1、臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗第十四章 腸桿菌科及檢驗 考點概述概念；命名與分類原則；共同特點；自然與內的分布；微生物學檢查方法；臨床意義。埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、變形桿菌屬、生物學性狀；微生物學檢驗；臨床意義。菌屬及其他腸桿菌科細菌。【內容講解】一、概述（共性）腸桿菌科是由多個菌屬組成，G-桿菌，生物學性狀相似。大多數腸道桿菌屬于正常菌群。當機體免疫力降低或侵入腸道外組織時成為條件致病菌而引起疾病。 部分為致病性細菌。（一）分類腸桿菌科細菌的種類繁多。主要根據細菌的形態、生化反應、抗原性質以及核酸相關性進行分類。根據系統細菌學手冊（1984 年）將腸桿菌科的細菌分為 20 個屬即埃希菌屬、

2、志賀菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、菌屬、腸桿菌屬、菌屬等。菌屬、哈夫菌屬、菌屬、菌屬、變形桿菌屬、菌屬、（二）生物學特性1.形態與染色G-，桿菌，大小為（1.06.0）m×（0.31.0）m。多數有周鞭毛（除志賀菌屬、膜。2.培養需氧或兼性厭氧；營養要求不高；菌屬、菌和 EIEC），無芽胞，少數菌屬細菌可形成莢普皿和麥培養基：中等大小、表面光滑的菌落；液體培養基：混濁生長。3. 生化反應發酵葡萄糖產酸、或產酸產氣；乳糖發酵試驗：非致病菌 +，致病菌 -（除外變形桿菌）。觸酶陽性；氧化酶硝酸鹽。4. 抗原構造；硝酸鹽還原為亞表面抗原（如 Vi 抗原、K 抗原）：包繞在 O 抗原外的不耐

3、熱的多糖抗原，可阻斷 O 抗原與相應抗體之間的反應，加熱處理能破壞其阻斷作用。5. 變異菌落 SR 變異鞭毛 HO 變異耐藥性變異生化反應性質的改變6. 抵抗力不強。加熱 60，30 分鐘即被殺死。不耐干燥，對一般化學劑敏感。對低溫有耐受力，能耐膽鹽。第1頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗7.腸桿菌科的初步分類（三）致病性1.致病性腸道桿菌：以腸內瀉及腸熱癥等。為主，腹瀉為共顯癥狀，引起急慢性腸道、旅游者腹2.條件致病菌：為醫院主要病原菌，出現移位。大腸埃希菌、變形桿菌及菌等條件致病菌可引起泌尿生殖道、傷口等部位的（四）微生物檢驗1.分離培養。2.鑒定（1）初步鑒定：確定腸桿菌科的細菌，應采用葡萄糖

4、氧化-發酵試驗及氧化酶試驗與弧菌科和非發酵菌加以鑒別；腸桿菌科細菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗，將腸桿菌科的細菌分為三個類群；選擇生化反應進行屬種鑒別。KIA 和 MIU 將細菌初步（2）最后鑒定：。根據生化反應的結果初步、種，再用診斷血清做凝集反應才能作出最后。二、埃希菌屬5 個種：大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、臨床最常見的是大腸埃希菌。（一）生物學性狀1.形態與染色菌、菌和傷口埃希菌。G-，短桿菌，（1.03.0）m× （0.40.7）m。多數有周鞭毛，有菌毛，有莢膜或微莢膜。2.培養特性兼性厭氧菌；營養要求不高。普通營養肉湯：渾濁生長。第2頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗

5、普通營養瓊脂：圓形，凸起，邊緣整齊，灰白色的 S 型菌落，直徑 23mm。血瓊脂平板：少數菌株產生-溶血環。伊紅亞甲藍瓊脂：菌落呈藍紫色并有金屬光澤（發酵乳糖）。麥和 SS 瓊脂：粉紅色菌落。3. 生化反應發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產酸產氣，分解蔗糖因菌株而異，尿素酶試驗吲哚、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽試驗（IMViC 試驗）為+ + - -。克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）：斜面和底層均產酸產氣，H2S（-）。動力-吲哚-尿素（MIU）培養基為+ + -。4. 抗原結構。菌體抗原（O）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三種現已知有 171 種O 抗原，100 種 K 抗原和 56 種H 抗原。一個

