1、不同劑量烏司他丁對(duì)體外循環(huán)患者中性粒細(xì)胞核因子-B活性的影響    【摘要】  【關(guān)鍵詞】  烏司他丁; 體外循環(huán); 中性粒細(xì)胞; 核因子-BEffects of Different Doses of Ulinastatin on NF-B Activity ofPolymorphonuclear Neutrophils in Patientsundergoing&#

2、160;Cardiopulmonary BypassLI Jian-li,ZHAO Yan-li,HAN Guang-yan,Zhao Zhi-yong,YAN Zhi-jun,LI Xiong-long(The Hebei General Hospital, Hebei Shijiazhuang 050051，China)Abstract: OBJECTIVE To study the effects o

3、f different doses of ulinastatin on the NF-B activity of polymorphonuclear neutrophils in patients with cardiopulmonary bypass(CPB) .METHODS 60 congenital tetralogy of Fallot patients&#

4、160;were randomly divided into three groups of 20 each,ulinastatin (U1) group:10 000U/kg,ulinastatin (U2) group:20 000U/kg,control (C) group used equal normal saline.3 milliliter radial 

5、;artery blood was collected after induction of anesthesia(T1), 30 min after start of CPB(T2),30 min(T3),4 hours(T4) and 24 hours(T5) after end of CPB. PMN NF-B activity w

6、as tested in ELISA.RESULTS The value of PMN NF-B activity showed a progressive rise after the begin of CPB，the climax value of PMN NF-B activity was got T3，then 

7、;it declined. But PMN NF-B activity at T5 was still higher than that T1 . The PMN NF-B activity in treatment group was lower than that in control group T2,

8、T3,T4 and T5. The PMN NF-B activity in U2 group was lower than that in U1 group T2,T3 and T4.CONCLUSION Ulinastatin can reduce the activity of PMN NF-B,and the&

9、#160;inhibition action of U2 group is better than U1 group in patients undergoing CPB.Key words： Ulinastatin; Cardiopulmonary bypass;Polymorphonuclear neutrophils;NF-B體外循環(huán)(cardiopulmonary bypass,CPB)可觸發(fā)一系列

10、全身炎癥反應(yīng), CPB中許多因素如血液與CPB管道直接接觸,手術(shù)創(chuàng)傷,器官缺血再灌注,術(shù)中體溫的改變等,均可引起全身炎癥反應(yīng)1。而核因子-B ( nuclear factor -B,NF-B)是多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄和級(jí)聯(lián)放大過(guò)程的共同通路和作用位點(diǎn),它的活化可加重CPB及心肌缺血再灌注損傷中的炎性反應(yīng)2。烏司他丁(Ulinastatin) 為廣譜的蛋白水解酶抑制劑,具有抑制炎性介質(zhì)產(chǎn)生的作用。我們已有研究表明烏司他丁對(duì)CPB患者的PMN NF-B活性有抑制作用，但不同劑量烏司他丁對(duì)CPB患者的PMN N

11、F-B活性的作用是否一樣尚無(wú)定論，本實(shí)驗(yàn)旨在探討不同劑量烏司他丁對(duì)CPB下心內(nèi)直視手術(shù)患者NF-B活性的影響。1 資料與方法1.1 病例選擇與分組 選擇心功能- 級(jí)、擇期CPB下行法洛四聯(lián)癥根治術(shù)患者60例，男性32例，女性28例，年齡48歲，體重10.024.5kg。隨機(jī)分成烏司他丁1組(U1組)、烏司他丁2組(U2組)和對(duì)照組(C組),每組20例。所有患者均無(wú)肝腎功能障礙、糖尿病、重度貧血及近期使用皮質(zhì)激素治療等。1.2 麻醉及CPB方法 全部病例均于術(shù)前30 min肌注嗎啡0.1 mg/kg,東莨菪堿0.01

12、 mg/kg,麻醉誘導(dǎo)為芬太尼5 g/kg,咪唑安定0.15 mg/kg,萬(wàn)可松1.5 mg/kg,氣管插管全身麻醉,麻醉維持應(yīng)用芬太尼2530 g/kg,間斷應(yīng)用萬(wàn)可松、異丙酚或異氟烷吸入麻醉。CPB均采用Sarns-8000人工心肺機(jī),希健-型膜式氧合器和科威動(dòng)脈微栓過(guò)濾器。羥乙基淀粉130/0.4、紅細(xì)胞等預(yù)充,晶膠比0.40.61。轉(zhuǎn)機(jī)前常規(guī)肝素化(3 mg/kg),CPB中追加肝素抗凝,保持ACT>480 s。灌注流量80120 ml/(kg·min),術(shù)中維持血壓4060 mm

