1、期末考試復(fù)習(xí)題吸附法和離子交換1、吸附作用機(jī)理是什么？按作用力可分為哪幾種？答：固體表面分子（或原子）處于特殊的狀態(tài)。固體內(nèi)部分子所受的力是對(duì)稱的，故彼此處于平衡。但在界面分子的力場(chǎng)是不飽和的，即存在一種固體的表面力，它能從外界吸附分子、原子、或離子，并在吸附表面上形成多分子層或單分子層。按作用力可分為：物理吸附，化學(xué)吸附和離子交換2、吸附法有幾種？各自有何特點(diǎn)？答：吸附法按吸附作用力分主要有三類，物理吸附、化學(xué)吸附和離子交換。特點(diǎn)：物理吸附基于吸附劑與溶質(zhì)之間的分子間作用力即范德華力。溶質(zhì)在吸附劑上吸附與否或吸附量的多少主要取決于溶質(zhì)與吸附劑極性的相似性和溶劑的極性。一般物理吸附發(fā)生在吸附劑

2、的整個(gè)自由表面，被吸附的溶質(zhì)可通過(guò)改變溫度、PH和鹽濃度等物理?xiàng)l件脫附。化學(xué)吸附釋放大量的熱，吸附熱高于物理吸附。化學(xué)吸附一般為單分子層吸附，吸附穩(wěn)定，不易脫附，故洗脫化學(xué)吸附質(zhì)一般需采用破壞化學(xué)結(jié)合的化學(xué)試劑為洗脫劑。化學(xué)吸附具有高選擇性離子交換吸附所用吸附劑為離子交換劑。離子交換劑表面含有離子基團(tuán)或可離子化基團(tuán)，通過(guò)靜電引力吸附帶有相反電荷的離子，吸附過(guò)程發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移。離子交換的吸附質(zhì)可以通過(guò)調(diào)節(jié)PH或提高離子強(qiáng)度的方法洗脫。3、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附與活性炭吸附劑相比有何優(yōu)缺點(diǎn)？答：大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑機(jī)械強(qiáng)度高，使用壽命長(zhǎng)，選擇性能好，吸附質(zhì)容易吸附，并且阻力小，常應(yīng)用于抗生素和維生素B1

3、2等的分離濃縮過(guò)程。4、影響吸附過(guò)程的因素有那些？答：影響吸附的因素（1）吸附速度由于大分子分子量大，擴(kuò)散慢，且吸附時(shí)常伴隨著分子構(gòu)型的變化，故其吸附速度慢，這就給討論大分子吸附帶來(lái)困難。（2）分子量的影響對(duì)孔性固體，分子量增加，吸附量減少。對(duì)大孔或非孔固體口=1只有1個(gè)吸附點(diǎn)a=昧示大分子完全平躺。（3）溶劑的影響在溶劑中，大分子較伸展，吸附量減少。若溶劑產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)吸附，吸附量減少。（4）溫度的影響存在著溫度升高使吸附量下降和溫度升高使吸附量升高兩種情況。第二種情況可認(rèn)為吸附是吸熱過(guò)程H>o,但G<Q故$必大于零，這可認(rèn)為大分子的吸附頂替了固體表面上的溶劑分子（第一種情況可認(rèn)為是焓

4、控制）。（5）PHS活性炭一般在酸性溶液中比在堿性溶液中吸附效果較好。（6）共存物質(zhì)：對(duì)于物理吸附，共存多種物質(zhì)時(shí)的吸附比單一物質(zhì)時(shí)的吸附要差。（7）吸附劑性質(zhì)的影響（a）溶解度：越低越容易吸附，具有較大的影響。（b）使液體表面自由能W翁低得越多的吸附質(zhì)則越容易被吸附。（c）極性：極性吸附劑易吸附極性的吸附質(zhì)，非極性吸附劑易吸附非極性的吸附質(zhì)(d)吸附質(zhì)分子的大小和不飽和度。活性炭易吸附分子直徑較大的飽和化合物；合成沸石易吸附分子直徑小的不飽和化合物(e)吸附質(zhì)的濃度較低時(shí)，提高CM增加吸附量。以后CT,q增加很小，直至為一定值5、何謂離子交換法?一般可分為那幾種?答：離子交換吸附：吸附劑為離