6、菌株的抗原類型由特殊的 O、K 和 H 抗原的代碼表示，其血清型別的方式是按 O：K：H 排列，例如 O111：K58：H2。（二）致病性致病物質：主要是侵襲力、內毒素、腸毒素等。所致疾病：1. 腸道外2. 腸道以泌尿系統常見，還有菌血癥，膽囊炎，腹腔膿腫。（致病性大腸埃希菌）腸產毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（水瀉）。腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結腸黏膜上皮，引起痢疾樣腹瀉（膿血便）。腸型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產志賀樣毒素（VT）大腸埃希菌（SLTEC 或 UTEC），其中 O157：H7 可引起性大腸炎和溶

7、血性尿毒綜合征（HUS）。臨床特征為嚴重的腹痛、痙攣，反復性腹瀉，伴發熱、嘔吐等。嚴重者可發展為急性腎衰竭。腸黏附型大腸埃希菌（EAggEC）：新近能引起腹瀉。3.CDC 將大腸埃希菌 O157：H7 列為常規檢測項目在許多地區，O157；H7 占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原菌。6、7、8 三O157：H7的發生率最高。O157 是 4 歲以下兒童急性腎衰的主要病原菌。（三）微生物檢驗1.標本腸道可糞便；腸道外可根據臨床情況中段尿液、血液、膿汁、膽汁、腦脊液、痰、液等。第3頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗2.檢驗方法及鑒定最后鑒定：補充系列生化試驗致病性大腸埃希菌無

8、動力的不發酵乳糖株，應與志賀菌相鑒別鑒別試驗：醋酸鈉、葡萄糖銨、粘質酸鹽產酸試驗。大腸埃希菌均為陽性，而志賀菌均為血清學試驗。三、志賀菌屬人類細菌性痢疾最常見的病原菌，通稱痢疾桿菌。根據生化反應與血清學試驗該屬細菌分為痢疾、和宋內志賀菌四群。我國以和宋內志賀菌引起的菌痢最為常見。（一）生物學特性1.形態與染色G-，短小桿菌，（23）m×（0.50.7）m，無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。2.培養特性需氧或兼性厭氧；液體培養基：呈混濁生長；普通瓊脂平板和 SS 培養基：中等大小、半透明的光滑型菌落（宋內志賀菌可形成扁平、粗糙的菌落）。3.生化反應氧化酶試驗，動力，不產生賴氨酸脫羧酶；K

9、IA：K/A，H2S（-）； IMViC：-、+、-、 -。志賀菌屬的細菌分解葡萄糖產酸不產氣，不分解乳糖（宋內志賀菌可遲緩分解乳糖），吲哚試驗，H2S，MR 試驗陽性，VP 試驗，不產生賴氨酸脫羧酶，不能利用檸檬酸鹽，氧化酶試驗，動力。4.抗原結構只有O 抗原而無鞭毛抗原，個別菌型及新分離菌株有 K 抗原。O 抗原分群特異性抗原和型特異性抗原兩類。根據抗原構造可將志賀菌分為四個血清0血清型（包括亞型）。K 抗原存在時能阻斷 O 抗第4頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗原與相應抗血清的凝集作用。加熱 100、60 分鐘可消除 K 抗原對 O 抗原的阻斷作用，在一定條件下可產生 S-R 變異及耐藥性變

10、異。（二）臨床意義致病物質：侵襲力：菌毛粘附于腸粘膜上皮細胞，誘導細胞內吞。內毒素：破壞腸粘膜；腸壁通透性；腸壁植物神經腹痛，腹瀉，里急后重，粘液膿血便。外毒素（志賀毒素，ST）：腸毒素活性；細胞毒活性；神經毒性。所致疾病：細菌性痢疾，簡稱菌痢。1.急性菌痢。2.性菌痢。3.慢性菌痢。傳染源為和帶菌者，經糞口。（三）微生物檢驗1. 標本盡可能在發病早期及治療前2. 檢驗方法及鑒定新鮮糞便，選擇膿血便或便，必要時可用肛拭子。鑒別：第5頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗（四）防治原則人工主動免疫用于預防目前尚不理想。預防的主要措施是防止進食被污染的食品、飲料及水，及早發現及早積極治療攜帶者。治療細菌性痢

