1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上分子診斷學(xué)試卷A 二、填空（每空0.5分，共15分。請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1.從高溫嗜熱細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNA polymerase后，使得PCR技術(shù)得以廣泛應(yīng)用，在高溫下有活性的DNA polymerase有_、_、_、_。其中具有3-5外切活性的高溫DNA polymerase有_和_。2.黏粒(cosmid)是質(zhì)粒噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來(lái)自 、cos位點(diǎn)序列來(lái)自 ，最大的克隆片段達(dá)到45kb。3.感受態(tài)細(xì)胞(Competent cells)是一種處于_狀態(tài)的細(xì)胞。一般通過(guò)_來(lái)誘導(dǎo)大腸桿菌感受態(tài)的形成。4.PCR反應(yīng)過(guò)程分為三個(gè)步驟，即 ， 和 。5. 細(xì)菌的

2、移動(dòng)基因存在著三種類型的轉(zhuǎn)位因子包括 、 、 。6.Klenow酶在 情況下，呈現(xiàn)DNA聚合酶活性，在 情況下呈現(xiàn)外切酶活性。7. 外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá)，常用的啟動(dòng)子有 、 、 、 和 。8. 在LacZ標(biāo)記基因插入外源基因，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，在X-gal培養(yǎng)基中顯 色，為 性克隆，未插入基因的克隆顯 色，為 性克隆。9. 基因序列經(jīng)堿基替代，缺失或插入后，可使遺傳信息產(chǎn)生三種不同的后果，分別為 、 、 。10.由一個(gè)細(xì)胞或者組織的基因組所表達(dá)的全部相應(yīng)的蛋白質(zhì)，稱為 。三、判斷題（錯(cuò)的打“×”，對(duì)的打“”，每題1分，共10分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. Maxam-Gi

3、lbert化學(xué)降解法測(cè)序時(shí)，從測(cè)序膠上直接讀出的序列是用于測(cè)序的模板的互補(bǔ)序列。2. 蛋白酶K可有效地降解內(nèi)源蛋白，能快速水解細(xì)胞裂解物中的DNA酶和RNA酶，以利于完整DNA和RNA的分離。3. 電泳時(shí)EB加在瓊脂糖凝膠中一般會(huì)降低DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率。4. 提取DNA時(shí)，若用酚除蛋白質(zhì)，需要用Tris-HCl對(duì)酚進(jìn)行平衡,pH達(dá)7.8。5. 基因組研究可以歸納成為構(gòu)建4張相互關(guān)聯(lián)的基因組圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖和功能圖。6. DNA連接酶是一種能催化二條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶，因此該酶既可修復(fù)基因序列中的缺口，也可修復(fù)裂口。 7. 質(zhì)粒提取后，在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶

4、時(shí)說(shuō)明質(zhì)粒提取純度高，當(dāng)為三條帶時(shí)為純度不高。8. COS位點(diǎn)，COS質(zhì)粒，COS細(xì)胞它們均含有用于自身環(huán)化的12個(gè)堿基的互補(bǔ)粘性末端。9. 入噬菌體的插入型載體只有一個(gè)單一限制酶切點(diǎn)，替換型載體有2個(gè)成對(duì)的限制性酶切點(diǎn)。10. 原核細(xì)胞和真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的mRNA均具有與rRNA結(jié)合的SD序列，以利于進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄。四、選擇題（每題1分，共15分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. 用于核酸分子雜交的探針不能是放射性標(biāo)記的( )。ADNA BRNA C抗體 D寡核苷酸2. cDNA文庫(kù)包括該種生物的( )。A某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 B所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C所有結(jié)構(gòu)基因 D內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)3.

5、關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA，下面哪一種說(shuō)法不正確?( )A溶液I的作用是懸浮菌體 B溶液的作用是使DNA變性C溶液的作用是使DNA復(fù)性D質(zhì)粒DNA分子小，所以沒(méi)有變性，染色體變性后不能復(fù)性4. 有關(guān) DNA 序列自動(dòng)化測(cè)定的不正確敘述是（ ）。 A不再需要引物 B激光掃描分析代替人工讀序 C基本原理與手工測(cè)序相同 D 用熒光代替了同位素標(biāo)記5. 在重組 DNA 技術(shù)中，不常用到的酶是（ ）。A限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA 聚合酶 CDNA 連接酶 DDNA 解鏈酶 6. 關(guān)于 cDNA 的最正確的說(shuō)法是（ ）。 A以 mRNA 為模板合成的雙鏈 DNA B同 mRNA 互補(bǔ)的單鏈 DNA C同 m