5、子交換劑，離子交換劑表面含有離子基團(tuán)或可離子化基團(tuán)，通過(guò)靜電引力吸附帶有相反電荷的離子，吸附過(guò)程中發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移，離子交換的吸附質(zhì)可通過(guò)調(diào)節(jié)PHE提高離子強(qiáng)度的方法洗脫。根據(jù)吸附過(guò)程中所發(fā)生的吸附質(zhì)吸附劑之間的相互作用的不同，還可將吸附分成親和吸附、疏水吸附、鹽析吸附和免疫吸附等。6、離子交換樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)、組成？按活性基團(tuán)不同可分為那幾大類？離子交換劑通過(guò)化學(xué)修飾制備，主要有苯乙烯-二乙烯苯型、丙烯酸-二乙烯苯型、酚醛型和多乙烯多胺-環(huán)氧氯丙烷型樹(shù)脂。這些交換劑附著在離子交換劑基質(zhì)上。應(yīng)用于無(wú)機(jī)離子交換和生物小分子回收、提取的離子交換劑疏水性高、交聯(lián)度大、孔徑小、電荷密度高；應(yīng)用于蛋白質(zhì)分離的具有

6、很高的親水性和較大的孔隙半徑，以減少蛋白質(zhì)的非特異性吸附，是蛋白質(zhì)容易進(jìn)入離子交換劑的內(nèi)部。按活性基團(tuán)的不同，可分為：活性基團(tuán)為酸性的陽(yáng)離子交換劑和活性基團(tuán)為堿性的陰離子交換劑。7、離子交換樹(shù)脂有那些理化性能指標(biāo)？答：(1)交換容量(exchangecapacity)指單位質(zhì)量的干燥離子交換劑或單位體積的濕離子交換劑所能吸附的一價(jià)離子的毫摩爾數(shù)(mmol)，是表征交換劑離子交換能力的主要參數(shù)。PS:交換容量的測(cè)定：對(duì)于陽(yáng)離子交換劑：用HCl將其處理成氫型，稱重并測(cè)定其含水量；稱數(shù)克交換劑，加入到過(guò)量已知濃度的NaOH容液，發(fā)生交換反應(yīng)，待反應(yīng)達(dá)到平衡后（強(qiáng)酸性的需要靜置24h,弱酸性的需靜置數(shù)

7、日），測(cè)定剩余的NaOH»爾數(shù)，就可求得陽(yáng)離子交換劑的交換容量。對(duì)于陰離子交換劑：將陰離子交換劑轉(zhuǎn)換成Cl型后，取一定量的Cl型交換劑，通入Na2SO4用銘酸鉀作指示劑，用硝酸銀溶液滴定流出液的Cl-,根據(jù)Cl-量計(jì)算交換容量。（2）滴定曲線（全面評(píng)價(jià)表征交換劑的重要參數(shù)）方法：1g氫型（或羥型）交換劑+x-ml0.1MNaOH/orHCl+水至50ml（其中1支+50ml0.1MNaCl）+靜置24h（對(duì)強(qiáng)交換齊）/or7d（對(duì)弱交換齊）+測(cè)pH+作圖意義：強(qiáng)酸（堿）性離子交換的滴定曲線開(kāi)始是水平的，到某點(diǎn)突然升高（或降低），表明在該點(diǎn)交換劑上的離子交換基團(tuán)已被堿（或酸）完全飽和；

8、弱酸（或堿）性離子交換劑的滴定曲線逐漸上升（或下降），無(wú)水平部分。利用滴定曲線的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，可估算離子交換劑的交換容量；而由轉(zhuǎn)折點(diǎn)的數(shù)目，可推算不同離子交換基團(tuán)的數(shù)目。8、pH值是如何影響離子交換分離的？XHKAXXHmXRXXXHKxuRUKaxmXUKaxH可見(jiàn)當(dāng)PH值增大時(shí)弱電解質(zhì)的離子交換的分配系數(shù)增大，而對(duì)強(qiáng)電解質(zhì)沒(méi)有影響，可從下式看出mxRX-XmxKxuRU-.U9、何謂穿透曲線？答：穿透曲線（1）吸附帶：指正在發(fā)生吸附作用的那段填充層，在吸附帶下部的填充層幾乎沒(méi)有發(fā)生吸附作用，而在吸附帶上部的填充層已達(dá)到飽和狀態(tài)，不再起吸附作用。（2）穿透曲線：以吸附時(shí)間或吸附柱出水總體積為橫坐標(biāo)

