1、常用免疫組化試劑（類別）介紹一、用于鑒別診斷（一）上皮源性：1、細胞角蛋白/cytokeratin、CK:目前，商品化得細胞角蛋白有20多種，不同得分子量代表不同類型得上皮標志。通常將CK分為兩大類型：I型（低分子量）；n型（高分子量）.理論上講，大多數單層上皮表達低分子量得CK;復層上皮多表達高分子量得CK;移形上皮（膀胱）與假復層上皮（呼吸道得被覆上皮）既表達低分子量得CK,也表達高分子量得CKo在癌組織中，低分子量得CK多在腺癌中表達，高分子量得CK多在鱗癌中表達.目前為止，未發現任何一種上皮只含有一種CK,莫些上皮可含21。種不同分子量得CKo因此，目前試圖應用單一得CK免疫表型來確定

2、莫種特定得上皮性腫瘤就是不可能得。同樣，應用CK來區別腺癌、類癌與間皮瘤也就是困難得。因此，CK得免疫組化結果判斷就是一個較為復雜得問題，在應用這類標記物作為腺癌與鱗癌得鑒別應特別注意。有必要時，應聯合用多種CK加以綜合判斷。CK得陽性表達還包括有間變癌、雙向分化得滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、間皮瘤、上皮樣肉瘤、胸腺瘤等.CK得陰性表達有:副節瘤單向分化得滑膜肉瘤、軟骨（肉）瘤、精原細胞瘤、淋巴瘤、腦膜瘤、惡黑、惡纖組、軟組織肉瘤（除特殊類型外）.在判斷CK免疫組化結果時應注意幾點：（1）CK得單克隆抗體優于多克隆抗體；（2）CK常由現斑點狀得假陽性反應，應注意識別；（3）雖然大多數CK多在胞漿

3、表達，但CK17多在胞核表達；（4）絕大多數CK抗體需用胰酶消化，可增加陽性表達率與染色強度；（5）部分非上皮性腫瘤（平滑肌肉瘤）可見有CK表達，在診斷時應注意；（6）淋巴結、扁桃體與脾組織中得濾泡外得網織細胞含有CK8與18以及desmin，在判斷淋巴結轉移癌與肌源性肉瘤轉移時應根據組織學綜合判斷.2、上皮膜抗原（epithelialmembraneantigen/EMA）:EMA就是上皮細胞分泌得一種乳脂小球膜糖蛋白，廣泛存在于人體各種上皮細胞中（也存在于間皮細胞、漿細胞、組織細胞與T細胞淋巴瘤中），其分布與角蛋白相似，但對內臟腺上皮優于細胞角蛋白，尤其就是分化差得癌EMA有時可呈強陽性表

4、達。EMA可作為上皮源性腫瘤得常用標記物。EMA陽性表達得腫瘤有鱗癌、胃腸道腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、間皮瘤、滑膜肉瘤、甲狀腺乳頭狀癌、上皮樣肉瘤等.在判斷EMA免疫組化結果時應注意幾點：（1）EMA雖然就是上皮細胞非常敏感得標記,但一些非上皮性腫瘤（如漿細胞、組織細胞與T細胞淋巴瘤）也可陽性表達。因此在癌與其她間葉性腫瘤鑒別時不能作為唯一得參考標記；（2）EMA對內臟上皮源性腫瘤得敏感性優于體表上皮源性腫瘤，因此在腺癌中得表達明顯高于鱗癌。3、橋粒蛋白：就是上皮細胞特有得結構，就是一種廣譜得上皮性標記.鱗癌、腺癌、移形細胞癌、未分化癌與間皮瘤、尤文氏肉瘤表達在判斷橋粒蛋白免疫組化結果時

5、應注意幾點：（1）橋粒蛋白也可在心肌、腦膜瘤、卵巢得顆粒細胞瘤與淋巴結得網織細胞中表達；（2）甲狀腺間變癌陽性表達率低；（3）冰凍切片效果優于石蠟切片。（二）間葉源性腫瘤得標記1、波形蛋白Vimentin：就是一種52-58得胞漿蛋白。主要分布于間葉細胞及其起源得腫瘤，就是間葉細胞及其腫瘤得特異性標記。橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤與非肌源性軟組織腫瘤如纖維肉瘤、脂肪肉瘤、血管肉瘤、惡纖組、精原細胞瘤、雪旺氏瘤與骨腫瘤Vimentin就是一個關鍵標記。此外，血管球瘤、顆粒細胞肌母細胞瘤、淋巴瘤、白血病與惡黑等均可有Vimentin表達。在判斷Vimentin免疫組化結果時應注意幾點：（1）部分腫瘤（如

