1、人參蛋白抗輻射損傷作用                    作者：李紅艷，趙雨，孫曉迪，白雪媛，趙大慶  【摘要】  目的研究人參蛋白的抗輻射損傷作用。方法以60co-射線一次性照射小鼠全身，觀察人參蛋白對照射小鼠外周血白細胞數，骨髓細胞微核數，紅細胞超氧化物歧化酶（sod）活性，肝臟丙二醛（mda）含量以及胸腺、脾臟指數的影響。結果人參蛋白能增加輻射后小鼠外周血白細胞數，減少骨髓細胞

2、微核數，增加紅細胞sod活性，抑制肝臟mda含量升高，提高胸腺及脾臟臟體指數。結論人參蛋白對射線所致小鼠輻射損傷有較好的保護作用。 【關鍵詞】  人參蛋白； 小鼠； 輻射損傷 abstract：objectiveto observe the protective effect of ginseng protein against radiation injury in micemethodsthe model was made in mice by 60co- radiation. the quantity of peripheral white blood cells (wbc)

3、and bone marrow cells micronucleus were counted, respectively. the activity of sod in red blood cell, the content of mda in hepar, and the weight of thymus and spleen were determined, respectively.resultsginseng protein could increase the quantity of wbc,the activity of sod and index of spleen and t

4、hymus organ, reduce the quantity of bone marrow cells micronucleus and the content of mda. conclusionginseng protein is effective in protecting the -radiation injury in mice. key words：ginseng;   mice;   radiation injury 人參為五加科植物人參panax ginseng c. a. meyer的干燥根。大量研究顯示，人參單味藥及復方藥均具有

5、明顯的抗輻射作用1，但目前研究大多針對人參皂苷及多糖類，認為皂苷與多糖是人參抗輻射作用的主要成分26，對于蛋白類成分抗輻射研究未見報道。本實驗通過觀察人參蛋白對輻射小鼠損傷的保護作用，為進一步研究人參蛋白的抗輻射作用奠定基礎。 1   材料與儀器 1.1  藥物5年生人參購自吉林靖宇縣，為五加科植物人參(panax giseng c.a. mey.的干燥根。人參蛋白樣品為本實驗室制備，經bradford蛋白含量試劑盒法測定蛋白含量為80%。 1.2   動物 由吉林大學實驗動物中心提供的icr小鼠，雄性，體質量1822 g。動物質量合格證號：1

6、0-1023。 1.3   儀器與試劑 貝克曼-庫爾特5分類血球計數儀，backman公司；xs-212-201雙目光學顯微鏡，jnoec公司；uv mini-1240型紫外可見分光光度計，shimadzu公司；sod試劑盒、mda試劑盒，南京建成生物研究所。 2  方法 2.1  動物分組 取40只小鼠，隨機分為4組，即正常對照組，輻射對照組，人參蛋白高劑量組（1 mg/g）及人參蛋白低劑量組（0.5 mg/g）。各組均為灌胃給藥，1 ml/次，對照組灌服等體積蒸餾水。連續給藥7 d后，除正常對照組外，其余3組均實施一次性60co-射線全身照射，照射劑

7、量為2 gy。 2.2  外周血白細胞計數 照射后24 h尾靜脈采血20 l，加入到0.38 ml 2%hac溶液中，充分混勻，加入血球計數板中，在顯微鏡下讀取白細胞(wbc)個數。 2.3  骨髓細胞微核計數 照射后24 h小鼠頸椎脫臼處死，取胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常規涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定510 min。將固定好的涂片放入giemsa應用液中，染色1015 min。立即用蒸餾水沖洗，晾干，鏡檢。選擇細胞完整、分散均勻、著色適當的區域，在油鏡下觀察。以有核細胞形態完好作為判斷制片優劣的標準。 2.4  紅細胞sod活性及肝

8、臟mda含量測定 小鼠頸椎脫臼處死后，立即眼球取血并剝取肝臟。全血經生理鹽水沖洗，冷雙蒸水混合、95乙醇振蕩、三氯甲烷抽提制備sod抽提液，按照試劑盒說明書測定sod活力。肝組織經生理鹽水沖洗，磷酸鹽緩沖液勻漿制成5組織勻漿液，取上清按照試劑盒說明測定mda含量。 2.5  臟體指數計算照射24 h后，分別對各受試小鼠進行稱重。小鼠處死后分別取出胸腺和脾臟稱量，計算胸腺、脾臟的臟體指數比。 2.6  數據處理與分析數據以±s表示，組間差異按poisson分布進行t檢驗。 3  結果 3.1  人參蛋白對輻射小鼠血液白細胞數及骨髓細胞微核數的影響

