1、關(guān)于中學(xué)生物微生物課程培訓(xùn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第1頁，共41頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第2頁，共41頁一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基 六要素：碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子、水六要素：碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子、水根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用、設(shè)計(jì)最適合微生物生長的培養(yǎng)基。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用、設(shè)計(jì)最適合微生物生長的培養(yǎng)基。加富性的選擇培養(yǎng)基（投其所好），固體培養(yǎng)基加富性的選擇培養(yǎng)基（投其所好），固體培養(yǎng)基1、選擇培養(yǎng)基配方：、選擇培養(yǎng)基配方：水：水：1000ml第一專題第一專題 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第3頁，共41頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第4頁，共41頁培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型是否是否接種接種目的目的結(jié)果結(jié)果實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組對照組對照組以尿素為以尿素為

2、唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基胨牛肉膏胨牛肉膏蛋白培養(yǎng)基蛋白培養(yǎng)基是是分離分離尿素尿素細(xì)菌細(xì)菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無選有無選擇性擇性只生長尿只生長尿素細(xì)菌素細(xì)菌生長多種生長多種微生物微生物現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第5頁，共41頁2、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基配方、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基配方（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）配方如下：基）配方如下： 牛肉膏牛肉膏 3g 3g 蛋白胨蛋白胨 10g 10g 氯化鈉氯化鈉 5g 5g 瓊脂瓊脂 20g 20g 自來水自來水 1000mL 1000mL pH 7.4pH 7.47.67.6現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第6頁，共41頁3

3、 3、步驟：、步驟：稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)調(diào)pHpH值：用值：用 NaOHNaOH或或HClHCl調(diào)調(diào)pHpH，用，用pHpH試紙對照試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。分裝：注意不要污染棉塞。分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽包扎成捆，掛上標(biāo)簽, ,注明何種培養(yǎng)基。注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在37370 0C

4、C下恒溫培養(yǎng)下恒溫培養(yǎng)24h24h，確定無菌生長，確定無菌生長，方可使用。方可使用。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第7頁，共41頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第8頁，共41頁二、消毒滅菌二、消毒滅菌 消毒：消毒：使用理化因素方法殺死物體表面絕大多數(shù)微生物的方法。使用理化因素方法殺死物體表面絕大多數(shù)微生物的方法。滅菌：滅菌：采用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物的方法。采用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物的方法。 干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌1.1.構(gòu)造：構(gòu)造：（1 1）鍋體：一般以）鍋體：一般以2KW2KW電熱管作內(nèi)熱源，直接浸電熱管作內(nèi)熱源，直接浸在鍋內(nèi)水

5、中，通電后產(chǎn)生蒸汽。另附有支架，以承受內(nèi)鍋體。在鍋內(nèi)水中，通電后產(chǎn)生蒸汽。另附有支架，以承受內(nèi)鍋體。（2 2）內(nèi)鍋：由鋁楹嵌接而成，用于承放待滅物品。底附有活動(dòng)的柵格板，以防回流）內(nèi)鍋：由鋁楹嵌接而成，用于承放待滅物品。底附有活動(dòng)的柵格板，以防回流冷凝水將物品弄濕。其邊上還有一用于插排氣管的槽。冷凝水將物品弄濕。其邊上還有一用于插排氣管的槽。（3 3）鍋蓋：上有木把手、安全閥、放氣閥、壓力表）鍋蓋：上有木把手、安全閥、放氣閥、壓力表（4 4）其它：橡皮墊圈、旋鈕等）其它：橡皮墊圈、旋鈕等 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第9頁，共41頁高壓蒸汽滅菌法其步驟如下：高壓蒸汽滅菌法其步驟如下：1.1.滅菌器內(nèi)加入一定量

6、的水，將包扎好的物品放入其中。滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將包扎好的物品放入其中。2.2.接通電源，進(jìn)行加熱接通電源，進(jìn)行加熱3. 3. 排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm0.5kg/cm2 2時(shí)再打開排氣閥，待壓時(shí)再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到力回復(fù)到0 0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。時(shí)再關(guān)閉排氣閥。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第10頁，共41頁 4.4.當(dāng)壓力達(dá)當(dāng)壓力達(dá)1.05kg/cm1.05kg/cm2 2時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為121121