9、，以出水吸附質(zhì)濃度為縱坐標(biāo)所繪制出的曲線叫穿透曲線。另解：吸附過(guò)程中吸附塔出口溶質(zhì)濃度的變化曲線穿透曲線（3）穿透點(diǎn)：出口處溶質(zhì)濃度開(kāi)始上升的點(diǎn)成為穿透點(diǎn)。達(dá)到穿透點(diǎn)所用的操作時(shí)間稱為穿透時(shí)間。一般習(xí)慣上將出口濃度達(dá)到入口濃度的5%10%的的時(shí)間成為穿透時(shí)間。（4）吸附終點(diǎn)：出水濃度CM（0.900.95）Co時(shí)所對(duì)應(yīng)的出水總體積的穿透曲線上的那一點(diǎn)叫吸附終點(diǎn)（耗竭點(diǎn)）。色層分離1、何謂色層分離法？可分為那幾大類？答：色層分離法：又稱層析分離法，色譜法，是利用混合物中各物質(zhì)在兩相間分配系數(shù)的差別，當(dāng)溶質(zhì)在兩相間做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，各物質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次分配從而是各組分達(dá)到分離的一種物理化學(xué)分析方法。

10、2、簡(jiǎn)述柱層析系統(tǒng)的工藝流程。答：層析柱通常是玻璃的。總的說(shuō)來(lái)，長(zhǎng)柱分辨好。但大量物質(zhì)的處理則用粗的柱比較適宜。工藝流程如下：（1）層析材料的準(zhǔn)備許多材料都可在層析法中使用。在裝柱前這些材料要用溶劑平衡，另外還需作一些預(yù)處理。例如，凝膠層析材料需要溶脹，吸附劑需要加熱或酸處理來(lái)活化，離子交換樹(shù)脂需要用酸堿處理來(lái)得到所需的電離形式。在用溶劑平衡時(shí)，先使材料沉淀，用傾瀉法除去懸浮的細(xì)顆粒，否則由于細(xì)顆粒的堵塞，溶劑的流速將顯著降低（2）裝柱層析柱的填裝是先關(guān)閉出口，用溶劑灌注至13體積，并使支持板下的“死體積”不存有氣泡，再慢慢地向溶劑中加漿狀物，要小心地沿著玻棒傾注以防止氣泡存留在拄內(nèi)。讓?xiě)腋∫?/p>

11、沉淀，并放出過(guò)多的溶劑。為了避免分層，最好一次裝完，如需分幾次填裝，則在二次填裝前應(yīng)先在已經(jīng)沉淀的表面用玻棒攪拌后再傾注，重復(fù)這個(gè)過(guò)程，直至裝到需要的高度。用溶劑徹底洗滌層析柱后使液面降到比層析床表面略高一點(diǎn)。最后覆蓋一張圓形濾紙或尼龍布，以免加樣時(shí)擾亂床表面。（4）加樣上柱前，先將樣品溶解在溶劑里或?qū)ο疵撘和肝觯瑯悠啡芤旱臐舛葢?yīng)該盡可能高些，以減少樣品溶液體積，使區(qū)帶狹窄。將樣品仔細(xì)加到層析床的表面，打開(kāi)旋塞至液面與床面齊，然后連接溶劑池，保持一定高度的液面。（5）洗脫用適當(dāng)?shù)南疵撘喊迅鹘M分依次從柱上洗脫下來(lái)。使用洗脫法，上柱量不超過(guò)總柱容量的10，溶劑與柱的相互作用比溶質(zhì)與柱的相互作用弱，