13、Hg(1 mmHg=0.133 kPa) 。血液中度稀釋,中度降溫。St. Thomas液間斷灌注心臟。停機(jī)后按11用量以魚精蛋白中和體內(nèi)肝素。1.3 用藥方法、標(biāo)本采集及指標(biāo)測(cè)定 U1組給烏司他丁(廣東天普生物化學(xué)制藥有限公司,每支5萬(wàn)U)1.0萬(wàn)U/kg,U2組給烏司他丁2.0萬(wàn)U/kg，用生理鹽水稀釋至20 ml,于麻醉誘導(dǎo)后切皮前經(jīng)中心靜脈推注半量,另半量加入預(yù)充液中。C組以等量生理鹽水替代, 用法同上。分別于麻醉后手術(shù)前(T1)、CPB開始后30 min(T2)、CPB停止后30 mi

14、n(T3)、4 h(T4)和24 h(T5)抽取橈動(dòng)脈血3 ml,肝素抗凝(肝素化血不抗凝)，測(cè)定紅細(xì)胞比積(Hct)，分離中性粒細(xì)胞(密度梯度離心法)，并于-70 以下貯存待測(cè)。用ELISA法(試劑盒購(gòu)自ADL公司)測(cè)定中性粒細(xì)胞(PMN)核因子-B(NF-B)活性。由于CPB期間血液稀釋因素, 所得數(shù)值由Hct值按如下公式進(jìn)行校正:校正值=測(cè)得值×( CPB前Hct值/Hct測(cè)得值)1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(

15、±s)表示。組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析,組間比較采用單因素方差分析, P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 三組患者一般資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表1。2.2 三組患者PMN NF-B 活性在CPB開始后均逐漸升高,于CPB停止后30 min達(dá)到峰值, 之后逐漸下降，但在CPB停止后24 h 三組PMN NF-B活性均依然高于術(shù)前水平; U1組和U2組在T2T5時(shí)點(diǎn)PMN NF-B活性均低于C組(P< 0

16、.05);U2組在T2T4時(shí)點(diǎn)PMN NF-B活性低于U1組(P<0.05),見表2。表1 病例分組及一般資料比較表2 三組患者不同時(shí)點(diǎn)PMN NF -B活性的比較注：與T1相比, # P<0.05, #P< 0.01; 與C組相比,  P<0.05,P< 0.01; 與U1組相比, *P<0.053 討 論CPB引起的全身炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致CPB術(shù)后組織、器官損傷的重要因素3。在心臟直視手術(shù)中

17、,CPB一旦建立,機(jī)體不可避免地面臨多方面打擊，促發(fā)腫瘤壞死因子-(TNF-)、白介素(IL)-6、IL-8、IL-10 等多種炎性介質(zhì)的瀑布樣釋放,導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng),并引起組織損傷和器官功能障礙4。NF-B是具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)因子,幾乎存在于所有細(xì)胞中,調(diào)節(jié)著編碼細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、趨化因子、細(xì)胞粘附分子和一些有關(guān)健康及疾病的蛋白基因，廣泛參與多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄和級(jí)聯(lián)放大過(guò)程2。有研究顯示NF-B在CPB引起的全身炎癥反應(yīng)中起重要作用2,5。烏司他丁是一種典型的Kuniz型的蛋白酶抑制劑,具有兩個(gè)活性功能區(qū)，兩個(gè)活性功能區(qū)均有廣譜抑酶作用,能夠同時(shí)抑制胰蛋白

18、酶、磷脂酶A2、透明質(zhì)酸酶、彈性蛋白酶等多種蛋白酶的活性6。研究證明中性粒細(xì)胞對(duì)機(jī)體的防御起重要作用,也是重要的炎性細(xì)胞,其內(nèi)容物具有組織損傷的作用,在全身炎癥反應(yīng)中起重要作用，被認(rèn)為是炎癥消散的關(guān)鍵7,8。本實(shí)驗(yàn)中，我們檢測(cè)了對(duì)照組和烏司他丁組患者中性粒細(xì)胞NF-B的表達(dá)活性,結(jié)果顯示隨著CPB的啟動(dòng)三組患者PMN NF-B活性均逐漸增高,并于CPB停止后30min達(dá)到峰值，說(shuō)明CPB過(guò)程中的各種因素確實(shí)可以引起PMN NF-B活化，這一結(jié)果與Chandrasekar等9的結(jié)果相符。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，U組各時(shí)間點(diǎn)PMN NF-B活性明  

19、60; 顯低于C組，說(shuō)明在CPB過(guò)程中使用烏司他丁的確具有降低PMN NF-B活性，減少其活化的作用。這與我前面的研究結(jié)果烏司他丁對(duì)CPB患者中性粒細(xì)胞NF-B的活性有抑制作用相一致。本研究結(jié)果亦顯示，U2組在CPB開始后30 min、CPB停止后30 min、4 h PMN NF-B活性低于U1組，說(shuō)明烏司他丁降低CPB患者PMN NF-B活性的作用與所用烏司他丁的劑量有關(guān)，且在小劑量范圍內(nèi)，烏司他丁的劑量越大，其抑制作用越強(qiáng)。但在更大劑量時(shí)其作用是否如此尚有待進(jìn)一步探討。【參考文獻(xiàn)】  1&

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