6、RNA 互補(bǔ)的雙鏈 DNA D以上都正確 7. 在分離DNA 過(guò)程造成DNA 分子斷裂的因素很多，下列說(shuō)法中哪一項(xiàng)是不正確的（ ）。 A核酸酶的降解 B化學(xué)降解 C保存液中未加一滴氯仿 D物理剪切8. 下列哪一項(xiàng)不是 Southern blotting 的步驟（ ）。 A用限制酶消化 DNA B DNA 與載體的連接 C凝膠電泳分離 DNA 片段 DDNA 片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上 9. 下列哪種克隆載體對(duì)外源 DNA 的裝載量最大（ ）。 A粘粒 B酵母人工染色體 C質(zhì)粒 D噬菌體 10. 人工染色體載體必須具有的元件是（ ）。 A染色體端粒 B著絲粒 C自主復(fù)制序列 D以上三項(xiàng)全部 11.

7、噬菌體外包裝目的基因片段的大小應(yīng)為（ ）。 A.小于噬菌體DNA的50% B. 小于噬菌體DNA的75%C.大于噬菌體DNA的105% D.為噬菌體DNA的75%105%12.識(shí)別基因序列不同，但酶切后產(chǎn)生的粘性末端相同的一類酶為（ ）。 A.同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶 D.同位酶13.下列生物體的細(xì)胞基因組哪些會(huì)有斷裂基因？（ ） A.大腸桿菌 B.乙肝病毒 C.人 D.噬菌體14. 真核細(xì)胞基因表達(dá)的特點(diǎn)為（ ）。 A.單順?lè)醋?B.多順?lè)醋?C.轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯連續(xù)進(jìn)行 D .轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯在同一時(shí)空進(jìn)行15. pBR322質(zhì)粒作為基因克隆載體不具有下列何種調(diào)控元件（ ）。 A.Ampr和Te

8、tr B.ori復(fù)制子 C.LacZ標(biāo)記 D.多克隆位點(diǎn)五、問(wèn)答題（共36分，請(qǐng)將答案填寫在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. 真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？為什么？（5分）2. 質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？（6分）3. 真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？（8分）4. 基因工程疫苗研究開(kāi)發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？（8分）5. 有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡(jiǎn)述其原理。（9分）答案-試卷A 一、名詞解釋（每題3分，共24分。請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 分子診斷：是指通過(guò)檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)異?；蚱浔磉_(dá)異常，對(duì)人體的健康狀況和疾病

9、做出診斷的方法。2. 實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)：7.實(shí)時(shí)PCR：通過(guò)特定設(shè)計(jì)的 PCR 儀器來(lái)實(shí)時(shí)檢測(cè) PCR 擴(kuò)增過(guò)程每一輪循環(huán)產(chǎn)物的累積數(shù)量，推算模板的起始濃度，這種工作方式就稱為實(shí)時(shí) PCR3. 重疊基因：不同基因的核苷酸序列有時(shí)為相鄰兩個(gè)基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個(gè)基因稱為重疊基因4. 鋅指結(jié)構(gòu)：由兩個(gè)半胱氨酸（Cys）殘基和兩個(gè)組氨酸（His）殘基通過(guò)位于中心的鋅離子結(jié)合成一個(gè)穩(wěn)定的指狀結(jié)構(gòu), 并以鋅輔基敖合形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)作為活性單位, 在指狀突出區(qū)表面暴露的堿基及其極性氨基酸與DNA結(jié)合有關(guān)5. 基因置換：是指將致病基因整個(gè)地被有功能的正?；蛩脫Q，使致病

10、基因永久地得到更正。6. 基因敲除：基因敲除是向正常生物個(gè)體內(nèi)引入某個(gè)突變的基因位點(diǎn)而選擇性地使某特定基因功能失活的技術(shù)。7. 基因芯片：將大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纖維膜等載體上，稱之為基因芯片（又稱 DNA 芯片、生物芯片）。8. 蛋白質(zhì)組學(xué)：指應(yīng)用各種技術(shù)手段來(lái)研究蛋白質(zhì)組的一門新興學(xué)科，即研究細(xì)胞在不同生理或病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)的異同，對(duì)相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行分類和鑒定。更重要的是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究要分析蛋白質(zhì)間相互作用和蛋白質(zhì)的功能.二、填空（每空0.5分，共15分。請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. Taq DNA聚合酶 Tth DNA聚合酶 Vent DNA聚合酶 Pwo DN