12、溶劑越過(guò)結(jié)合的分子，逐漸地將它們從柱上沖洗下來(lái)。在沖洗過(guò)程中各組分因?yàn)槲搅Σ煌饾u分離。在一個(gè)組分被洗脫后可以更換洗脫液，這就是所謂的分步洗脫。另外，還有一個(gè)可行的方法是逐漸改變?nèi)軇┑男再|(zhì)，形成一個(gè)離子強(qiáng)度、pH£極性的遞增梯度從而使各組分依次被洗脫，這種方法稱梯度洗脫，它的優(yōu)點(diǎn)之一是能夠減少拖尾現(xiàn)象。（6）部分收集及分析柱的流出液可以用人工的方法收集到一系列試管中或使用部分收集器。這種裝置能使每一管按照預(yù)定的時(shí)間或滴數(shù)收集流出液，然后自動(dòng)移位，下一管再繼續(xù)收集。洗脫完畢后可選用各種適宜的方法將已收集的許多部分流出液進(jìn)行定量分析，并畫(huà)出洗脫物的量對(duì)流出液體積的洗脫曲線。每一部分的

13、蛋白質(zhì)或核酸的含量可以讓流出液通過(guò)一個(gè)流動(dòng)小室測(cè)定其280nnm£260nmt勺光吸收來(lái)進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)。3、何謂保留值、分配容量K、分離度？答：1）保留值（1）死時(shí)間t0不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進(jìn)入色譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時(shí)間稱為死時(shí)間，它正比于色譜柱的空隙體積。因?yàn)檫@種物質(zhì)不被固定相吸附或溶解，故其流動(dòng)速度將與流動(dòng)相流動(dòng)速度相近。測(cè)定流動(dòng)相平均線速U時(shí)，可用柱長(zhǎng)L與t0的比值計(jì)算，即u=L/to（2）保留時(shí)間tr試樣從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)峰極大點(diǎn)時(shí)所經(jīng)過(guò)的時(shí)間，稱為保留時(shí)間(3)調(diào)整保留時(shí)間tr'a某組分的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后，稱為該組分的調(diào)整保留時(shí)間，即tr'

14、;=trt0b由于組分在色譜柱中的保留時(shí)間tr包含了組分隨流動(dòng)相通過(guò)柱子所須的時(shí)間和組分在固定相中滯留所須的時(shí)間，所以tr實(shí)際上是組分在固定相中保留的總時(shí)間。c保留時(shí)間是色譜法定性的基本依據(jù)，但同一組分的保留時(shí)間常受到流動(dòng)相流速的影響，因此色譜工作者有時(shí)用保留體積來(lái)表示保留值。(4)死體積V0指色譜柱在填充后，柱管內(nèi)固定相顆粒間所剩留的空間、色譜儀中管路和連接頭間的空間以及檢測(cè)器的空間的總和。當(dāng)后兩相很小可忽略不計(jì)時(shí)，死體積可由死時(shí)間與色譜柱出口的載氣流速Fco(cm3-min-1)計(jì)算。V0=t0*Fco式中Fco為扣除飽和水蒸氣壓并經(jīng)溫度校正的流速。b僅適用于氣相色譜，不適用于液相色譜。(

15、5)保留體積Vr指從進(jìn)樣開(kāi)始到被測(cè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所通過(guò)的流動(dòng)相的體積。保留時(shí)間與保留體積關(guān)系：Vr=tr*Fco(6)調(diào)整保留體積V某組分的保留體積扣除死體積后，稱為該組分的調(diào)整保留體積。V=Vr-V0=tr'*Fco(7)相對(duì)保留值r2,1某組分2的調(diào)整保留值與組分1的調(diào)整保留值之比，稱為相對(duì)保留值。r2,1=tr2'/tri'=Vr2'/Vr1'由于相對(duì)保留值只與柱溫及固定相性質(zhì)有關(guān)，而與柱徑、柱長(zhǎng)、填充情況及流動(dòng)相流速無(wú)關(guān)，因此，它在色譜法中，特別是在氣相色譜法中，廣泛用作定性的依據(jù)。2）容量因子，即分配比k分配比又稱容量因子，它是指在

