1、2021級細胞工程復習資料(僅供參考)名詞解釋1、細胞工程：是應用生命科學理論,借助工程學原理與技術,有目的地利用或改造生物遺傳性狀,以獲得特定的細胞、組織產品或新型物種的一門綜合性科學技術.2、細胞全能性：一個生活細胞所具有的產生完整生物個體的潛在水平稱之為細胞的全能性.3、細胞分化：是指細胞在形態、結構和功能上發生差異的過程,包括時間上和空間上的分化.4、細胞脫分化：培養條件下使一個已分化的細胞回復到原始無分化狀態或分生細胞狀態的過程就是細胞脫分化(dedifferentiation).5、細胞再分化：再分化(redifferentiation)是指在離體條件下,無序生長的脫分化的細胞在適

2、當條件下重新進入有序生長和分化狀態的過程,事實上是基因選擇性表達與修飾的人工調控過程.6、細胞凋亡：也叫程序性死亡,是機體維持環境穩定、有基因限制的細胞自主的有序性死亡7、細胞壞死：是細胞受到化學因素、物理因素和生物因素等環境因素傷害,引起的細胞死亡現象.8、體細胞胚：又叫胚狀體,是指離體培養條件下沒有經過受精過程而形成的胚胎類似物.9、胚胎培養：是指對植物的胚及胚器官進行人工離體無菌培養.使其發育成幼苗的技術.10、胚乳培養：指處于細胞期的胚乳組織的離體培養.11、人工種子：又稱合成種子或體細胞種子,是指將植物離體培養的胚狀體或芽包裹在含有養分和保護功能的人工胚乳和人工種皮中的類似種子的顆粒

3、.12、看護培養：是指用一塊活潑生長的愈傷組織來看護單個細胞,使其持續分裂和增殖的一種培養方法.13、細胞系：是以一種細胞為主的、能在體外長期生存的不均一的細胞群體.14、細胞株：是指從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞別離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群.15、細胞固定化：是指將游離的細胞埋在支持物內部或外表、培養液成流動狀態進行培養的一門技術16、亞原生質體：在原生質體別離過程中,有時會引起細胞內含物的斷裂而形成一些較小的原生質體就叫做亞原生質體.它可以具有細胞核或沒有細胞核.17、胞質體：不含細胞核而僅含有局部細胞質的原生質體.18、對稱融合：即兩個完整的細胞間融合.19、

4、非對稱融合：利用物理或化學方法是某親本的核或細胞質失活后在與另外一個完整的細胞進行融合.20、體細胞雜交：是指將不同來源的體細胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術.21、植物離體受精：是指在體外無菌條件下培養未受精的子房、胚珠和花粉,使花粉萌發進入胚珠完成受精的技術.22、有限細胞系：不能連續培養的細胞系為有限細胞系.23、無限細胞系：能連續培養下去的細胞系為無限細胞系.24、單克隆抗體：經過免疫的哺乳動物單一的B淋巴細胞可以分泌單一抗體,這種具有特異性的、同性質的抗體為單克隆抗體.25、精子獲能：是指精子獲得穿透卵子帶水平的過程.26、體外受精：是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工限制的環境

5、中完成受精過程的技術.27、干細胞：是一類具有自我更新和分化潛能的細胞.28、成體干細胞：是成體組織內具有更新和進一步分化潛能的細胞.29、細胞融合：是指使用人工方法使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的技術.思考題1 .花藥培養時為什么要較高濃度蔗糖和較低濃度激素答：培養基中蔗糖濃度比其他組織培養高,尤其是早期培養,一般5%-10%o原因是花粉母細胞的滲透壓比花絲等體細胞高,及高濃度的蔗糖不利于藥壁、花絲等生長,而利于花粉生長.花壁分化程度很高,重新分裂需要較高的激素濃度才能啟動.因此,花藥培養基的激素水平要相對低一點才能抑制二倍體細胞的分裂.2 .用于建立懸浮細胞系的愈傷組織有何要求答：