7、0 0C C，維持，維持30min30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。5.5.滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第11頁，共41頁 間歇滅菌法：間歇滅菌法： 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1 1次，次，每次煮沸每次煮沸1h1h，連續(xù)，連續(xù)3d3d重復(fù)進(jìn)行。在每兩次蒸煮之間，將物重復(fù)

8、進(jìn)行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在品（指培養(yǎng)基）放在37370 0C C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。便下次蒸煮時(shí)殺滅。 過濾除菌法：過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第12頁，共41頁 紫外線滅菌法：紫外線滅菌法： 一般一般30W30W燈管，燈管，9m9m3 3空間，距地面空間，距地面2m2m每次打開紫外線照射每次打

9、開紫外線照射0.5h0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí)先噴灑石炭，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的酸等化學(xué)消毒劑，可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第13頁，共41頁 前面配制的牛肉膏蛋白胨、尿素選擇性培前面配制的牛肉膏蛋白胨、尿素選擇性培養(yǎng)基包扎、滅菌。養(yǎng)基包扎、滅菌。 每組包扎平板每組包扎平板2 2包，包，5 5個(gè)個(gè)/ /包；包扎包；

10、包扎1ml1ml吸管吸管5 5根；根；1 1瓶加玻珠無菌水瓶加玻珠無菌水45ml45ml；9ml9ml無菌水試無菌水試管管6 6根；根；現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第14頁，共41頁三、分離與菌落計(jì)數(shù)三、分離與菌落計(jì)數(shù) 1 1、稀釋涂布平板法、稀釋涂布平板法 （1 1）倒平板）倒平板在無菌培在無菌培 養(yǎng)皿底部注明分離菌名、養(yǎng)皿底部注明分離菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。稀釋度、組別、班級(jí)。 （2 2）制備土壤稀釋液）制備土壤稀釋液 （3 3）涂布）涂布 （4 4）培養(yǎng)）培養(yǎng) （5 5）挑菌落）挑菌落現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第15頁，共41頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第16頁，共41頁 2 2、平板菌落計(jì)數(shù)、平板菌落計(jì)數(shù) 同一稀釋度重復(fù)平板不

11、能少于同一稀釋度重復(fù)平板不能少于3 3個(gè)，重復(fù)平個(gè)，重復(fù)平板數(shù)多使統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。同時(shí)板數(shù)多使統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。同時(shí)10-6,10-710-6,10-7每個(gè)稀釋度計(jì)算出的每克土樣中所含菌落每個(gè)稀釋度計(jì)算出的每克土樣中所含菌落形成的單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。形成的單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù) = =（C CV V）M M現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第17頁，共41頁 平板劃線法平板劃線法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第18頁，共41頁 接種方法：常用的有斜面接種法、平板接接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接

12、種法。的穿刺接種法。 接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等棒等現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第19頁，共41頁第二專題第二專題微生物的顯微直接計(jì)數(shù)法微生物的顯微直接計(jì)數(shù)法 目的：了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌目的：了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能。握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能。原理：測定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有原理：測定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。顯微直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。 顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞

13、菌體的純培養(yǎng)懸浮顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計(jì)數(shù)板，一般細(xì)菌則采母菌或霉菌孢子可采用血球計(jì)數(shù)板，一般細(xì)菌則采用彼得羅夫用彼得羅夫霍澤（霍澤（PetrofPetrofHausserHausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板。）細(xì)菌計(jì)數(shù)板。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第20頁，共41頁 兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件相同，只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件相同，只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計(jì)數(shù)板下部用油鏡觀察。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計(jì)數(shù)板下部的細(xì)

14、菌不易看清。血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻的細(xì)菌不易看清。血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有片上有4 4條槽而構(gòu)成條槽而構(gòu)成3 3個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)，計(jì)數(shù)區(qū)的短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)，計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為1616個(gè)大方格（大方格用三線隔個(gè)大方格（大方格用三線隔開），而每個(gè)大方格又分成開），而每個(gè)大方格又分成2525個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成分成2525個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開）

