治療。本實驗室可以提供目的基因與載體重組的完整實驗設計及實驗室技術支持和結果的分析。（2）收費標準不含試劑：500元/樣本（院內）；700元/樣本（院外）。（3）聯系方式喬泰東 電話 847715223.目的基因的定點突變通過PCR等方法有效地向目的基因中引入任何所需的DNA變異，包括堿基的添加、刪除、點突變等，在實驗室中改造、優化基因，以迅速、高效地改變DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，從而研究蛋白質結構和功能之間復雜關系。定點突變技術可以用于研究蛋白質相互作用位點的結構、改造酶的不同活性或者動力學特性，改造啟動子或者DNA作用元件，提高蛋白的抗原性或者是穩定性、活性、研究蛋白的晶體結構，以及藥物研發、基因治療等等方面。本實驗室可以提供目的基因定點突變的完整實驗設計方案及實驗室技術支持和結果