1、雞胚提取物的營養(yǎng)成分及其抗氧化作用              作者：張瑞娟，周玲，于燕，胡森科，苗江麗【摘要】  目的 分析雞胚提取物的營養(yǎng)價值，探討其對小鼠的補硒抗氧化作用。方法 營養(yǎng)成分按國標方法測定；抗氧化試驗采用硒營養(yǎng)不良模型動物法。100只小鼠分為3個劑量組和2個對照組，前4周，各劑量組和低硒對照組均喂飼低硒飼料，基礎(chǔ)對照喂飼基礎(chǔ)飼料。第5周起至第8周末，3個劑量組飼料中分別加入高、中、低劑量的雞胚提取物，并用雞蛋白粉調(diào)整各組飼料的蛋白質(zhì)水平。結(jié)果 每10

2、0g雞胚提取物中含蛋白質(zhì)56.4g，含K、Fe、Se分別為819mg、18.4mg、139.0g，維生素A、D、B2分別為1679g、21.25g、2.61mg等。第8周末，各劑量組小鼠全血硒水平恢復(fù)至基礎(chǔ)對照組水平(P0.05)；高劑量組腦硒水平基本恢復(fù)(P0.05)；全血、腦、腎、肝組織中谷胱甘肽過氧化物酶活性隨著處理劑量的增加而增強(P0.05)，全血、腎、肝組織中丙二醛(MDA)降低(P0.05)。結(jié)論 雞胚提取物是一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，含有豐富的礦物元素和維生素；雞胚提取物能改善小鼠的硒營養(yǎng)不良狀態(tài)，具有抗氧化作用。 【關(guān)鍵詞】  硒；營養(yǎng)不良；小鼠；谷胱甘肽過氧化物酶Analy

3、sis of the nutritional composition and antioxidativeeffect of the embryo extract from chickenABSTRACT: Objective  To analyze the nutritional composition, and explore the antioxidation and selenium supplement of the embryo extract from chicken(EEC). Methods  The nutritional composition was

4、determined by the national standard technique. The animal test used the method of Seleniummalnutrition in mice. Totally 100 healthy male mice were selected. In the first four weeks, mice in highdose, mediumdose, lowdose groups and seleniummalnutrition control group were fed with seleniummalnutrition

5、 forage, while the base control group was fed with common forage; from the 5th to the end of 8th week, forage of highdose, mediumdose, or lowdose was added to EEC and forage protein level was adjusted with egg white powder. Results  Per 100g EEC contained protein of 56.4g, K of 819mg, Fe of 18.

6、4mg, Se of 139.0g, vitamin A of 1679g, vitamin D of 21.25g, and vitamin B2 of 2.61mg. In animal test by the end of the 8th week, compared with the Semalnutrition group, the blood selenium level in mice of EEC highdose, mediumdose, lowdose groups recovered (P0.05). Glutathione peroxidase in the blood

7、, brain, kidney, and liver in mice enhanced with the increase of EEC (P0.05). MDA in the blood, brain, kidney, and liver in mice declined (P0.05). Conclusion  EEC is an excellent protein. It contains rich mineral elements and vitamins. It may efficaciously improve the status of seleniummalnutri

8、tion in mice, and has the antioxidative effect.KEY WORDS: selenium; malnutrition; mouse; glutathione peroxidase (GPX)從營養(yǎng)學和生化代謝角度考慮, 生物源有機硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特點優(yōu)于無機硒13。雞胚提取物以雞胚胎為主要原料配以山楂提取物等經(jīng)特殊工藝精制而成。含卵磷脂、膽堿、肉堿等。課題組對其營養(yǎng)成分和保健功能進行了研究和開發(fā)。本文分析雞胚提取物的營養(yǎng)成分, 并對其抗氧化能力及可能的機制進行探討。1  材料與方法1.1  樣品  雞胚提

9、取物，商品名：鳳寶，由西安天菊實業(yè)有限公司提供。人體推薦攝入量為20g/d0.33g/(kg·d)。1.2  實驗動物  ICR小鼠100只，體重18-22g，清潔級，由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號為醫(yī)動字第08004號。1.3  飼料配方  低硒飼料配方(g/kg)：低硒酵母300，蛋白粉50，蛋氨酸3，氯化膽堿1，AIN93混合鹽30，AIN93混合維生素1，纖維素10，植物油50，加蔗糖至1000。實驗飼料配方：低硒飼料加不同劑量的雞胚提取物。根據(jù)雞胚提取物蛋白質(zhì)含量，調(diào)整蛋白粉用量。飼料中蛋白質(zhì)含量以國標GB149249

