1、植物葉綠素含量測定 無水乙醇提取法摘要：本文是主要是用無水乙醇提取法提取葉綠素以及用比色法測定葉綠素的含量實驗的綜述。關鍵詞：葉綠素的提取、含量測定、無水乙醇、比色法前言：高等植物光合作用過程中利用的光能是通過葉綠體色素 光合 色素吸收的。葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素 組成。葉綠體色素的提取、 別離和測定是研究它們的特性以及在光合 中作用的第一步。 葉片葉綠素含量與光合作用密切相關， 是反眏葉片 生理狀態的重要指標。 在植物光合生理、 發育生理和抗性生理研究中 經常需要測定葉綠素含量。 葉綠素含量也是指導作物栽培生產和選育 作物品種的重要指標。正文：一、原理 葉綠素不溶于水

2、，溶于有機溶劑，可用多種有機溶劑，如丙酮、 乙醇或二甲基亞砜等研磨提取或浸泡提取。 葉綠色素在特定提取溶液 中對特定波長的光有最大吸收， 用分光光度計測定在該波長下葉綠素 溶液的吸光度 也稱為光密度 ，再根據葉綠素在該波長下的吸收系數 即可計算葉綠素含量。利用分光光計測定葉綠素含量的依據是 Lambert-Beer 定律，即 當一束單色光通過溶液時， 溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的 乘積成正比。其數學表達式為：A=K*b*c式中：A為吸光度；K為 吸光系數；b為溶液的厚度；c為溶液濃度；葉綠素a、b的丙酮溶 液在可見光范圍內的最大吸收峰分別位于 663、645nm處。葉綠素a 和b在66

3、3nm處的吸光系數當溶液厚度為1cm，葉綠素濃度為g?L-1 時的吸光度分別為82.04和9.27 ;在645nm處的吸光系數分別為16.75和45.60。根據Lambert-Beer定律，葉綠素溶液在 663nm和645nm處的吸光度A663和 A645與溶液中葉綠素a、b和總濃度a+bCa Cb、Ca十b,單位為g?L-1，的關系可分別用以下方程式 表示：A663=82.04Ca+9.27Cb 1A645=16.76Ca+45.60Cb 2解方程 1和 2得：Ca=12.7 A6632.59 A645 (3)Cb=22.9 A6454.67 A663 (4)Ca十 b = 20.3 A64

4、5 8.04 A663 (5)二、實驗的材料、儀器、藥品1 材料：植物綠色葉片。2儀器：分光光度計、比色皿、天平、研缽、濾紙、漏斗、滴管、 剪刀、 50ml 容量瓶。三、實驗步驟1葉綠素的提取：用洗衣粉先將葉片外表的油跡和灰塵清洗干凈, 晾干后,用電子天平準確稱取紫背草葉子,剪碎后放入研缽中。向研缽中參加23ml 95臨醇，再少許CaCO和石英砂，研磨成勻漿， 再參加10ml無水乙醇，繼續研磨至組織變白，在暗處靜止35mi n。取1張濾紙于漏斗中，用無水乙醇濕潤，將研磨液沿玻璃板導入漏斗 中過濾，用無水乙醇沖洗研缽、研棒以及濾渣數次，濾液移至50mL容量瓶，最后用無水乙醇定容至 50mL即為提

5、取液。2. 吸光度的測定：取潔凈比色皿，注意不要用手接觸比色皿的光面， 先用少量色素提取液清洗23次，注意清洗時要使清洗液接觸比色皿 內壁的所有局部，然后將色素提取液倒入比色皿中，液面高度約為比 色皿高度的4/5 ,將撒在比色皿外面的溶液用濾紙吸掉注意不能擦， 再用擦鏡紙擦干擦凈。將比色皿放入儀器的比色皿架上， 注意不要將 溶液撒入儀器內。第一個位置放盛有無水乙醇的比色皿， 做為空白對 照。將儀器波長分別調至 663、645nm處，以無水乙醇做為空白對照 調透光率100%分別測定溶液在上述三個波長下的吸光度。每個樣 品重復測定3次。注意，每次在轉換波長時，都要用無水乙醇調透光 率 100%四、

6、結果計算1. 結果計算：將663、645nm處測得的吸光度代入上述原理中的公式3、4、 5中計算葉綠素a、b濃度和總濃度。并將實驗結 果記錄如下：A645 吸光值A663 吸光值葉綠素a葉綠素b葉綠素總含量九里香稀釋前稀釋5倍后紫背葉五、結果分析與實驗總結1.葉綠素提取液所使用的樣品總質量不同， 所稱取的九里香的樣品質 量為1g導致測得其吸光度大于1,用該組數據計算會導致實驗最終 結果誤差較大，故現將該種九里香的葉綠素提取液先稀釋五倍， 再測定，得到了正常的吸光度數值。2. 葉綠素不溶于水，溶于有機溶劑，可用多種有機溶劑如乙醇、丙酮或二甲基亞砜等研磨提取或者浸泡提群法提取葉綠素。本實驗使用的分析純是乙醇，相對于丙酮乙醇混合液來說，其效果相對較低。3