11、疾一般首選氟喹諾酮類抗生素。（五）臨床意義致病因素為侵襲力、內毒素及外毒素（志賀菌 A 群型和型產生志賀毒素，具有細胞毒、腸毒素、神經毒）。可引起人類細菌性痢疾，其中可分急性、慢性兩種，小兒易引起急性性痢疾。慢性菌痢可人-人，污染水和可引起暴發流行。四、沙門菌屬（一）生物學性狀1. 形態與染色G-，直桿菌，（0.71.5）m×（2.05.0）m，無芽胞，無莢膜，周鞭毛（除雞沙門菌），多數有菌毛。2. 培養特性營養要求不高；液體培養基：均勻混濁生長；SS 瓊脂和麥成黑色中心菌落。3.生化反應瓊脂培養基：約 24mm 的透明或半透明菌落，對膽鹽耐受。產 H2S 者在 SS 瓊脂上形不能發

12、酵乳糖（除亞利桑那菌），不產生靛基質，不分解尿素，甲基紅反應陽性，V-P 試驗數菌株產生 H2S，發酵葡萄糖產酸產氣（傷寒沙門菌產酸不產氣）。4.抗原結構。大多O 抗原：有 58 種，以數字依次標記。H 抗原：H 抗原是定型的依據。H 抗原有兩相，第一為共同抗原，用 1、2、3表示。表面抗原：已證實沙門菌屬有 Vi、M 和 5 抗原三種。5.變異性SR 變異HO 變異特異性抗原，用 a、b、c表示；第二相相位變異：具有雙相 H 抗原（第H 抗原的單相菌，稱相位變異。VW 變異：失去全部 Vi 抗原的變異。特異相，第非特異相）的沙門菌變成只有其中某一相第6頁動力乳糖靛基質賴氨酸酸、醋酸鹽、枸櫞酸

13、鹽志賀菌-+大腸埃希菌+-動力氧化酶試驗志賀菌-類志賀鄰單胞菌+動力硫化氫A-F O 診斷血清志賀菌-傷寒沙門菌+臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗（二）致病性致病因素：侵襲力、內毒素和腸毒素。所致疾病：1.腸熱癥 即傷寒與副傷寒病。由傷寒與副傷寒沙門菌所引起的慢性發熱癥狀。為法定傳染病之一。2.3. 慢性腸炎4. 敗血癥5.沙門菌的局部如頸部、腰部等。（三）微生物檢驗1.標本根據不同疾病采取不同的標本進行分離與培養。腸熱癥的第一、二周采血液，第二、三周采糞便與尿液。整個病程中骨髓分離細菌陽性率較高。與糞便。第7頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗2.檢查方法及鑒定最后鑒定：沙門菌血清學鑒定主要借助于沙門菌

14、O 抗原多價血清與 O、H、Vi 抗原的單價因子血清。（三）微生物檢驗2.檢查方法及鑒定血清學診斷肥達試驗用已知的傷寒沙門菌 O、H 抗原，副傷寒甲、乙 H 抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集試驗，以檢測患者血清中抗體的含量，來（四）防治原則機體是否受沙門菌而導致腸熱癥并判別沙門菌的種類。預防沙門菌屬細菌主要措施：加強飲食衛生，防止污染食品及水源經口苗。臨床治療：，攜帶者的積極治療，皮下注射死菌苗或口服減毒活菌可選擇的抗生素有氯霉素、氟喹諾酮類、氨芐西林、復方磺胺甲惡唑、三代頭孢等。五、變形桿菌屬、菌屬及菌屬這三個屬的細菌為腸道寄居的正常菌群，在一定條件下能引起各種致病菌。（一）生物學特性1. 形

15、態與染色G-，桿菌，兩端鈍圓，有明顯的多形性，呈球狀或絲狀；周身鞭毛（ 培養條件下不形成鞭毛），無芽胞，無莢膜。2. 培養特性需氧或兼性厭氧，營養要求不高，生長溫度 1043。，也是醫源染的重要條件菌屬的部分菌株在 30以上營養瓊脂和血瓊脂平板：普通變形桿菌和奇異變形桿菌的大多數菌株呈遷徙擴散生長現象。產黏變形桿菌具有產生狀薄膜層的能力及溶血性質。菌和菌無遷徙生長現象。含有膽鹽的培養基：菌落呈扁平、圓形、半透明。含有鉛離子的培養基：產硫化氫菌株菌落中心呈黑色。SS 培養基：與沙門菌、志賀菌相似的菌落特征。液體培養基：迅速生長，早期培養物呈混濁，有部分沉淀。3.生化反應 三屬菌共同特點是氧化酶屬

