1、o湖北普愛藥業有限公司驗證管理標準文件第1頁 共5頁消毒劑滅菌效J權驗證編號：PY-ZR-YZ-004-00 起草審核:批求.類別：技術標準日期：日期：日期：頒發部門：QA生效日期：年 月 日分發部門：驗證委員會、質量管理部、生產管理部消毒劑的選用原則：目的：確認各潔凈級別的操作間及設備外表面按照規定的消毒程序消毒能夠達到消毒、防止污染的目的，并在消毒劑有效期內能確保其消毒效力能符合要求。范圍：本驗證方案適用于本公司潔凈區的墻面、天花板、門窗、機器設備、儀器、操作臺、地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。1. 參考文件1.1. 醫療器械生產質量管理規范1.2. 中國藥典201

2、5版 第4部 微生物限度檢查法2. 概述2.1. 本公司的潔凈區為 D級，擬定用于潔凈區表面消毒的有五種消毒劑：75%J1、0.1%新潔爾滅溶液、0.2麻潔爾滅溶液、0.5%昔酸氯己定溶液、0.1狗酸氯己定溶液。本次驗證方案將選用以上5種消毒劑分別進行驗證試驗作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產生耐藥菌株。在利用消毒劑進行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應不少于10分鐘，利用消毒劑進行浸泡消毒的不少于5分鐘消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期名稱消毒對象175%乙醇用于設備表面、器具和手消毒。0.1%新潔爾滅 溶液0.2%勺新潔爾 滅溶液05%醋酸氯己 定溶液01%醋酸氯己

3、 定溶液用于地面、墻面、器具、工作服、 清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒用于水池和地漏的消毒用于水池和地漏的消毒用于工作服、清潔布、拖布和潔 凈鞋的消毒米用擦拭或噴密閉保存D級：30灑方式天米用擦拭或浸密閉保存D級：30泡方式天用于液封密閉保存天D級：30用于液封密閉保存天D級：30米用浸泡方式密閉保存天D級：30消毒方法有效期2.2. 為了確認消毒劑的消毒效力，通過實驗室考察部分和現場考察部分分別進行驗證。其中,消毒劑滅菌效果驗證用定量懸浮試驗法和表面實驗法進行實驗室考察試驗部分。潔凈區設施表面材質基本都是不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區設施表面進行驗證試驗。兩種試

4、驗方法作用的消毒劑見表。序號試驗方法消毒劑1表面實驗法75%乙醇20.1%f潔爾滅溶液3定量懸浮試驗法0.3%的新潔爾火溶液40.1%新潔爾滅溶液50.5%昔酸氯己定溶液60.1%昔酸氯己定溶液現場考察試驗部分選擇車間（D級）的配液間、灌裝間設備表面消毒前和消毒后分別進行取樣，測定其微生物數量。3. 確認前準備3.1. 驗證用試劑與材料3.1.1. 菌種序號名稱1 金黃色葡萄球菌2 大腸埃希菌3 枯草桿菌芬抱白色念珠菌3.1.2. 培養基序號名稱1 營養瓊脂培養基2 營養肉湯培養基胰酪大豆陳瓊脂培養基4胰酪大豆豚培養基大豆酪蛋白瓊脂培養基接觸碟5（編號： BZW12085序列號CMCC(B)2

5、6003CMCC(B)44102CMCC(B)63501CMCC(F) 98001備注培養基經 121c , 20min滅菌備用32規格：55mm取樣面積為25m消毒劑滅菌效果驗證6玫瑰紅鈉瓊脂培養接觸碟（編號： BZW151293.1.3. 消毒液擬定選用的中和劑序號消毒劑名稱中和劑備注175癡醇中和劑經1%W磷脂 +0.1%聚山梨酯 80121c , 20min火菌備用。20.1%新潔爾滅溶液30.2%的新沽奔滅洛液3.1.4. 稀釋液0.9%£菌氯化鈉溶液（NS3.1.5. 器具及設備lrr序號1名稱11無菌移液營2錐形瓶3無菌試管恒溫水浴鍋3.1.6. 恒溫恒濕培養箱3.1.

6、7. 恒溫恒濕培養箱3.2. 驗證用試劑與材料記錄見附錄1。4. 消毒劑消毒效力試驗4.1. 中和劑鑒定試驗4.1.1. 試驗目的通過該試驗，確認所用的中和劑對對應的消毒劑有良好的中和作用，對試驗用菌劑及其恢復期培養示范有害或不良影響。4.1.2. 菌液的制備及計數4.1.3. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，3035c培養1A24小時。取上述培養物用0.%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋85X 10CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養物的濃度已為1 X1085X 108CFU/mJ成 1X10可

7、不再用0.%無菌氯化鈉溶液稀釋）消毒劑滅菌效果驗證計數時，將1x10 85X 1C8CFU/m的工作菌液10倍系列稀釋成含 5g 100CFU/m菌液，并同時采用營養瓊脂培養基3g 35c培養2天計數。計算該稀釋級的平均菌落數，將計數結果換算成每毫升濃菌液的菌落數。4.1.2. 的色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，2328c培養2448小時。取上85X 1C8CFU/m的工作菌液述培養物用0.詠無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成1X10（如肉湯培養物的濃度已為1X10 85X 10CFU/ml可不再用0.%無菌氯化鈉溶液稀85X 10CFU/ml的工作菌液10倍