11、A聚合酶 Pfu DNA聚合酶 Pwo DNA聚合酶 Pfu DNA聚合酶2. 質(zhì)粒 噬菌體3. 容易接受外源DNA片段 CaCl2法4. 變性 退火 延伸5. 插入序列 轉(zhuǎn)位子 噬菌體Mu和D108 6. 有 dNTP 沒(méi)有dNTP 7. 乳糖啟動(dòng)子Trp啟動(dòng)子 Tac啟動(dòng)子 噬菌體的PL和PR啟動(dòng)子 脂蛋白啟動(dòng)子 8. 白 陽(yáng)性 藍(lán) 陰 9. 同義突變 錯(cuò)義突變 無(wú)義突變 10. 蛋白質(zhì)組三、判斷題（錯(cuò)的打“×”，對(duì)的打“”，每題1分，共10分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）題號(hào)12345678910答案×××××四、選擇題（每

12、題1分，共15分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）題號(hào)123456789101112131415答案CADADACBBDDBCAC五、問(wèn)答題（共36分，請(qǐng)將答案填寫在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. 真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？為什么？（5分）答：不能，因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。原核生物必須有相應(yīng)的原核RNA聚合酶可識(shí)別原核細(xì)胞的啟動(dòng)子, 以催化RNA的合成?；虮磉_(dá)是以操縱子為單位，操縱子由數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達(dá)載體時(shí)必須有1個(gè)強(qiáng)的原核啟動(dòng)子及其兩側(cè)的調(diào)控序列。2. 質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如

13、何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？（6分）答：目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如EcoRI）消化酶切后, 兩者的兩端均具有相同的粘性末端, 稱為單酶切點(diǎn)的粘性末端, 又稱全同源性粘性末端 高背景載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后, 載體分子易于自我環(huán)化, 既不利于目的基因的重組連接, 大大降低陽(yáng)性克隆效率, 又可使非重組性載體造成高背景。為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5-P以抑制DNA的自我環(huán)化。在連接反應(yīng)中, 具有5-P，的目的基因DNA片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒DNA載體通過(guò)粘性末端發(fā)生互補(bǔ)連接, 盡管產(chǎn)生的重組DNA分子于連接點(diǎn)含有兩個(gè)缺口

14、的開(kāi)環(huán)分子,盡管在轉(zhuǎn)化時(shí)其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉和環(huán), 但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復(fù)。如第二章圖2-6 雙向插入經(jīng)單一限制核酸內(nèi)切酶（如EcoRI）切割的目的基因和載體, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在連接反應(yīng)中, 目的基因可發(fā)生雙向插入, 載體對(duì)目的基因表達(dá)是有方向的, 而目的基因可雙向與之相連, 這種連接若以克隆目的基因片段為目的沒(méi)有影響, 若以表達(dá)為目的, 我們就要對(duì)插入的片段進(jìn)行方向鑒定, 因目的基因由起始密碼子向終止密碼子方向表達(dá)是定向轉(zhuǎn)錄的, 一旦啟動(dòng)子與目的基因編碼順序方向相反就不能正確轉(zhuǎn)錄目的基因的mRNA。若構(gòu)建表達(dá)DNA重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，

15、可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組, 以便定向克隆。3. 真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？（8分）答：順式作用元件為一些能與DBP結(jié)合的特定序列的DNA片段, 決定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng),按功能可分為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子、衰減子和終止子等DNA序列片段。 啟動(dòng)子真核基因啟動(dòng)子是基因表達(dá)時(shí)與基因轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)的5'端DNA序列,包括在-30bp區(qū)富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70-80bp區(qū)域（在TATA box上游）啟動(dòng)元件。前者是引導(dǎo)RNA聚合酶在正確起始位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄mRNA所必需的DNA序列, 即保證轉(zhuǎn)錄的精確起始。后

16、者UPE是調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始頻率和提高轉(zhuǎn)錄效率的調(diào)控序列，后者的序列常為GGTCAAT和GGGCCC序列, 稱為GC box, 它們經(jīng)協(xié)同作用,以調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄效率。啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄效率因細(xì)胞而異，因此需要根據(jù)宿主細(xì)胞的類型選擇不同的啟動(dòng)子，以便真核基因的高效表達(dá)。常用的啟動(dòng)子有Rous肉瘤病毒啟動(dòng)子RSV和巨細(xì)胞病毒的啟動(dòng)子CMV。還有SV40早期啟動(dòng)子, 腺病毒的晚期啟動(dòng)子。 增強(qiáng)子增強(qiáng)子是使啟動(dòng)子的基因轉(zhuǎn)錄效率顯著提高（增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性）的一類順式作用元件，其本身不具有啟動(dòng)子活性，是由多個(gè)獨(dú)立的，具有特征性的核苷酸序列所組成。其基本的核心組件常由812bp組成, 以單拷貝或多拷貝串聯(lián)的形式存在。增強(qiáng)子