10、4為標準。動物實驗劑量設(shè)計：高劑量組按公斤體重加入雞胚提取物6.6g，硒水平為0.092mg/kg；中劑量組按公斤體重加入雞胚提取物3.3g，硒水平為0.046mg/kg；低劑量組按公斤體重加入雞胚提取物1.65g，硒水平為0.023mg/kg。高、中、低劑量組所給雞胚提取物的量分別相當于人體推薦量的20、10、5倍。1.4  營養(yǎng)成分的測定  委托西北農(nóng)林科技大學測試中心、陜西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站檢測。1.5  動物實驗  選取100只健康雄性ICR小鼠，按體重隨機分為5組：雞胚提取物高、中、低劑量組；低硒對照組；基礎(chǔ)對照組，每組20只。前4周，各劑

11、量組和低硒對照組均喂飼低硒飼料，基礎(chǔ)對照喂飼基礎(chǔ)飼料。第5周起至第8周末，各劑量組喂飼實驗飼料，低硒對照和基礎(chǔ)對照仍分別喂飼低硒飼料和基礎(chǔ)飼料。硒營養(yǎng)不良動物模型的建立：低硒飼料喂飼小鼠，每兩周取1次鼠尾血測全血谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase, GPX)活性，當GPX被抑制率30%時，即認為動物模型建立成功。抗氧化實驗：按設(shè)計劑量將雞胚提取物摻入低硒飼料中喂飼動物。每周測動物體重及攝食量。4周末，處死動物，測定小鼠全血及肝、腎、腦組織GPX活性及丙二醛(malondialdehyde, MDA)、Se水平。硒含量測定采用2，3二氨基萘熒光分光光度法；GPX活力

12、測定采用DTNB比色法；MDA含量測定采用TBA比色法；飼料蛋白含量測定采用微量凱氏定氮法。1.6  數(shù)據(jù)處理  使用SPSS11.0 統(tǒng)計軟件，對動物實驗數(shù)據(jù)進行t檢驗(基礎(chǔ)飼料組與低硒飼料組)和Oneway ANOVA(雞胚提取物各劑量組與低硒飼料組)。2  結(jié)果2.1  雞胚提取物中的礦物質(zhì)和維生素  雞胚提取物中的K、Fe、Se含量分別是全雞蛋粉的2.3倍(819/357)、1.8倍(18.4/10.5)和3.6倍(139.0/39.1)；是雞肉的3倍(819/276)、8.8倍(18.4/2.1)和10.9倍(139.0/12.8)。

13、雞胚提取物中維生素A、B2含量分別是全雞蛋粉的3.2倍(1679/525)、6.5倍(2.61/0.40)；是雞肉粉的26.2倍(1679/64)、32.6倍(2.61/0.08)。雞胚提取物中的磷含量則較全雞蛋粉低，只有其60%(表1)。表1  雞胚提取物、全雞蛋粉、雞肉中礦物質(zhì)和維生素含量的比較（略）Table 1  Comparison of mineral elements and vitamin contents of egg powder, chicken meat with the embryo extract of chicken (EEC)*: 0.01g

14、/g; -: no data2.2  雞胚提取物中的蛋白質(zhì)、必需氨基酸含量和模式  雞胚提取物蛋白質(zhì)含量為56.4%，遠遠高于雞蛋的12.2%和雞胸脯肉的24.6%，必需氨基酸含量及其模式與人體的必需氨基酸模式基本一致，與全雞蛋粉和雞肉比較，蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值遠在雞蛋粉之上，是理想的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)(表2)。2.3  雞胚提取物對低硒小鼠的抗氧化作用  實驗小鼠低硒模型建立：低硒飼料喂養(yǎng)動物4周末，各劑量組和低硒對照組動物全血GPX活性平均為10.85u/mL，基礎(chǔ)對照組為25.43u/mL，各劑量組和低硒對照組動物全血GPX活性抑制率30%(25.43-10.