6、間皮瘤、滑膜肉瘤、乳腺癌、肺腺癌等）除Vimentin（+）表達外，可同時又有cytokeratin得表達。應結合其組織學形態加以診斷；（2）福爾馬林固定得組織標本，vimentin假陰性并不少見，冰凍切片酒精固定得組織可提高其敏感性與可靠性；（3）vimentin不能單獨用于軟組織腫瘤得診斷，多提倡與其她特異性標記物聯合使用。2、結蛋白desmin:就是一種分子量為50-55ku得細胞漿蛋白，胚胎與成人橫紋肌或平滑肌及其腫瘤均可表達。子宮、皮膚、胃腸道及其她部位得平滑肌多呈（+）表達.現已發現desmin在良性腫瘤得陽性率與染色強度明顯高于惡性腫瘤；高分化得平滑肌肉瘤與染色強度明顯高于低分化

7、得平滑肌肉瘤。Suster報道5例皮膚就是上皮性平滑肌肉瘤均為（-）,而actin與vimentin均為（+）反應。因此目前認為，多應用配套抗體，即與其她肌源性抗體聯合應用，不能只根據desmin（-）來排除平滑肌肉瘤得診斷。在判斷desmin免疫組化結果時應注意幾點：（1）非常原始得肌源性腫瘤常不表達desmin;（2）莫些非肌源性腫瘤也有desmin表達，如纖維肉瘤、惡纖組、腺泡狀軟組織肉瘤與個別腺癌；（3）常規福爾馬林固定、石蠟包埋得低分化橫紋肌肉瘤可能表現假（）結果；（4）desmin不能用于區別橫紋肌肉瘤還就是平滑肌肉瘤；（5）血管平滑肌不表達desmin。3、肌動蛋白Actin:就

8、是一種具有收縮能力得微絲蛋白，幾乎分布于所有得肌型細胞，根據其結構形式得不同，至少有6種不同得類型，即橫紋肌型、心肌型、平滑肌型（兩種）與非肌源型（兩種）。目前商品化得Actin包括有肌肉型（HHF35），在心肌、平滑肌與橫紋肌細胞及其腫瘤中均有表達，尤其在低分化得橫紋肌肉瘤與平滑肌肉瘤中得表達，其敏感性與特異性均比desmin高；Actin肌源節型，主要用于橫紋肌及其腫瘤得診斷;Actin平滑肌型（SmoothMuscle）,主要用于平滑肌及其腫瘤（肉瘤）得診斷。在判斷actin免疫組化結果時應注意幾點：（1）三種在肌源性腫瘤得診斷意義上，尚不能作為一個獨立得診斷指標，因為三者之間存在交叉反

9、應；(2)一些非肌源性腫瘤也可有Actin(+)表達，如皮膚、口腔、喉、涎腺腫瘤以及星形細胞瘤等；(3)部分器官與組織得非肌上皮細胞也有Actin(+)表達，如肺、食管、胃、十二指腸、膀胱得上皮細胞與肝臟、腎、胎盤以及胰島細胞等；(4)HHF35也可標記肌上皮細胞，但其敏感性與特異性均不如平滑肌型actin；(5)福爾馬林固定得組織，部分病例可有一些非特異性染色。4、肌紅蛋白myoglobin:myoglobin被認為就是存在于正常橫紋肌與橫紋肌腫瘤中得一種分子量為17、8ku得胞漿蛋白，可作為橫紋肌肉瘤得特異性標記。在判斷myog1obin免疫組化結果時應注意幾點：(1)雖然myoglobi