17、一般有以下特性：增強(qiáng)子能提高同一條DNA鏈上基因轉(zhuǎn)錄的速率;增強(qiáng)子對(duì)同源或異源基因都有效; 增強(qiáng)子的位置可在基因5'上游、3'下游或內(nèi)部; 無(wú)方向性,增強(qiáng)子從5'3'或是從3'5'均可對(duì)啟動(dòng)子發(fā)揮作用; 增強(qiáng)子可遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn); 增強(qiáng)子一般無(wú)基因特異性, 對(duì)各種基因啟動(dòng)子均有作用, 但具有組織或細(xì)胞特異性。典型的增強(qiáng)子首先發(fā)現(xiàn)于SV40的病毒中, 為SV40的早期基因增強(qiáng)子, 約200bp, 含2個(gè)72bp的重復(fù)序列, 位于早期啟動(dòng)子上游, 增強(qiáng)子可促使病毒基因轉(zhuǎn)錄效率提高100倍，因此具有這一增強(qiáng)子的載體已得到了廣泛的應(yīng)用。近些年來(lái)，來(lái)自于Ro

18、us肉瘤病毒基因長(zhǎng)末端重復(fù)序列和人類巨細(xì)胞病毒（CMV）增強(qiáng)子也已被廣泛用于真核細(xì)胞的基因表達(dá)。增強(qiáng)子能增強(qiáng)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄能力，有效的增強(qiáng)子能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄達(dá)10倍或100倍以上, 在某些情況下, 表達(dá)產(chǎn)物可能具有細(xì)胞毒效應(yīng)。因此，最好使用一種可被外界刺激信號(hào)誘導(dǎo)表達(dá)外源基因的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子, 誘導(dǎo)型啟動(dòng)子有熱休克啟動(dòng)子、金屬硫蛋白啟動(dòng)子、糖皮質(zhì)激和固醇類激素誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，熱休克啟動(dòng)子的誘導(dǎo)可通過(guò)提高細(xì)胞的培養(yǎng)溫度使啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄水平提高，重金屬離子可有效地促進(jìn)金屬硫蛋白啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。 RNA剪接信號(hào)多數(shù)高等的真核基因都含有內(nèi)含子序列, 在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的前體mRNA要經(jīng)過(guò)剪接過(guò)程去掉內(nèi)含子順序后才成

19、為成熟的mRNA分子。雖然許多基因的cDNA轉(zhuǎn)入哺乳類動(dòng)物細(xì)胞后, 其表達(dá)不受有或無(wú)內(nèi)含子的影響, 但有些基因在真核細(xì)胞中表達(dá)需要有內(nèi)含子的存在。一般來(lái)說(shuō)，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)載體中最好有一段內(nèi)含子序列的剪接信號(hào)，以提供外源基因cDNA表達(dá)的需要。常用的內(nèi)含子剪接序列有SV40的小t抗原的內(nèi)含子序列等。 負(fù)調(diào)控元件沉默子和衰減子是抑制基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列, 稱為負(fù)調(diào)控元件, 它們與反式作用因子相互結(jié)合而起作用。這些負(fù)調(diào)控元件不受距離和方向的限制，并可對(duì)異源基因表達(dá)起作用。 終止子和polyA信號(hào)真核基因轉(zhuǎn)錄的確切終止信號(hào)和終止機(jī)制, 目前尚不清楚, 終止過(guò)程不是在RNA聚合酶指導(dǎo)下完成的, 在

20、不明機(jī)制下發(fā)生轉(zhuǎn)錄終止?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)模板DNA分子的3'端有轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列, 稱終止子。通常由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的具有polyA尾的基因終止信號(hào)是在多聚腺苷酸化位點(diǎn)下游的一段長(zhǎng)度為數(shù)百個(gè)堿基的DNA區(qū)域內(nèi)的G/T簇, 例如在SV40中的AGGTTTTTT的DNA序列為終止轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。一般轉(zhuǎn)錄終止子為發(fā)夾結(jié)構(gòu)的反向重復(fù)序列?，F(xiàn)在基因工程表達(dá)載體上所使用的轉(zhuǎn)錄終止子都是病毒基因或細(xì)胞基因的3'端的一段序列, 其中也包括3'端不翻譯區(qū)。如SV40小t抗原和-球蛋白的轉(zhuǎn)錄終止片段常用于構(gòu)建真核基因表達(dá)載體。一般認(rèn)為polyA的存在增加了mRNA分子的穩(wěn)定性,使之能成功地進(jìn)行翻譯。準(zhǔn)確而