16、一定溫度和壓力下，組分在兩相間分配達(dá)平衡時(shí)，分配在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量比。即k=組分在固定相中的質(zhì)量/組分在流動(dòng)相中的質(zhì)量=ms/mm3）分離度定義式分離度：又稱分辨率，是兩個(gè)相鄰洗脫峰之間的距離與兩個(gè)峰寬的代數(shù)平均值之比（衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)）.“中解一二型（嶂項(xiàng)r可m.仁小"峰寬和之半.丐+嗎y田迎加-5）m%-5）ni+%用5舊尺=L0T口!4=4t7=>從本,i耳討R215Tli=6bn完全分離愴完全未分開(kāi)4、色層圖中分離度有哪幾種表示方法？見(jiàn)課本p169分辨率表示法R=2（9R29R1）/（W1+W2）容量因子表示法k'=mH選擇性表示法a=K2

17、9;/K1'柱效表示5、層析劑有那幾種？各自有何特點(diǎn)？疏水性吸附劑，金屬螯合層析劑，二硫鍵層析劑，凝膠，硅膠等反向介質(zhì)6、何謂親和色層分離法？親和力的本質(zhì)是什么？親和色層中常用的親和關(guān)系有那幾種？答：（1）利用生物分子間的這種特異性結(jié)合作用的原理進(jìn)行生物物質(zhì)分離純化的技術(shù)稱為親和純化技術(shù)（Affinitypurification）。親和層析是利用偶聯(lián)親和配基的親和吸附介質(zhì)為固定相親和吸附目標(biāo)產(chǎn)物，使目標(biāo)產(chǎn)物得到分離純化的液相層析法。（2）親和力的本質(zhì)：1.靜電作用：親和作用分子對(duì)的結(jié)合部位上帶有相反電荷時(shí)，產(chǎn)生靜電引力。在中性pH下，蛋白質(zhì)分子上酸性氨基酸殘基可帶負(fù)電荷，堿性氨基酸殘基

18、可帶正電荷。此外N末端氨基酸的-氨基帶正電，C末端氨基酸的羧基帶負(fù)電。2.氫鍵：如果親和作用分子對(duì)的一方分子中含有氧原子或氮原子，結(jié)合部位之間可以產(chǎn)生氫鍵作用，即形成OHO或OHNo氫鍵的產(chǎn)生與否受結(jié)合部位之間位置關(guān)系的嚴(yán)格制約。3.疏水性相互作用：如果親和作用分子對(duì)的一方分子上含有芳香環(huán)或烴基鏈等疏水基，另一方的結(jié)合部位上也含有疏水區(qū)，則兩者之間可發(fā)生疏水性相互作用。4.配位鍵：如果親和作用分子對(duì)均與同一金屬原子配位，則兩者之間可通過(guò)金屬配位鍵間接結(jié)合。5.弱共價(jià)鍵：弱共價(jià)鍵是指結(jié)合力較弱的可逆共價(jià)鍵。當(dāng)親和作用分子對(duì)之間滿足形成弱共價(jià)鍵的條件時(shí)可能形成弱共價(jià)鍵。具有親和作用的分子對(duì)之間具有

19、“鑰匙”和“鎖孔”的空間結(jié)構(gòu)關(guān)系。（3）親和色層中常用的親和體系：特異性親和作用體系高特異性抗原單克隆抗體荷爾蒙受體蛋白核酸互補(bǔ)堿基鏈段、核酸結(jié)合蛋白酶底物、產(chǎn)物、抑制劑群特異性免疫球蛋白A蛋白、G蛋白酶輔酶凝集素糖、糖蛋白、細(xì)胞、細(xì)胞表面受體酶、蛋白質(zhì)肝素酶、蛋白質(zhì)活性色素（染料）酶、蛋白質(zhì)過(guò)度金屬離子酶、蛋白質(zhì)氨基酸（組氨酸等）7、柱層析法與固定床吸附法有何異同點(diǎn)？相同點(diǎn)：操作過(guò)程中都存在兩相，即固定相和流動(dòng)相。都能對(duì)溶質(zhì)分子起到分離作用。不同點(diǎn)：操作完成后，層析法的目標(biāo)產(chǎn)物仍然存在于流動(dòng)相中，只是由于洗出時(shí)間的不同而在不同時(shí)間得到不同產(chǎn)物，溶質(zhì)的分離程度由分辨率判斷；固定床吸附法的吸附物