15、85)/25.43；實驗至8周末，低硒組血硒為0.060g/g，低于基礎(chǔ)組的0.118g/g(P0.05)，各劑量組血硒、腦硒分別為0.115g/g、0.102g/mg蛋白，均高于相應(yīng)的低硒對照組(P0.05)，腎、肝硒與低硒組比較無顯著性(表3)。實驗至8周末，低硒組全血GPX活性為11.43u/mL，低于基礎(chǔ)組的25.81u/mL(P0.05)，各劑量組的全血、腦、腎、肝組織中GPX活性分別為17.18u/mL、194.03u/mg蛋白、81.22u/mg蛋白、64.82u/mg蛋白，均高于相應(yīng)的低硒對照組(P0.05)，且隨著雞胚提取物劑量的增加而增強(表4)。實驗至8周末，低硒組各組織

16、臟器的MDA含量均高于相應(yīng)的基礎(chǔ)組(P0.05)，各劑量組的全血、腎、肝組織中MDA均低于相應(yīng)的低硒組(P0.05)，腦組織MDA含量與低硒組比較無顯著性差異(P0.05)，腦、肝、腎中的MDA含量與基礎(chǔ)組比較無顯著性差異(P0.05，表5)。表2  雞胚提取物中必需氨基酸的含量及模式（略）Table 2  Content and pattern of essential amino acids in the embryo extract of chicken表3  實驗8周末小鼠全血、腦、腎和肝組織中的硒含量（略）Table 3  The blood,

17、 brain, kidney and liver selenium levels in mice of the animal test by the end of the 8th weekP0.05 vs. base control; *P0.05 vs. Semalnutrition control表4  實驗8周末小鼠全血、腦、腎和肝組織中GPX的活性（略）Table 4  GPX in the blood, brain, kidney and liver in mice of the animal test by the end of the 8th weekP0.0

18、5 vs. base control; *P0.05 vs. Semalnutrition control         表5  實驗8周末小鼠全血、腦、腎和肝組織中MDA的含量（略）Table 5  MDA in the blood, brain, kidney and liver in mice of the animal test by the end of the 8th weekP0.05 vs. base control; *P0.05 vs. Semalnutrition con

19、trol3  討論目前，已發(fā)現(xiàn)了四種依賴于硒的谷胱甘肽過氧化物酶，并被基因數(shù)據(jù)庫命名為GPX1、GPX2、GPX3和GPX4，它們特異的催化有GSH(glutathione，GSH)參與的還原反應(yīng)。GPX1是細胞內(nèi)酶，l973年被證明屬含硒蛋白，似乎存在于所有細胞中，還原H2O2和游離的氫過氧化物。GPX2位于胃腸道內(nèi)，也是一種細胞內(nèi)酶，其底物的特異性與GPX1相似。也可代謝從膳食中吸收的氫過氧化物。GPX3是胞外或血漿酶，主要由腎臟分泌，但也由肝和乳腺產(chǎn)生。它可還原酯化的氫過氧化物成磷脂，以及還原游離的氫過氧化物。GPX4也稱為磷脂氫過氧化物谷胱甘肽過氧化物酶(phospholip

20、id hydroperoxide glutathione peroxidase，phGSHPx)，存在于許多組織中，而以睪丸中最豐富,它位于膜而不在胞漿1012。此酶被認為在預(yù)防脂質(zhì)過氧化方面起主要作用，因為它是能還原磷脂中脂肪酸氫過氧化物的唯一細胞內(nèi)GPX。這些谷胱甘肽過氧化物酶是機體氧化損傷防御系統(tǒng)的一部分。可見，機體一旦缺硒，機體的氧化損傷就會加劇，對機體的功能將造成嚴重影響1319。膳食中硒攝入不足，這些酶活性下降；血漿硒低于正常水平時，酶活性與硒水平呈正相關(guān)，故測定該酶活性可作為抗氧化效果的指標。丙二醛(malondiadehycle, MDA)是細胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，測其含