8、系列稀釋成含 5d 100CFU/ml釋）。計數時，將1X10菌液，并同時采用改良馬丁瓊脂培養基28 28c培養3天計數。計算該稀釋級的平均菌落數，將計數結果換算成每毫升濃菌液的菌落數。4.1.3. 鑒定試驗操作4.1.3.翦己制75%J1、0.1漸潔爾滅溶液、0.2%0吉爾滅溶液、40mg/L勺二氧化氯、60mg/L的二氧化氯，具體操作執行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20C ±1 C恒溫水浴鍋中備用。4.1.3.盼組操作試驗分組及稀釋操作方法簡表取混合液 B或混合液B的稀釋級溶液 0.5ml平板計數（2皿/組）-1混合液B、10-1混勻作用混合液B、1010min-2、1

9、03 310-2-310、 0-2、1035102皿。混合液A組號取0.5ml工作菌液加入下列溶液中1 消毒劑 4.5ml2 消毒劑 4.5ml中和劑4.5ml中和產物 4.5ml （消4毒液與中和劑比例為 1:1）稀釋液4.5ml6稀釋液和中和劑各具體操作第1組混合液B取混合液 A 0.5ml加入下列溶液稀釋液4.5ml混勻作用中和劑4.5ml10min稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml1.0ml注入無菌平皿中，各制備目的：觀察消毒液對試驗菌有無殺滅或抑制能力 操作:0.5ml稀釋液 4.5ml取消毒劑4.5ml+：作菌液0.5ml混勻作用10minJf ,取混合液消毒劑滅菌效

10、果驗證混勻作用10min取0.5m在皿，平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草 桿菌芽泡菌用營養瓊脂培養基，倒置30- 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基，倒置 23- 28c培養5天計數計數。第2組目的：觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗菌是否恢復生長。操作：取消毒劑4.5ml+：作菌液0.5ml混勻作用10min后，取¥M合液0.5ml用和劑4.5m,l -i混勻作用10min用稀釋液稀釋成10。分別取未稀釋溶液（混合液 0.5mll沖和劑4.5ml-1 0.5m注皿，各平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草的混合液）及10桿菌芽泡菌

11、用營養瓊脂培養基，倒置于 3g 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅 鈉瓊脂培養基，倒置于2A 28c培養5天計數。第3組目的：觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑4.5ml+：作菌液0.5mJ混勻作用10min取混合液0.5ml 1+稀釋液4.5mJ混勻作用10min后，用稀釋液進行 10倍系列稀釋成10-2、103o取相應稀釋級 0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽泡菌用營養瓊脂培養基，倒置30- 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基，倒置3035c培養3大計數計數。第4組目的：觀察中和產物，或未被完全中和殘留消毒劑對試驗菌的生長繁殖

12、是否有影響。操作：取消毒劑和中和劑 1:1的混合液4.5m1+C作菌液0.5成1混勻作用 10min取混合液-2-30.5ml 1稀釋液4.5m|混勻作用10min后，用稀釋液進行 10倍系列稀釋成10、10取相應稀釋級0.5ml注皿，各稀釋級平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯 草桿菌芽抱菌用營養瓊脂培養基，倒置30- 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基，倒置 3g 35c培養3天計。第5組目的：作菌落數對照用o操作:消毒劑滅菌效果驗證取稀釋液4.5ml+EE作菌液0.5mJ混勻作用10min取混合液0.5ml 1+稀釋液4.5mJ混勻作用10min后，用稀釋液進行

13、10倍系列稀釋成10-2、103o取相應稀釋級 0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養瓊脂培養基，倒置 30- 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基，倒置 3035c培養3天計數。第6組目的：作為陰性對照用操作：分別取稀釋液和中和劑各1.0ml注入無菌平皿中，各制備 2皿。4.1.3.3吉果判斷試驗結果應符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第1組無菌生長，或僅有少數試驗菌菌落生長。笫2組菌落數比第1組菌落數多卜但比第一3、4、5組菌落數少，且符命下表要求第1組平板平均菌落數第2組平板平均菌落數（x+5）y（y+0.5y）第&

14、; 4 5組有相似菌落數生長，其每組間菌落數誤差率不超過15%計算公式如下：（3組間菌落平均數-各組菌落平均數）的絕對值之和誤差率= X10嬴3切組間菌落平均數第6組無菌生長。否則，說明試劑有污染，應重新進行試驗。4.1.4.中和劑鑒定試驗記錄見附錄2。4.2.定量懸浮試驗4.2.1.試驗目的由于0.2%勺新潔爾滅溶液、0.1面潔爾滅溶液、60mg/二氧化氯溶液、0.5%昔酸氯 己定溶液、0.1加酸氯己定溶液是通過浸泡或液封消毒，通過定量懸浮試驗，確定其消 毒效力是否符合要求。4.2.2.試驗操作消毒劑滅菌效果驗證4.2.2.翦己制0.2%勺新潔爾滅溶液、0.1麻潔爾滅溶液、60mg/LX氧化