6、松散性好、增殖快、再生水平強3 .一個好的懸浮細胞系有哪些特征答：4 .PEG立合與電融合各有哪些特點答：前者融合頻率高,誘發融合無特異性,毒性低.后者1融合率高、重復性強、對原生質體傷害小.2裝置輕巧、方便簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像融合過程3免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可限制性強5 .用于制備人工種子的繁殖體主要有哪些答：體細胞胚、微芽、微型變態器官6 .植物組織培養再生途經分析答：7 .植物組織培養問題分析1試管苗玻璃化現象；2褐變問題；3微生物污染問題；4其他問題：目前還有許多植物的組織培養沒有成功；在種苗工廠化生產過程中,最突出的一個問題是本錢高,投入資金較大,加大了種苗本錢

7、.8 .人工種子的概念及人工種子有何優點根據包被的需要程度可分為哪幾類答：優點：可以周年生產貯藏；能直接播種,可機械化操作和常規治理.包被分類：1裸露的或休眠的繁殖體2人工種皮包被的繁殖體3水凝膠包被皮的繁殖體9 .人工種子制作中胚狀體同步發育的主要方法1抑制劑法；2低溫法；3滲透壓法；4通氣法；5別離篩選法.10 .莖尖脫毒的根本原理植物脫毒的主要方法答：原理：感染病毒植株的體內病毒的分布并不均勻,病毒的數量隨植株部位及年齡而異,越靠近莖頂端區域的病毒的感染深度越低,生長點約0.1-1mm區域那么幾乎不含或含病毒很少.脫毒方法：一物理方法：高溫處理、低溫處理二化學方法三生物方法：莖尖培養、微

8、體嫁接法、愈傷組織誘導脫毒、珠心胚培養法、花藥培養脫毒11 .脫毒植物鑒定方法1直接檢測法2指示植物法3電鏡法4抗血清檢測法5分子檢測技術12 .適合于工業化生產的細胞株必須滿足的條件1分散性好,適合大規模懸浮培養2均一性好,細胞大小、生理性狀一致3生長速度快,培養周期短,不易染菌4目標產物含量高,容易別離提取5細胞遺傳穩定13 .一個成功的懸浮細胞系必須滿足哪三個條件答：1懸浮培養物分散性良好,細胞團較小,一般在3050個細胞以下,在實際培養中很少有完全由單細胞組成的植物細胞懸浮系.2均一性好,細胞形狀和細胞團大小大致相同.懸浮系外觀為大小均一的小顆粒,培養基清澈透亮,細胞色澤呈鮮艷的乳白或

9、淡黃色.3細胞生長迅速,懸浮細胞的生長量一般23天甚至更短時間便可增加一倍14 .細胞培養中要使培養細胞同步化有什么方法答：體積選擇法、冷處理法、抑制法、饑餓法15 .通過細胞培養生產次級代謝產物與植物栽培提取天然產物方法相比,有什么優點主要影響因素是什么答：1減少耕地占用面積,而且不受季節地域的限制2細胞培養是在無菌密閉條件下進行的,可以排除病菌和害蟲的影響3可以通過選擇優良細胞系和優化培養條件的方法得到超過整株植物產量的代謝產物4通過改造生物合成途徑獲得新的作用物質.影響：細胞遺傳特性、培養條件培養基、前提、調節因子等、放大過程中的影響因素:1通氣和攪拌引起的流體壓力已造成細胞損傷、有益氣

10、體的散失、大量氣泡的生成等,這些均會對細胞生長和產物積累產生影響.2高密度引起培養液粘度增加,造成營養吸收、氣體傳遞的抑制3反響器結構缺陷導致細胞粘附,引起細胞死亡、腐敗及營養和氣體吸收限制等.4對產物生物合成機制、途徑等不了解,因此很難維持最正確培養條件.16 .如何進行原生質體鑒定與活力測定答：鑒定：1低滲爆破法2熒光染色法活力測定：染色法：FDA法、伊文思藍法、酚藏花紅染色法胞質環流法滲透壓變化4氧電極法17 .原生質體培養中如何穩定培養基的PH?答：為了維持酶液的PH恒定,常用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液來配制酶液.此外,MES寸保持酶解液的酸堿環境也有緩沖作用.18 .為什