20、存在于固相中（即由液相或氣相轉(zhuǎn)移到固相），產(chǎn)物的分離純度取決于吸附劑的分離性質(zhì)。操作方法上，柱層析是間歇操作，而固定床吸附是連續(xù)操作。在完成操作后，層析柱可以開(kāi)始下一次分離，而固定床吸附法在達(dá)到穿透點(diǎn)之后需要停止吸附操作，轉(zhuǎn)入吸附質(zhì)洗脫和吸附劑再生操作。8、色譜柱理論板數(shù)和塔板高度的計(jì)算？答：根據(jù)呈正態(tài)分布的色譜流出曲線可以導(dǎo)出計(jì)算塔板數(shù)n的公式，用以評(píng)7J-5.54(價(jià)一根柱子的柱效。由于色譜柱并無(wú)真正的塔板，故塔板數(shù)又稱理論塔板數(shù):可見(jiàn)理論塔板數(shù)由組分保留值和峰寬決定。若柱長(zhǎng)為L(zhǎng),則每塊理論塔板高度H為n由上述兩式知道，理論塔板數(shù)n越多、理論塔板高度H®小、色譜峰越窄，則柱效越高

21、但上述兩式包含死時(shí)間t0,它與組分在柱內(nèi)的分配無(wú)關(guān)，因此不能真正反映色譜柱的柱效。通常以有效塔板數(shù)neff和有效塔板高度Heff表示9、常用的親和吸附介質(zhì)有哪些?答：（1）酶的抑制劑酶的抑制劑有天然的生物大分子，也有小分子化合物。例如胰蛋白酶的天然蛋白質(zhì)類抑制劑有胰臟蛋白酶抑制劑(pancreatictrypsininhibitor;PTI)等，小分子抑制劑有芐脒(benzamidine)、精氨酸和賴氨酸等，均可作為親和純化胰蛋白酶的配基。(2)抗體利用抗體為配基的親和色譜又稱免疫親和色譜(immuno-affinitychromatography)。抗體與抗原之間的Keq一般為1071012

22、L/mol。因此，利用免疫親和色譜法是高度純化蛋白質(zhì)類生物大分子的有效手段。( 3) A蛋白proteinA為分子量約42kD的蛋白質(zhì)，與IgG具有很強(qiáng)的親和作用，結(jié)合部位為IgG分子的Fc片段。A蛋白分子上含有5個(gè)Fc片段可結(jié)合部位。不同IgG的Fc片段的結(jié)構(gòu)非常相似，因此A蛋白可作為各種抗體的親和配基，但不同抗體的結(jié)合常數(shù)有所不同。A蛋白與抗體結(jié)合并不影響抗體與抗原的結(jié)合能力，因此A蛋白也可用于分離抗原-抗體的免疫復(fù)合體。( 4) 凝集素凝集素(lectin)是與糖特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)(酶和抗體除外)的總稱。伴刀豆球蛋白A(concanavalinA，conA)可用做糖蛋白、多糖、糖脂等含糖

23、生物大分子的分析、純化。pHK5.6時(shí)conA為二聚體，分子量為52kD;pH>5.6時(shí)為四聚體，分子量為102kD,兩個(gè)亞基(subunit)之間通過(guò)二硫鍵結(jié)合。因此，在利用conA為配基的親和色譜操作中，操作條件應(yīng)當(dāng)適宜。(5)輔酶和磷酸腺苷脫氫酶和激酶與輔酶之間具有親和結(jié)合作用。輔酶主要有NA(Dnicotinamideadeninedinucleotide)、NADP(NADphosphate)和ATP(adenosinetriphosphate)等。這些輔酶可用做脫氫酶和激酶的親和配基。AMP(adenosine5'-monophosphate)、ADP(adenosi