21、量可間接估計脂質(zhì)過氧化的程度。雞胚提取物是一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)含量高，氨基酸模式與人體的氨基酸模式一致，具有很高的營養(yǎng)價值。它的K、Fe、Se礦物元素和維生素A、D、B2等含量也很高。這使得它不但具有補充這些營養(yǎng)素的作用，而且，還可能有一些保健功能。本試驗用低硒飼料喂飼的小鼠4周后，各劑量組和低硒對照組動物全血GPX活性抑制率30%，試驗至8周末，低硒組血硒降低，全血GPX活性抑制率仍30%。說明硒營養(yǎng)不良動物模型建立成功。而且，低硒組動物的血硒、GPX活性保持在較低水平，顯示硒營養(yǎng)不良動物模型穩(wěn)定。小鼠的腦、肝硒含量均降低(P0.05)，腦、腎、肝GPX也顯著性降低(P0.05)，而全血、

22、肝臟的MDA明顯升高(P0.05)。說明由于機體硒營養(yǎng)不良，導致GPX活性降低，使MDA明顯升高，已造成了氧化損傷。根據(jù)衛(wèi)生部“保健食品功能評價”中相關(guān)內(nèi)容判斷，過氧化損傷動物模型建立成功。低硒動物經(jīng)用雞胚提取物干預(yù)4周后(試驗至第8周末)，小鼠全血硒和腦硒的改善較明顯(P0.05)，硒含量基本升至基礎(chǔ)組的水平，高劑量組小鼠全血的硒水平從0.060g/g恢復(fù)至0.115g/g，腦硒水平從0.059g/mg蛋白恢復(fù)至0.102g/mg蛋白(P0.05)，但肝硒的改善不是很明顯；全血、腦、腎和肝組織中的GPX活性均有不同程度的恢復(fù)，以腦的恢復(fù)較顯著，從96.75u/mg蛋白恢復(fù)到194.03u/m

23、g蛋白(P0.05)。這種現(xiàn)象說明腦對硒的利用存在優(yōu)先性，這與張在香等20的報道一致。同時我們也觀察到了雞胚提取物對低硒小鼠全血和肝中的MDA的清除作用(P0.05)，以對腎組織中MDA的清除作用明顯，從1216.14nmol/100mg蛋白降至627.49nmol/100mg蛋白，降低幅度為48.4%。但是，對腦中MDA的清除作用不明顯，可能是由于血腦屏障的作用，使MDA清除速度減慢。綜合本次試驗結(jié)果，雞胚提取物可能是通過補硒作用提高了小鼠的全血硒水平，使GPX活性恢復(fù)，起到抗氧化作用的。但全血硒水平與GPX活性并不同步，硒水平已恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，但GPX活性尚未完全恢復(fù)。而且，分析飼料中硒水

24、平后發(fā)現(xiàn)，高劑量組硒水平(0.092mg/kg)是AIN93G飼料硒水平(0.18mg/kg)的50%。可見，僅僅用補硒是不能完全解釋雞胚提取物的抗氧化作用的。推測雞胚提取物中可能含有其他的抗氧化成分，這有待進一步研究。本試驗條件下，我們觀察到了雞胚提取物能有效地改善小鼠的硒營養(yǎng)不良狀態(tài)，提高低硒小鼠的GPX活性，清除過氧化物產(chǎn)物MDA。根據(jù)衛(wèi)生部“保健食品功能評價”中相關(guān)內(nèi)容判斷，雞胚提取物具有抗氧化作用。(致謝：本校2002級研究生陳慶同學，李衛(wèi)敏同學參與了部分工作，在此表示感謝。)【參考文獻】  1Peter B, Hing MC. Coconsumption of selen

25、ium and vitamin E altered the reproductive and developmental toxicity of methylmercury in rats J. Neurotoxicol Teratol, 2006, 28(1):4958.Christine AZ, Ruth EM, Myrtha MA, et al. Effects of selenium depletion and selenium repletion by choice feeding on selenium status of young and old laying hens J.

26、Physiol Behav, 2006, 87(2):430440.Bogdan D, John AM. Dietary selenium supplementation prolongs pentobarbital induced hypnosis J. J Nutr Biochem, 2004, 15(9):548553.Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC. AIN93 purified diets for laboratory rodents: Final report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Writing Committee on the reformulation of the AIN76A rodent diet J. J Nutr, 1993, 123:19391951.楊月欣，王光亞，潘興昌. 中國食物成分表2002M. 北京：北京大學醫(yī)學出版社, 2002: 5680.Anbarasi K, Vani G, Balakrishna K. Effect of bacoside A on brain antiox