21、有效地進(jìn)行多聚腺苷酸化需要兩種序列：位于polyA位點(diǎn)下游的GU豐富區(qū)或U豐富區(qū); 位于polyA位點(diǎn)上游的1130個(gè)核苷酸處的一個(gè)由6個(gè)核苷酸組成的高度保守序列（5'-AAUAAA）, 這些序列與轉(zhuǎn)錄后的RNA切割和加尾有關(guān)。最常用的polyA信號(hào)是用SV40的一段237kb的BamHI-BcLI酶切片段, 它包含早期和晚期轉(zhuǎn)錄單位的切割和加polyA信號(hào), 兩套信號(hào)分別位于不同的DNA鏈上, 作用方向相反, 它們對(duì)mRNA的加工都同樣有效。在雙啟動(dòng)子的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄方向?yàn)橥驎r(shí)，上游啟動(dòng)的轉(zhuǎn)錄由于會(huì)穿過(guò)下游啟動(dòng)子，這樣就使得下游的轉(zhuǎn)錄受到極大的影響，造成下游轉(zhuǎn)錄水平的下降

22、，但是如果在兩個(gè)啟動(dòng)子間插入一個(gè)轉(zhuǎn)錄終止子后，上游啟動(dòng)子對(duì)下游啟動(dòng)子的影響就被消除了，這樣下游啟動(dòng)子的表達(dá)量會(huì)有明顯提高。當(dāng)兩個(gè)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄方向相反時(shí)，基因表達(dá)可能會(huì)被轉(zhuǎn)錄形成的反義RNA所抑制, 這時(shí)插入轉(zhuǎn)錄終止子將會(huì)消除這種抑制作用。4. 基因工程疫苗研究開(kāi)發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？（8分）答：(1)不能或難于培養(yǎng)的的病原體如乙型肝炎病毒(HBV)，丙型肝炎病毒(HCV)，戊型肝炎病毒(HEV)，EB病毒(Epstein-Barr病毒，EBV)，巨細(xì)胞病毒(CMV)，人乳頭瘤病毒(HPV)，麻風(fēng)桿菌，疾原蟲、血吸蟲等。(2)有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體，前者如1型嗜人T淋巴細(xì)胞病毒(HTLV

23、-I)，人免疫缺損病毒(HIV),單純皰疹病毒(HSV)，還有EBV、CMV、HPV等。后者如呼吸道合胞病毒(RSV),登革熱病毒(DGV)，腎綜合征出血熱病毒(HFRSV)；(3)常規(guī)疫苗免疫效果差，如霍亂和痢疾菌苗；或者反應(yīng)大，如百日咳和傷寒菌苗。(4)能大大節(jié)約成本，簡(jiǎn)化免疫程序的多價(jià)疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙門氏菌為載體的多價(jià)活疫菌；5. 有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡(jiǎn)述其原理。（9分）答：（1）將特異的反義基因重組到表達(dá)載體上（病態(tài)載體或質(zhì)粒），導(dǎo)入靶細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出反義RNA，形成雙鏈RNA（RNA/RNA雙鏈體），阻礙基因的翻譯。（2）人工合成寡聚脫氧核糖核酸（ODN

24、）經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾導(dǎo)入細(xì)胞，與mRNA和DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或DNA核苷酸三聚體，影響基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄。（3）特異性的核酶，根據(jù)癌基因設(shè)計(jì)出特異的“錘頭”或“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)，它能夠催化切割，降解異常表達(dá)基因的mRNA而影響基因的翻譯。 分子診斷學(xué)試卷B二、選擇題（每題1分，共15分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是( )。A.修復(fù)自身的遺傳缺陷 B.促進(jìn)自身的基因重組C.強(qiáng)化自身的核酸代謝 D.提高自身的防御能力2. 生物工程的下游技術(shù)是( )。A.基因工程及分離工程 B. 蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程C.基因工程及蛋白質(zhì)工程 D.分離工程 及蛋白質(zhì)工