24、ne2'，5'-diphosphate)的腺苷部分與上述輔酶的結(jié)構(gòu)類似，可用做這些酶的親和配基。(6)三嗪類色素利用色素為配基的親和色譜法又稱色素親和色譜(Dye-ligandaffinitychromatography)。Triazinedyes是一類分子內(nèi)含有三嗪環(huán)的合成染料，與NAD的結(jié)合部位相同，又稱為生體模擬色素（biomimeticdye）。除脫氫酶和激酶外，三嗪類色素還與血清白蛋白、干擾素、核酸酶和糖解酶等具有很高的親和力。（7）過(guò)渡金屬離子Cu2+,Ni2+,Zn2+和Co2將過(guò)渡金屬離子可通過(guò)與亞胺二乙酸（IDA）或三竣甲基乙二胺（TED形成螯合金屬鹽固定在固

25、定相粒子表面，用做親和吸附蛋白質(zhì)的配基。這種利用金屬離子為配基的親和色譜一般稱為金屬螯合色譜（metalchelatechromatography）或固定化金屬離子親和色譜（immobilizedmetalaffinitychromato-graphy,IMAC）。（8）組氨酸組氨酸可與蛋白質(zhì)發(fā)生親和結(jié)合作用：靜電和疏水性相互作用均有可能參與親和結(jié)合。在鹽濃度較低和pH約等于目標(biāo)蛋白質(zhì)pI的溶液中，固定化組氨酸的親和吸附作用最強(qiáng)，隨著鹽濃度增大，親和吸附作用降低。（9）肝素肝素（heparin）是存在于哺乳動(dòng)物的肝、肺、腸等臟器中的酸性多糖類物質(zhì)，分子量一般為5至30kD,具有抗凝血作用。肝素

26、與脂蛋白、脂肪酶、甾體受體、限制性核酸內(nèi)切酶、抗凝血酶、凝血蛋白質(zhì)等具有親和作用，可用作這些物質(zhì)的親和配基。肝素的親和結(jié)合作用在中性pH和低濃度鹽溶液中較強(qiáng)，隨著鹽濃度的增大結(jié)合作用降低10、親和層析中目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫有哪幾種方法？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？答：特異性洗脫利用含有與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物具有親和結(jié)合作用的小分子化合物溶液為洗脫劑，通過(guò)與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，脫附目標(biāo)產(chǎn)物，洗脫條件溫和，有利于保護(hù)目標(biāo)產(chǎn)物的生物活性，另外，由于僅特異性洗脫目標(biāo)產(chǎn)物，對(duì)特異性較低的體系或非特異性吸附較嚴(yán)重的物系，特異性洗脫法有利于提高目標(biāo)產(chǎn)物的純度。非特異性洗脫是通過(guò)調(diào)節(jié)pHa、離子強(qiáng)度、離子種類和溫度等理

27、化性質(zhì)降低目標(biāo)產(chǎn)物的親和吸附作用，是較多采用的洗脫方法。優(yōu)點(diǎn)為成本低，速度快，吸附介質(zhì)再生容易。缺點(diǎn)是洗脫體積大，目標(biāo)產(chǎn)物在洗脫中濃度較低。如果要提高濃度或是配基與目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)合較強(qiáng)時(shí)，要選擇適當(dāng)?shù)膒Hfi及離子強(qiáng)度或加入變性劑，如果選擇不當(dāng)，可能造成目標(biāo)產(chǎn)物失活。電泳1、電泳的概念答：帶電質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中向帶有異相電荷的電極遷移的現(xiàn)象稱為電泳。2、電泳的基本原理Vv=u=uEL答：電泳分離利用荷電溶質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度的差別進(jìn)行分離3、電泳技術(shù)的分類答：有區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)電泳和等速電泳。這些電泳法又根據(jù)是否使用凝膠載體分為凝膠電泳和自由流電泳。尤載體噂泳自由電泳毛細(xì)管電泳區(qū)帶電泳體電泳I!-|柑末電泳繳電泳腱腔電泳電泳色譜案焦電泳II淀粉電泳瓊腑需電泳黑內(nèi)雌酷低電泳等電聚泰電泳密度拂度電冰 親知電泳4、基本的電泳系統(tǒng)組成電源、電極、成形盤(pán)、膠梳、膠槽、外蓋5、常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳的分離原理答：常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠具有三維