15、氯溶液、0.5%昔酸氯 己定溶液、0.1%昔酸氯己定溶液，操作執行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒 劑置20 ±1C恒溫水浴鍋中備用。4.2.2.*于0.2%勺新潔爾滅溶液、0.1面潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽胞，故定 量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%昔酸氯己定溶液、0.1吸酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽仙 故定量懸浮 試驗用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽泡桿菌。4.2.2.弱菌液制備成1 x10 85X10CFU/ml的工作菌液，菌液的制備及計數同8.1.24.2.2.4試管按需要分組排列在試管架上，試驗組分3組（4

16、min 5min 6mi諂一組），并由左向右逐管標明消毒劑、中和劑、 10-1、102。對照組分1組，并由左向右逐管標明稀釋液、中和劑、10 -1、102-3、1010 4。OO4.2.2.5&J個試管加入4.5m相應的試劑，標明10-1、102、10: 104。加入4.5m的稀釋液。加入4.5ml的稀釋液。迅速4.2.2.吸取工作菌液0.5m加入標明消毒劑的試管中，對照組加入標明稀釋液的試管中,混勻，并開始計時。4.2.2.7f菌液與消毒劑相互作用至8min 10min 12min吸取菌液和消毒劑混合液0.5ml加入標明中和劑的試管中，迅速混勻。-14.2.2.呼和作用10min后，

17、吸取0.5m加入標明10的試管中，混勻后吸取0.5m加入標明-2-410試管中（對照組以此類推，對照組直至10）。-1、102管溶液1ml按平皿法測定存活菌數；對照組取103、4.2.2. 馱驗組分別取中和劑管、1010-41m按平皿法測定存活菌數。每管平行制備2皿。4.2.2.0黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孑6菌用營養瓊脂培養基，倒置于30- 35c培養3天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基，倒置于2A 28c培養5天計數。4.2.3. 結果計算計算試驗組和對照組的活菌濃度（CFU/mJ ,并換算為對數值（N）,并按下式計算殺滅對數值：殺滅對數值（KL）=對照組平均活菌濃度的對數值

18、（NQ -試驗組活菌濃度對數值（NR4.2.4. 可接受標準殺滅對數值（KL應不低于35個對數單位。4.2.5. 定量懸浮試驗記錄見附錄3o湖北普愛藥業有限公司驗證管理標準文件第1頁 共5頁消毒劑滅菌效果驗證4.3.1. 試驗目的由于75%J1、40mg/L二氧化氯溶液、0.1漸潔爾滅溶液是通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進行表面試驗法，確定其消毒效力是否符合要求。4.3.2. 菌種選擇由于75雙酉1、0.1麻潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽胞，故定量懸浮試驗用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%昔酸氯己定溶液、0.1%酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽胞，故定量懸

19、浮試驗用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽泡桿菌。4.3.3. 工作菌液制備工作菌液的制備方法、濃度及驗證同步計數操作同8.1.24.3.4. 試驗操作4.34.1. 1)染菌不銹鋼載片制備將經滅菌的載片平鋪于無菌平皿內，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌85X 10CFU的菌液0.1或l并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，含菌量為1X10 載片置超凈工作臺晾干后備用。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片。（2）染菌玻璃載片制備因培養皿的材質為玻璃，故用培養皿代替玻璃載片進行染菌試驗。進行菌液滴染前， 用記號筆在培養皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50m睇50mm ,標

20、注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。4.3.42試驗組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時間分別為8min 10min 12min不銹鋼載片和玻璃載片每個作用時間分別制備2個。作用結束后，用接觸碟取樣（接觸碟規格：55mm取樣面積為25m 2）0取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽胞菌用大豆酪蛋白瓊脂培養基接觸碟（編號：BZW12085 ;取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養基接觸碟（編號：BZW15129。接觸碟取樣方法： 打開接觸碟蓋，使無菌培養基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，在蓋上跌蓋。對照組對照組的活菌濃度計

21、數見8.3.3 .消毒劑滅菌效果驗證陰性對照：用接觸碟在已滅菌的載片上（未染菌片的載）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。4.3.4/#將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌的接觸碟倒置于30- 35c培養3天計數；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于2328c培養5天計數計數。4.3.4.4果計算計算試驗組和對照組的活菌濃度（CFU/mJ ,并換算為對數值（N）,并按下式計算殺滅對數值：殺滅對數值（KL）=對照組平均活菌濃度的對數值（NQ -試驗組活菌濃度對數值（NR4.3.4.57接受標準殺滅對數值（KL應不低于35個對數單位。4.3.5.表面試驗法記錄見附錄54.4.現場考察試驗4.4.1. 消毒前對潔凈區進行表面微生物取樣。取樣地點：D級車間的配料間墻壁和設備表面、灌裝間墻壁和設備表面、中間站墻壁表面。取樣操作及檢驗執行表面微生物檢驗4.4.2. 生產操作結束后操作人員按照生產區清潔對潔凈區進行清潔消毒。4.4.3. 清潔消毒完畢15分鐘后，現場Q