16、間鑒別：，苯丙氨酸脫氨酶陽性的革蘭桿菌。第8頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗變形桿菌屬的種鑒別：菌屬的種鑒別：（二）致病性1.變形桿菌屬普通變形桿菌和奇異變形桿菌引起、創傷、燒傷的。普通變形桿菌還可引起多種及；奇異變形桿菌還可引起嬰幼兒腸炎。產黏變形桿菌尚無引起人類的。外-斐（Weil-Felix）反應：普通變形桿菌 OX19、OX2、OXk 的菌體抗原與某些立克次體有共同抗原，是用以診斷某些立克次體病的依據。2.3.菌屬 本屬菌可引起燒傷、創傷與。菌屬 本屬細菌為醫源染的重要病原菌之一。（三）微生物檢驗1.標本尿液、膿汁、傷口物及嬰兒糞便等。2.檢驗方法及鑒定（1） 直接涂片（2） 分離培養：接

17、種于血瓊脂平板和麥瓊脂平板上。或伊紅亞甲藍（EMB）瓊脂平板；或 SS 瓊脂和麥或 EMB變形桿菌屬在血瓊脂上呈遷徙生長，在腸道菌選擇培養基上形成不發酵乳糖菌落，在 SS 瓊脂上有黑色中心的菌落。（3）鑒定六、菌屬菌屬包括 11 個種；菌、假結核其中菌和小腸結腸炎菌與人類致病有關。（一）菌（二）小腸結腸炎（三）假結核菌菌第9頁產堿菌斯氏菌雷氏菌脲酶-/+蕈糖-+-側金盞花醇+-+普通變形桿菌奇異變形桿菌產黏變形桿菌靛基質+-麥芽糖+-+鳥氨酸脫羧酶-+-變形桿菌屬菌屬菌屬遷徙生長+-硫化氫產生+-液化明膠+-脂酶+-鳥氨酸脫羧酶-+枸櫞酸鹽利用-+-臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗（一）俗稱菌桿菌，

18、是烈性傳染病的病原菌。是自然疫源性傳染病，通過直接接觸染疫動物或節肢動物叮咬而1.生物學特性（1）形態與染色：。G-，桿菌，短而粗，兩端鈍圓，兩極濃染，（1.02.0）m×（0.50.7）m。有莢膜，無鞭毛，無芽胞。（2）培養特性：需氧和兼性厭氧。最適生長溫度是 2830，培養基最適 pH 為 6.97.1。培養 1618h，用顯微鏡觀察可見一層形狀不一，淺灰色小菌落，這是落特征（鑒定意義）。菌培養初期的菌培養 2448h 后可形成直徑 0.10.2mm，圓形，中心突出，透明的淺灰色小菌落。液體培養基：形成絮狀沉淀和菌膜。底部絮狀沉淀堆積呈“鐘乳石”狀。（3）生化反應： KIA：K（

19、A）/A，H2S（-） MIU：-、-、-2.微生物檢驗標本：主要血液、痰和淋巴結穿刺液。檢驗方法及鑒定：注：菌為甲類病原菌，傳染性極強，故應嚴格遵守檢驗操作規程，要求有設施，防鼠、防蚤和嚴密的個人防護措施；用過的實驗器材及物品隨時處理。直接涂片檢查；分離培養；鑒定；最后鑒定（噬菌體裂解試驗；動物試驗；免疫學方法）。（二）小腸結腸炎1.生物學性狀（1）形態與染色菌菌體大小為（1.02.0）m×（0.51.0）m，25培養時形成周鞭毛，呈翻滾旋轉狀運動，37培養無動力，無芽胞，無莢膜的革蘭（2）培養特性球桿菌。需氧或兼性厭氧，440均能生長，最適生長溫度為 2028。血瓊脂平板上，形成