10、n有較高得特異性，但要注意其假(+)反應，尤其就是壞死或退變以及殘留得正常橫紋肌均有myoglobin(+),應注意識別；(2)莫些腫瘤如惡黑、浸潤型乳腺癌、軟組織淋巴瘤等也有myoglobin(+)，這個可能就是瘤細胞破壞橫紋肌時吞噬了myoglobin所致；(3)烤片溫度過高，60C時可能會破壞其抗原，造成假(-)o(三)神經與內分泌細胞標記：1、膠質纖維酸性蛋白GFAP:就是一種分子量為47ku得酸性蛋白。研究發現：GFAP不僅在星形神經膠質細胞及其腫瘤中存在，還見于各種類型得星形細胞瘤、混合性膠質瘤、多形性成膠質瘤、室管膜下巨細胞性星形細胞瘤、異位星形細胞瘤、松果體瘤與髓母細胞瘤中向膠

11、質分化，以及含膠質成分得神經鞘瘤等腫瘤中.在判斷GFAP免疫組化結果時應注意幾點：（1）GFAP不僅在星形細胞與膠質細胞中表達，其她腦腫瘤如成血管細胞瘤等也可表達，尤其就是伴有星形細胞分化時，因此應注意識別；（2）GFAP作為中樞神經腫瘤得診斷與分類時，應密切結合HE得形態學改變，尤其就是兒童得腦腫瘤；（3）GFAP（+）細胞得染色強度與數量與腫瘤分化程度有關，高分化得（+）表達較好，低分化得表達較弱甚至（-）。2、神經纖維細絲蛋白NF:就是神經元特異性中間絲蛋白，主要存在于神經細胞內，故作為神經細胞分化得標志。腎上腺內外嗜銘細胞瘤等也可呈（+）反應。神經節膠質細胞瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤等（）

12、；另外，惡黑也可呈（+）。3、S-100蛋白：早期人們認為，S-100就是一種神經系統特異性蛋白存在于膠質細胞與雪旺氏細胞及其腫瘤中,后來得研究證明：S-100也存在于一些非神經源性得正常細胞與腫瘤中,如脂肪組織、脂肪瘤，偶見于脂肪肉瘤；軟骨細胞、軟骨瘤以及一部分軟骨肉瘤等。幾乎所有得黑色素瘤S-100（+）.S-100蛋白染色強度與瘤細胞得分化程度關系不大。在判斷S100免疫組化結果時應注意幾點：（1）S-100蛋白可在一些非神經源性細胞中表達，包括低分化癌，因此在神經系統腫瘤得診斷時應考慮到這點；（2）S-100蛋白陽性定位在一些細胞中可為胞漿，一些細胞為胞核，另一些細胞為胞漿/胞核共存；

13、（3）由于S-100蛋白敏感性高，特異性差，所以在診斷上應用受到限制。4、神經元特異性烯醇酶NSE:原先認為NSE只存在于神經元中，現已證明，除神經元外,NSE也廣泛存在于各種正常得神經內分泌細胞與許多相應得神經內分泌腫瘤中，包括不同部位得類癌、甲狀腺髓樣癌、嗜銘細胞瘤、副節瘤、胰島細胞瘤、垂體腺瘤、肺得小細胞癌與皮膚得Merkel癌.而雪旺氏瘤、神經纖維瘤與成神經細胞瘤（）。NSE（+）表達為胞漿彌漫性著色.現有得資料表明，NSE可在平滑肌、肌上皮細胞、腎小管細胞、淋巴細胞、支氣管上皮細胞與n型肺泡細胞中表達，因此NSE得特異性引起懷疑。在判斷NSE免疫組化結果時應注意幾點：（1）非神經元性

14、腫瘤也有NSE（+）表達，包括膠質瘤、腦膜瘤、雪旺氏瘤、脈絡叢乳頭狀瘤、神經瘤、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌與腎細胞癌等；（2）NSE在神經病理學中得診斷價值應根據各種特殊病變加以認識；（3）雖然NSE在神經源性腫瘤得表達比神經纖維絲蛋白NF更為常見,但不能作為中樞神經系統腫瘤得特異性標記物；（4）由于NSE特異性差，因此不能單獨使用，應與其她相應得標記物聯合使用；（5）原始得神經內胚層來源得腫瘤常呈（-）o5、突觸素Syn:就是一種突觸前酸性轉膜蛋白，分子量為38ku。SY可在許多神經源性與神經內分泌腫瘤中表達，如髓母細胞瘤、成神經細胞瘤、嗜銘細胞瘤、副節瘤、節細胞神經瘤、垂體腺瘤、甲狀旁腺瘤、肺與