15、，而每個(gè)大方格又個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開），而每個(gè)大方格又分成分成1616個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400400個(gè)小方格組成。個(gè)小方格組成。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第21頁，共41頁圖1 血球計(jì)數(shù)板現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第22頁，共41頁 計(jì)數(shù)區(qū)邊長為計(jì)數(shù)區(qū)邊長為1mm1mm，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為lmmlmm2 2，每個(gè)小方，每個(gè)小方格的面積為格的面積為1/400mm1/400mm2 2。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度為為0.1mm0.1mm，所以每個(gè)計(jì)數(shù)

16、區(qū)的體積為，所以每個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的體積為0.1mm0.1mm3 3（1010-4-4mlml）。）。 使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，先要測定每個(gè)小方格中微生物的使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，先要測定每個(gè)小方格中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細(xì)胞數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細(xì)胞的數(shù)量。的數(shù)量。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1 1鏡檢計(jì)數(shù)室：加樣前，將血球計(jì)數(shù)板及蓋玻片用擦鏡紙鏡檢計(jì)數(shù)室：加樣前，將血球計(jì)數(shù)板及蓋玻片用擦鏡紙或綢布擦干凈后，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢，若有污或綢布擦干凈后，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢，若有污物需要清洗，干燥后使用。物需要清洗，干燥后使用。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第23頁

17、，共41頁2 2視待測菌液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋，以每小格的菌數(shù)可數(shù)視待測菌液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋，以每小格的菌數(shù)可數(shù)（以每中格（以每中格10-2010-20個(gè)酵母菌為宜）。個(gè)酵母菌為宜）。3 3把蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板的刻度上，以玻棒（或滴管）沾取巳稀把蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板的刻度上，以玻棒（或滴管）沾取巳稀釋的酵母茵懸液，從蓋玻片的一端注入，使菌液沿兩玻片間釋的酵母茵懸液，從蓋玻片的一端注入，使菌液沿兩玻片間滲入（勿使菌液流到兩邊平臺(tái)上，否則使盞玻片抬高），并滲入（勿使菌液流到兩邊平臺(tái)上，否則使盞玻片抬高），并用吸水紙用吸水紙 吸干溝槽中流出的多余菌液。血球計(jì)數(shù)板置于顯微吸干溝槽中流出的多余菌液。血

18、球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第24頁，共41頁4 4計(jì)數(shù)方法：計(jì)數(shù)方法： 16162525規(guī)格的計(jì)數(shù)板，需計(jì)數(shù)左上、右上、左下、右下規(guī)格的計(jì)數(shù)板，需計(jì)數(shù)左上、右上、左下、右下4 4個(gè)中格個(gè)中格（共（共100100個(gè)小格）的酵母菌。個(gè)小格）的酵母菌。 2525（中格）（中格）1616（小格）規(guī)格的計(jì)數(shù)板，除計(jì)數(shù)左上、右上、左下、（小格）規(guī)格的計(jì)數(shù)板，除計(jì)數(shù)左上、右上、左下、右下右下4 4個(gè)中格外還需加數(shù)中央的一個(gè)中格（共個(gè)中格外還需加數(shù)中央的一個(gè)中格（共8080個(gè)小格

19、，個(gè)小格，5 5個(gè)中方格）個(gè)中方格）的酵母菌。的酵母菌。 5.5.計(jì)算公式：計(jì)算公式： 五個(gè)中方格中總菌數(shù)為五個(gè)中方格中總菌數(shù)為A A，菌液稀釋倍數(shù)為，菌液稀釋倍數(shù)為B B， 酵母菌細(xì)胞數(shù)酵母菌細(xì)胞數(shù)/ml =/ml =A A1616l0l04 4B (16B (162525規(guī)格的計(jì)數(shù)板規(guī)格的計(jì)數(shù)板) ) 酵母菌細(xì)胞數(shù)酵母菌細(xì)胞數(shù)ml =ml =A A2525l0l04 4B ( 25B ( 251616規(guī)格的計(jì)數(shù)板規(guī)格的計(jì)數(shù)板) )55現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第25頁，共41頁 計(jì)數(shù)原則：計(jì)數(shù)原則： 位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽

20、，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。 使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗，切勿使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。必須重復(fù)洗滌至干凈為止。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第26頁，共41頁芽孢染色芽孢染色 無菌操作無菌操作 微生物涂片微生物涂片 掌握細(xì)菌的芽孢染色（枯草桿菌）掌握細(xì)菌的芽孢染色（枯草桿菌）

21、 熟煉顯微鏡使用熟煉顯微鏡使用現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第27頁，共41頁 細(xì)菌的芽孢染色原理細(xì)菌的芽孢染色原理 細(xì)菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，細(xì)菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀）。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染呈無色透明狀）。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。所色而一旦染上色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。所有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則：除了用有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則：除了用著色力強(qiáng)著色力強(qiáng)的染料的染料外，還需要外，還需要加熱加熱

22、，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時(shí)，菌體也會(huì)著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難時(shí)，菌體也會(huì)著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體菌體復(fù)染復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第28頁，共41頁涂片涂片干燥干燥固定固定現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第29頁，共41頁芽孢染色的方法和步驟芽孢染色的方法和步驟1.1.涂片、干燥、固定：待涂片、干燥、固定：待涂片晾干后在酒精燈火焰涂片晾干后在酒精燈火焰上通

23、過上通過2323次。次。2.2.染色：染色：加染色液：加加染色液：加5%5%孔雀綠水孔雀綠水溶液于涂片處（染料以鋪溶液于涂片處（染料以鋪滿涂片為度），然后將涂滿涂片為度），然后將涂片放在銅板上（用鑷子夾片放在銅板上（用鑷子夾住載玻片），用酒精燈火住載玻片），用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽時(shí)開焰加熱至染液冒蒸汽時(shí)開始計(jì)算時(shí)間，約維持始計(jì)算時(shí)間，約維持5-5-10min10min。加熱過程中要隨時(shí)。加熱過程中要隨時(shí)添加染色液，添加染色液，切勿讓標(biāo)本干切勿讓標(biāo)本干涸涸。（加熱時(shí)溫度不能太。（加熱時(shí)溫度不能太高）。高）。水洗：待玻片冷卻后水洗：待玻片冷卻后 ，用，用水輕輕地沖洗，直至流出的水水輕輕地沖洗

24、，直至流出的水中無染色液為止。中無染色液為止。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第30頁，共41頁復(fù)染：用蕃紅液染色復(fù)染：用蕃紅液染色1-2min1-2min。3.3.水洗、晾干或吸干。水洗、晾干或吸干。 4.4.鏡檢：鏡檢：觀察：芽孢（菌體）顏色、形狀、著生位置、芽孢囊特征等。觀察：芽孢（菌體）顏色、形狀、著生位置、芽孢囊特征等。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第31頁，共41頁革蘭氏染色 革蘭氏染色法革蘭氏染色法 是是18841884年由丹麥病理學(xué)家年由丹麥病理學(xué)家C.GramC.Gram所創(chuàng)立的。所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法，因?yàn)橥ㄟ^此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革法，因?yàn)橥ㄟ^此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭氏陽性菌（蘭氏陽性菌（G+G+）和革蘭氏陰性菌（）和革蘭氏陰性菌（G-G-）兩大）兩大類。類。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第32頁，共41頁？1234結(jié)晶紫結(jié)晶紫碘液碘液酒精酒精復(fù)紅復(fù)紅現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第33頁，共41頁革蘭氏染色的機(jī)理：革蘭氏染色的機(jī)理： 主要由于兩類細(xì)菌的主要由于兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同構(gòu)不同。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第34頁，共41頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第35頁，共41頁制片制片初染初染（結(jié)晶紫（結(jié)晶紫1min）水洗水洗媒染媒染（碘液（碘液1min）水洗水洗脫色脫色（乙（乙醇醇20-30s）水洗水洗復(fù)染復(fù)染（番紅（番紅2min）水洗