25、程3. 基因工程操作常用的酶是:(I 內(nèi)切酶II 連接酶III 末端轉(zhuǎn)移酶IV聚合酶( )。 A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV + III4. 限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指( )。A. 在非常規(guī)條件下，識(shí)別和切割序列也不發(fā)生變化的活性。 B. 活性大大提高C. 切割速度大大加快D.識(shí)別序列與原來(lái)的完全不同5. 下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是( )。A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC6. 關(guān)于cDNA的

26、不正確的提法是( )。A.同mRNA互補(bǔ)的單鏈RNAB.同mRNA互補(bǔ)的含有內(nèi)含子的DNAC.以mRNA為模板合成的雙鏈RNAD.以上都不正確7. 下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是( )。A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 B. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應(yīng)過(guò)量 2-5 倍8. T 4 -DNA 連接酶是通過(guò)形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是( )。A. 2' -OH 和 5' P B. 2' -OH 和 3' -PC. 3' -OH 和 5&

27、#39; P D. 5' -OH 和 3' -P9. 載體的功能是( )。A. 外源基因進(jìn)入受體的搭載工具 B. 不能為外源基因提供整合能力C. 不能提供復(fù)制能力 D. 不能為外源基因提供表達(dá)能力10. 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且( )。A.產(chǎn)生新切點(diǎn) B.易于回收外源片段C.載體不易環(huán)化 D.影響外源基因的表達(dá)11. 下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大? ( )A.質(zhì)粒 B.黏粒 C.酵母人工染色體(YAC) D.噬菌體12. 考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種( )。 A.容量最大一種載體 B.由 -DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C.是一種單鏈DNA

28、環(huán)狀載體 D.不能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，但可以表達(dá)13. 13 ( )某一重組 DNA 的載體部分有兩個(gè) BamHI 酶切位點(diǎn)。用 BamHI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子，其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的 BamHI 酶切位點(diǎn)共有( )。 A.4 個(gè) B. 3 個(gè) C. 1 個(gè) D. 2 個(gè)14. 下列哪一種酶作用時(shí)需要引物? ( ) A.限制酶 B.末端轉(zhuǎn)移酶 C.反轉(zhuǎn)錄酶 D. DNA連接酶15. 用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有( )說(shuō)明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。A.Southem印跡雜交 B.Northem印跡雜交C.Western印跡 D.原位菌落雜交三、簡(jiǎn)答題（每題

29、5分，共25分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 什么是包涵體？2. 什么是-互補(bǔ)篩選？3. 簡(jiǎn)述酶切反應(yīng)體系及反應(yīng)條件？4. 核酸操作的基本技術(shù)有哪些？5. 基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題（每題10分，共40分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？ 2. 試述載體構(gòu)建一般方法。 3. 試述5RACE技術(shù)原理和方法4. 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ 答案-試卷B 一、名詞解釋（每題2分，共20分）1. 轉(zhuǎn)化： 嚴(yán)格地說(shuō)是指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕獲和表達(dá)質(zhì)粒載體DNA分子的生命過(guò)程2. 質(zhì)粒不親和性：在沒(méi)有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在

30、同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3. cDNA文庫(kù)：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4. RACE：是一種通過(guò)PCR進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3，或5，端之間未知序列的方法。5. 基因文庫(kù)：通過(guò)克隆方法保存在適當(dāng)宿主中的某種生物，組織，器官或細(xì)胞類型的所有DNA片段而構(gòu)成的克隆集合體。6. RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對(duì)引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR。7. 載體：指基因工程中攜帶外源基因進(jìn)入受

31、體細(xì)胞的運(yùn)載工具，它的本質(zhì)是DNA復(fù)制子。8.S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由Shine 、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來(lái)命名為Shine-Dalgarno 序列，簡(jiǎn)稱S-D序列。9. 穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10.MCS：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。二、選擇題（每題1分，共15分）題號(hào)123456789101112131415答案DAADDCACDCCBDCC三、

32、簡(jiǎn)答題（共25分，每題5分）1. 什么是包涵體？答：重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過(guò)程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2. 什么是-互補(bǔ)篩選？答：質(zhì)粒載體具有-半乳糖苷酶基因（lacZ），當(dāng)外源DNA插入到它的lacZ，可造成表達(dá)后的-半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過(guò)大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有l(wèi)acZ基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lacZ基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫互補(bǔ)。3. 限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？答：酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4. 核酸操作的基本技術(shù)有哪些？答：核酸提取與純化核酸