15、胃腸道類癌、胰島細胞瘤、甲狀腺髓樣癌等大多數神經內分泌腫瘤。在髓母細胞瘤得舊C中，SY比NF更為敏感。同時，SY比嗜銘素A更敏感，比NSE更特異.對胰島細胞及其腫瘤得診斷比嗜銘素A更可靠。目前尚未發現SY在非神經源性腫瘤與非神經內分泌腫瘤表達得報道。在判斷Syn免疫組化結果時應注意幾點：（1）冰凍切片效果最好，福爾馬林固定、石蠟包埋得組織也可，但固定時間不宜過長，一般不超過24h;（2）如果突觸素含量低，用PAP法與ABC法可能檢測不由（+）結果，最好使用S-P法或與其相似得檢測系統。6、嗜銘素A/CgA:就是一組分子量為68-120ku得可溶性酸性蛋白。存在于各種正常神經內分泌細胞及其腫瘤中

16、，包括垂體腺瘤、胰島細胞瘤、嗜銘細胞瘤、甲狀腺髓樣癌、甲狀旁腺瘤與類癌等。目前認為，CgA與SY就是對神經內分泌腫瘤特異得標記物。在判斷CgA免疫組化結果時應注意幾點：（1）CgA（+）表達不能說明腫瘤得組織來源；（2）CgA得敏感性不如NSE,在部分神經內分泌腫瘤中，如胰島細胞瘤、生長抑素瘤、分泌催乳素與皮質醇得垂體腺瘤可以不表達；（3）CgA（-）不能排除激素細胞得存在與神經內分泌腫瘤得診斷；（4）肺小細胞癌、皮膚得Merke1細胞瘤與成神經細胞瘤，CgA得（+）程度不一，灶性表達或（），只能說明這些腫瘤細胞中含分泌顆粒少而已。（四）淋巴造血細胞得標記在全身各系統疾病得病理診斷中，淋巴組織

17、得病理診斷難度就是最大得。在目前應用得單克隆抗體中，淋巴細胞抗體得種類最多，下面介紹幾個常用得：1、白細胞共同抗原LCA;2、B細胞常用得標記：CD20（L26）:90%B細胞NHL、少數T細胞NHL均陽性，非造血細胞來源得腫瘤（胸腺瘤除外）陰性；3、T淋巴細胞常見標記:CD45RO:陽性細胞見于T細胞、有些B細胞、單核細胞、粒細胞。（五）腫瘤相關抗原：1、癌胚抗原CEA:最先被認為就是結腸癌得特異性抗原，隨著研究得深入，發現許多上皮性腫瘤尤其就是內胚層來源得腫瘤如胃腸道癌、肺癌、胰腺癌、膽管癌與乳腺癌等均可見CEA表達；同時一些正常得上皮細胞也有表達。在判斷CEA免疫組化結果時應注意幾點：（

18、1）CEA（+）不能作為確認腫瘤得組織來源得標記；（2）到目前為止，CEA不能用作良、惡性上皮性腫瘤得鑒別診斷；（3）不管就是單克隆還就是多克隆抗CEA抗體，在莫些腫瘤中可表現有非特異性染色，應注意識別。2、甲胎蛋白AFP:AFP就是由胚胎卵黃囊細胞、胚胎肝細胞與胎兒腸道細胞合成得一種糖蛋白。臨床上常以血中AFP水平增加作為原發性肝細胞癌診斷得重要得指標之一。AFP在肝癌得（十）表達只占60%+-,而一些非腫瘤性得肝細胞（如肝硬化與肝炎）以及轉移性腫瘤得癌旁肝細胞也有AFP表達。在生殖細胞腫瘤中，內胚竇癌與混合性生殖細胞腫瘤，以及胚胎癌中得卵黃囊成分可見AFP（+）表達.在判斷AFP免疫組化結

19、果時應注意幾點(1)AFP(-)不能排除肝細胞癌得診斷；（2）發生在能尾部、腹膜后、縱隔或松果體得一些生殖細胞腫瘤，在常規HE染色中常診斷未分化癌，因此有必要作AFP或HCG免疫組化染色，排除有無生殖細胞腫瘤得可能；（3）有報道一些非肝性腫瘤如肺癌、乳腺癌與胃腸道癌，尤其就是胃肝樣腺癌，AFP可呈（+）.3、前列腺特異性抗原PSA:PSA就是前列腺上皮細胞特有得一種分子量為33ku得糖蛋白，它存在于正常、增生與腫瘤性前列腺上皮細胞中。在判斷PSA免疫組化結果時應注意幾點：（1）PSA不能作為良、惡性前列腺病變得診斷標記；（2）少數前列腺癌PSA（-）,因此多與PAP（前歹U腺酸性磷酸酶）同時檢