11、么說細胞工程是一門承上啟下的技術舉例說明答：19 .人工種子的應用前景如何需要解決哪些問題答：一微器官人工種子可能最先用于無性繁殖植物及天然種子繁殖變異大的植物.二繁殖水平差,結子困難,發芽率低等問題.20 .你對動物克隆技術怎樣看待如何正確應用動物克隆技術答：首先,違背了倫理學的自主原那么,被克隆者作為人所享有的獨特性被粗暴的剝奪了.其次,克隆人違背了倫理學的平等原那么.二保存優良的動物品種；拯救瀕臨滅絕的珍惜動物；利用克隆動物工廠生產蛋白質藥物,開展新型的醫藥工業；利用克隆技術生產人體器官,擴大器官移植所需的器官來源.21 .目前鑒定雜種植物的方法主要有答：形態鑒定：根據雙親的形態學性狀觀

12、察進行鑒定.細胞學鑒定：細胞器鑒定、染色體鑒定.生化鑒定：同功酶鑒定.分子鑒定：RFLP鑒定、RAPEfe記鑒定.22 .舉一例說明體細胞雜交在植物育種中的應用?答:23 .分析植物單倍體與純合二倍體在植物遺傳育種中的意義?答：24 .植物轉基因有哪些方法如何鑒定轉基因植物答：方法：直接導入法、在體介導法、花粉管通道法、病毒感染法鑒定：選擇性培養鑒定、遺傳標記檢測、目的基因檢測25 .根據培養條件下動物細胞的生長特性,動物細胞可以分為幾個類型答：貼壁依賴型、非貼壁依賴型、兼性貼壁細26、胞動物細胞培養具有的特點1動物細胞比微生物細胞大,無細胞壁；2動物細胞倍增時間長,生長緩慢；3培養過程需氧量

13、少,對機械攪拌或剪切力敏感；4動物細胞間主要以聚集體形式存在；5原代細胞一般繁殖50代左右即退化死亡；6動物細胞對于營養要求更加苛刻,除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖或半乳糖外,一般還需要血清；7對于培養環境及其敏感,包括PH溶解氧、溫度、剪切刀等；8細菌、真菌、病毒、支原體均可導致動物細胞培養物的污染；9絕大多數哺乳動物細胞只有貼附在固體或半固體的外表才能生長.27、單克隆抗體的生產途徑一細胞融合將免疫動物B細胞和骨髓瘤細胞融合,得到的融合細胞稱之為雜交瘤.雜交瘤細胞具有分泌特異性抗體B淋巴細胞特性以及骨髓瘤細胞體外無限增殖的特性.二病毒轉化通過對脾臟B淋巴細胞進行某一特異性免疫,繼而進行誘變

14、或通過病毒轉化形成永久生長的細胞系.28、如何進行性別限制答：1免疫別離法：利用H-Y抗體檢測精子質膜上是否存在H-Y抗原2離心別離法X精子DNA含量略大于丫精子3電泳別離法：丫精子帶負電荷略小于X精子4流式細胞別離法：用流式細胞別離器別離X精子和Y精子5法學藥品處理法：X、Y精子嗜酸堿性不同.29、為什么自然界中多倍體植物多而多倍體動物少植物多陪表達象比動物廣泛,植物遠緣雜交水平強,異花傳粉.多為異源多倍體.動物多倍體少,高度不育.低等動物存在,多為同源多倍體.植物的繁殖比擬容易,如果多倍體植物不能形成種子,它還能依靠營養器官的無性繁殖來產生后代,因此在生物進化過程中,植物多倍體有可能被保存