9、 顯微鏡下讀取計數板中白細胞個數，計算計數池中4個大方格中白細胞總數：白細胞數（109/l）=4個大方格中白細胞總數/4 ×稀釋倍數×107；每只動物計數1 000個嗜多染紅細胞，計算骨髓細胞微核率，以千分率表示。結果見表1。表1  人參蛋白對白細胞數及骨髓微核數的影響（略） 由表1可見，輻射對照組與正常對照組比較，wbc數明顯降低，微核率明顯升高，說明造模成功。人參蛋白組較輻射對照組小鼠wbc數明顯增多，微核率明顯降低，說明人參蛋白可對抗輻射所致白細胞數降低及微核數升高。 3.2  人參蛋白對輻射小鼠sod活性及mda含量的影響 按照試劑盒方法分別測定

10、紅細胞sod活性及肝臟mda含量，并按照試劑盒所示公式進行計算。結果見表2。表2  人參蛋白對sod活性及mda含量的影響（略）由表2可見，輻射對照組與正常對照組比較，sod活性明顯降低、mda含量明顯升高，說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，sod活性明顯升高，且成一定量效關系，說明人參蛋白可對抗輻射所致sod活性降低；mda含量雖無明顯變化但有降低趨勢，且成一定量效關系，說明人參蛋白可能具有抑制小鼠mda含量升高的作用。 3.3  人參蛋白對輻射小鼠胸腺及脾臟指數的影響 小鼠處死后稱取胸腺、脾臟重量，并與處死前當天小鼠體質量進行比較，計算臟體系數比。結果見表3。表

11、3  人參蛋白對胸腺及脾臟指數的影響（略） 由表3可見，輻射對照組與正常對照組比較，胸腺及脾臟指數明顯降低，說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，胸腺指數及高劑量脾臟指數明顯升高，說明人參蛋白可對抗輻射所致胸腺及脾臟指數降低，且成一定量效關系。    綜上，給予人參蛋白能有效預防射線照射引起的小鼠白細胞數減少、骨髓微核數增加、紅細胞sod活性降低及胸腺、脾臟指數降低，對mda含量升高雖無明顯抑制作用，但有一定抑制趨勢。 4  討論    輻射對生物體的危害較大，可以直接作用于dna、蛋白質及酶類，使分子變性、細

12、胞結構破壞；也可以作用于機體內水分子，使其產生大量的具有強氧化性能的自由基，致使機體代謝紊亂，引起免疫、神經和內分泌系統的調節功能障礙等一系列病變7。外周血白細胞數減少、骨髓細胞微核數增高、血或組織中sod活性降低等均為一次性全身射線照射引起輻射損傷的主要表現。白細胞又稱白血球，作為免疫系統的一部分幫助身體抵抗傳染病以及外來的東西，白細胞急劇減少可引起血液病等多種免疫性疾病。微核是在細胞有絲分裂后期沒有進入細胞核而留在細胞質中的染色體或片段，它在末期以后，單獨形成一個或幾個規則的次核，由于比核小得多故稱微核。微核的多少直接反映染色體的損傷程度，也間接代表機體受輻射損傷的狀況。另外，正常組織受到

13、輻射后，會產生大量自由基，后者作用于生物膜引起脂質過氧化，造成生物膜功能和代謝的改變。sod作為機體組織主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可間接反映機體清除自由基的能力；mda是脂質過氧化的主要產物，其含量高低反映機體的自由基水平和氧化應激水平8。    本實驗中人參蛋白能明顯抑制受照小鼠的白細胞數減少、微核數增多、sod活性降低、mda含量增加，說明人參蛋白對輻射損傷小鼠具有很好的保護作用。同時，人參蛋白提高使受照小鼠的胸腺、脾臟指數增加，反映了人參蛋白有提高免疫力的作用。綜上，我們認為，人參蛋白具有有效防治輻射對機體損傷的作用，且認為人參蛋白的抗輻射作用可

14、能與其增強免疫力，清除自由基作用密切相關。對于人參蛋白的其他作用機理，我們正在進一步研究中。 【參考文獻】  1鄔 蓉,高守紅,辛海量.人參抗輻射損傷研究概況j.藥學實踐雜志,2007,25(6):364.2姜建華,張學進,王育麗.人參皂苷對60co照射小鼠不良反應的影響j.浙江中西醫結合雜志,2005,15(11):682.3ivanova t, han y, son hj, et a1. antimutagenic effect of polysaccharide ginsan extracted from panax ginsengj.food chem toxieol, 2006, 44(4):517. 4金光輝,劉樹錚,劉 揚,等.人參組甙對紫外線輻射致皮膚角質形成細胞損傷的保護作用j.中華放射醫學與防護雜志,2002,22(6):420.5劉麗波,孫曉玲,