20、測，以提高診斷準確率.二、激素類：（一）雌激素受體ER與孕激素受體PR:ER與PR與乳腺癌預后與內分泌治療得關系已得到公認，目前已成為乳腺癌得常規檢查項目。一般來說，ER與PR（+）得腫瘤緩解率高，復發率低，存活時間長。即使ER與PR中只有一個（十）得病人，其預后也好于兩個受體全（-）得病人。1、雌、孕激素受體（ER/PR）雌、孕激素受體因抗體克隆號得不同，人種不同，組織固定方法得不同，其陽性率也不同，文獻報道不一，范圍50%左右，而且乳腺癌組織類型不同，陽性率不一。但雌、孕激素受體含量得測定，對乳腺癌病人內分泌治療得意義就是肯定得，激素受體陽性得乳腺癌預后優于陰性者，陽性者對內分泌治療反應好

21、、無瘤生存期延長.如果女性乳腺癌細胞中雌、孕激素受體表達陽性，病人可以進行三苯氧胺得治療.雌孕激素促進癌細胞得生長，攜帶雌孕激素受體得癌細胞就是通過激素促進生長得，三苯氧胺得治療有封閉癌細胞中雌孕激素受體得功能，癌組織得增生可以通過三苯氧胺治療來阻止其生長。因此，免疫組化測定雌孕激素受體得表達情況，可以預測三苯氧胺治療得意義.2、腫瘤耐藥指標腫瘤細胞耐藥性腫瘤細胞從正常細胞繼承與發展了對藥物得耐受性。如果腫瘤一旦產生對化療藥物得耐受，將成為化療成功得主要障礙。p糖蛋白就是一種依賴于ATP得藥物外泵，它能將腫瘤細胞內得化療藥物泵由細胞外，從而導致細胞內藥物濃度降低，細胞便產生對這種藥物得耐受性。

22、Topo-IITopo-II酶能導致DNA斷裂,并催化DNA鏈通過缺口，增殖期Topo-I活性比靜止期細胞高100倍.瘤細胞Topo-II表達比正常細胞也顯著增高,T。poII抑制劑以Topo-II酶為作用靶，并與之形成復合物，從而抑制Topo-II酶活性，抑制腫瘤增殖。Topo-II酶活性下降或突變，則瘤細胞便對Top。-II抑制劑類化療藥物產生耐藥性。GST-piGST-pi與包括化療藥物如卡氮芥、絲裂蔥等抗癌藥物在內得許多藥物得代謝有關，降低細胞內GST水平，可增加細胞毒性藥物得細胞毒作用，相反細胞內GST水平增加，則化療藥物得細胞毒性作用則下降，即產生對這些化療藥物得耐藥性.（二）激素

23、調節蛋白PS2:三、其她類（一）細胞增殖活性得評價：一般認為腫瘤得增殖活性越高，侵襲性就越強.傳統得評價方法缺乏客觀性。目前應用較為普遍得有用免疫組化等方法檢測與細胞增殖有關得核抗原.Ki67、PCNA均就是與細胞增殖有關得核抗原，處于靜止期（G0期）得細胞無Ki67與PCNA.Ki-67與PCNA免疫組化染色均顯示核陽性，通常以標記指數（即陽性細胞數占總數得百分比）來區分細胞增殖活性得高低。一般約定，陽性細胞大于小于25%（+）,25%50%（+）,50%75%（+），大于75%（+）.（二）癌基因1、c-erbB2（Her-2/neu）cerB2就是與乳腺癌關系最密切得一種癌基因。在不同類型乳腺癌中得陽性率差別很大。陽性率較高得類型有浸潤性導管癌（22%）、而浸潤性小葉癌與小管癌陽性率很低，僅為7%.正常乳腺上皮、間質細胞與乳腺良性病變一般不表達c-erbB2.最近有人發現，c-erbB-2陽性得腫瘤對常規化療不敏感，但對Hercetin得治療有效。C-erbB-2與乳腺癌預后得關系尚有爭議，在淋巴結有轉移得病人