15、下來.而動物那么不同,尤其動物有性別分化后,太多數動物是雌雄異體,染色體稍不平衡,就會造成聯會紊亂,引起不育,甚至使動物個體不能成活.即使有多倍體的動物的個體的話,通常也只能靠無性生殖來維持.而無性生殖的個體對環境的適應水平很弱,因此進化中很難形成一種穩定的遺傳.30、干細胞的特點答：成體干細胞具有可塑性,即來源于各種組織的成體干細胞事實上并未定型,一旦處于一個新的環境中,它們將有可能分化為其它類型的細胞.成體干細胞注入體內后,有明顯的趨化性,能較明顯地集中到達受損傷的部位,在局部微環境的誘導下,發生明顯地誘導分化,使成體干細胞向損傷組織修復所急需的組織細胞分化,從而促進受損傷組織修復.由于成

16、體干細胞的這種特性,較胚胎性干細胞更廣泛地應用于臨床及研究工作.31、組織工程三要素答：細胞、支架材料和生長因子32、簡述體外培養動物細胞生長和增殖過程的幾個主要階段答：培養細胞一代生長過程：1潛伏期2指數生長期3穩定期4衰退期33、試管苗玻璃化現象的防治舉措.34、試管苗褐變的防治舉措.試管苗褐變的因素1植物基因型.在不同植物或同種植物不同基因型的組培過程中,褐變發生的頻率和嚴重程度存在很大的差異,這是由于各種植物所含的單寧及其他酚類化合物的數量不同.一般木本植物的酚類化合物含量比草本植物高,更易發生褐變現象.核桃的單寧含量很高,不僅在接種初期發生褐變,在形成愈傷組織后還會由于褐變而死亡；蘋

17、果進行莖尖培養時,不同品種之間褐變的程度也不一樣.對葡萄的研究也發現類似情況.2外植體的生理狀態外植體的生理狀態不同,接種后褐變程度不同.一般外植體的老化程度越高,其木質素的含量也越高,也就越容易褐變,成齡材料一般均比幼齡材料褐變嚴重.另外切口越大,酚類物質的被氧化面也越大,褐變程度就會更嚴重.因此外植體的受傷程度對褐變的產生具有明顯的影響,傷口加劇褐變的發生.仙客來小葉誘導時,整片葉接種較分成多塊褐變要輕.除機械損傷外,各種消毒劑對外植體的傷害也會引起褐變,對于不易褐變的種類,用升汞消毒后,一般不會引起褐變,假設用次氯酸鈉進行消毒,那么很容易引起褐變的發生.3取材時間和部位在不同的生長季節,

18、植物體內酚類化合物含量和多酚氧化酶的活性不同.實驗說明在蘋果和核桃上,冬、春季取材褐變死亡率最低,夏季取材很容易褐變.在取材部位上幼嫩莖尖比其他部位褐變程度低,木質化程度高的節段在進行藥劑消毒處理后褐變現象更為嚴重.4培養基在初代培養中,培養基中無機鹽濃度過高,會引起酚類物質大量產生,導致褐變.BA和KT不僅促進酚類化合物合成,而且刺激多酚氧化酶的活性,增加褐變；而生長素類如NAA和2,4-D可延緩多酚合成,減輕褐變.采用液體培養基紙橋培養；可使外植體溢出的有毒物質很快擴散到液體培養基中,效果也很好.5光照在采取外植體前,如果將材料或母株枝條進行遮光處理,然后再切取外植體培養,能夠有效地抑制褐變的發生.將接種后的初代培養材料在黑暗條件下培養,對抑制褐變發生也有一定的效果遮光抑制褐變的原因主要是由于氧化過程中,許多反響受酶系統控制,而酶系統活性受光照影響.但是,暗培養時間過長會降低外植體的生活水平,甚至引起死亡.6溫度.高溫促進酚氧化,培養溫度越高,褐變越嚴重,而低溫可抑制酚類化合物氧化,降低多酚氧化酶的活性,從而減輕褐變.在15-25C下培養卡特蘭,比在25c以上時褐變要輕,在17c以下培養天竺葵莖尖比在17