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1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 PCRPCR產(chǎn)物的回收產(chǎn)物的回收一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘發(fā)在生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)中，反應(yīng)獲得的目的片段，酶切后所得特定的序列， 分子雜交中所制備的探針等，經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后，目的片段與其它分開， 這就需要有一套方法將目的從凝膠中分離出來(lái)，通過(guò)處理后得到純化的目的， 以用于以后分子雜交，重組子構(gòu)建，序列分析等。從凝膠中分離回收的方法從凝膠中分離回收的方法現(xiàn)在常用的技術(shù)有：l電洗脫法l低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠法l玻璃奶法快速純化玻璃奶法快速純化l凝膠回收試劑盒低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠法低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠法l65oC瓊脂糖凝膠熔點(diǎn)l低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠 37oC 液體電洗脫法基本原理電洗脫法基本原理l將電泳分離后含目的

2、片段的瓊脂糖切割下來(lái)， 裝于透析袋中，繼續(xù)在高電壓下電泳，這時(shí)目的會(huì)從凝膠中電泳出進(jìn)入透析袋中， 由于分子量大，不能透過(guò)透析袋，從而保留于透析袋中。l取出透析袋中含的溶液， 進(jìn)一步用酚、氯仿抽提純化。二、實(shí)驗(yàn)試劑及儀器lDNA回收試劑盒l(wèi)瓊脂糖l電泳儀、電泳槽l紫外檢測(cè)儀l手術(shù)刀 三、三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 切取瓊脂糖凝膠中的目的DNA條帶，放入干凈的離心管中稱 重，如凝膠重為100 mg ，可視為100 l（100 mg100 l），以此類推。2. 加入3倍體積溶液GSB，于55水浴融膠6-10 min ，間斷（2-3 min）混合，確保膠塊完全融化，當(dāng)膠完全融化后，觀察溶液的顏色，如顏色為紫色，

3、加入適量3M醋酸鈉（pH 5.2），調(diào)整顏色和GSB顏色相同（黃色）。（為增加DNA回收量，可加入1倍體積異丙醇于已融化的凝膠溶液中，如凝膠重為100 mg，加入100 l異丙醇）。3. 待融化的凝膠溶液降至室溫（高溫時(shí)吸附柱結(jié)合DNA能力弱），加入吸附柱中靜置1分鐘，10,000g離心1分鐘，棄流出液。4. 加入650 l溶液WB，10,000g離心1分鐘，棄流出液。5. 10,000g離心1-2分鐘，去除殘留的WB。6. 將吸附柱置于一干凈的離心管中，在柱的中央加入30-50 l EB或去離子水（pH7.0）（EB或去離子水在60-70水浴預(yù)熱，使用效果更好），室溫靜置1分鐘。7. 10,000g離心1分

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