20、直徑為 12mm，圓形光滑，凸起的菌落。麥培養基上生長，形成不發酵乳糖的無色、透明或半透明、扁平、較小的菌落。SS 瓊脂板上生長不良。液體培養基中呈混濁生長，液體表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。（3）生化反應：葡萄糖和蔗糖產酸不產氣，絕大多數菌株不發酵乳糖，硫化氫，脲酶陽性，靛基質不定。VP 試驗25陽性，372.致病性，鳥氨酸脫羧酶陽性。（1）致病因素：侵襲力和腸毒素。（2）所致疾畜共患病，動物后多無癥狀，通過消化道引起人類腸道性疾病。小腸結腸炎、末端回腸炎、胃腸炎、闌尾炎和腸系膜淋巴結炎。除腸道外尚可發生敗血癥，結節性紅斑及關節炎等。3.微生物檢驗（1）標本：標本來自被檢者糞便、血液、尿液

21、、或臟器組織等。（2）檢驗方法及鑒定：1）分離培養：糞便標本可直接接種于麥、NyE（選擇性瓊脂）或 SS 瓊脂。第10頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗2）鑒定：30以下動力（+） 脲酶（+）菌（三）假結核嚙齒動物家畜和禽類致病，并通過污染淋巴結炎。導致人類。人類少見，偶見腸道及腸系膜菌體呈球形或短，兩端濃染。25培養有周鞭毛，有動力，37培養無動力。兼性厭氧，最適生長溫度 30，pH6.08.0。菌落：圓形，中心凸起，呈顆粒狀，灰黃色，半透明的菌落。 血瓊脂平板上不溶血，SS 瓊脂上不生長，能在含膽鹽培養基或麥培養基上生長。在液體培養基中呈均勻渾濁生長者為光滑型菌株，沉淀生長為粗糙型菌株。七、腸桿

22、菌科的其他菌屬在臨床標本中具有較高的分離率，大多屬于條件致病菌。枸櫞酸桿菌屬菌屬腸桿菌屬菌屬枸櫞酸桿菌屬包括地枸櫞酸桿菌、異型枸櫞酸桿菌和無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌三個種，屬正常菌群成員。1.生物學性狀（1） 形態與染色：G-，直桿狀，無莢膜，無芽胞，具有周鞭毛。（2） 培養特性：需氧或兼性厭氧，營養要求不高。在血液瓊脂上的菌落不溶血，在腸道選擇培養基上發酵乳糖，在液體培養基中呈混濁生長。（3） 生化反應：2.致病性本菌為條件致病菌，一些慢性疾病如白血病、自身免疫性疾病或醫療插管術后的泌、呼吸道中檢出，可引起敗血癥、腦膜炎、骨髓炎、中耳炎和心內膜炎等。3.微生物檢驗（1）標本：根據病情可取尿液、痰、

23、血液或膿汁等。（2）檢驗方法及鑒定1）屬的鑒定：2）種的鑒別：根據產生靛基質、硫化氫、丙二酸鹽與否鑒別。（二）菌屬本屬細菌共有 7 個種，引起的醫院日見增多，其中以菌最為多見。產酸（催娩）第11頁-半乳糖苷酶賴氨酸脫羧酶枸櫞酸鹽利用枸櫞酸桿菌屬+-+沙門菌屬-+菌屬-+-靛基質硫化氫丙二酸鹽地枸櫞酸桿菌-/+-異型枸櫞酸桿菌+-+無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌+-臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗伯菌次之。1.生物學特性（1）形態與染色：G-，卵圓形或球桿狀，排列，菌體外有明顯莢膜，無鞭毛，無芽胞。（2） 培養特性：需氧或兼性厭氧，營養要求不高。在血瓊脂上形成圓形，凸起，灰白色，不溶血的粘液性菌落。有時菌落呈現

24、呈長絲狀。在腸道菌選擇培養基中為乳糖發酵型菌落。在液體培養基中呈混濁生長，可形成菌膜與黏性沉淀物。（3） 生化反應：型，用接種環挑取時觸酶陽性、脲酶陽性、氧化酶、鳥氨酸脫羧酶。其中動力和鳥氨酸脫羧酶2.致病性是本菌的最大特點。菌亞種引起嬰兒腸炎、腦膜炎、腹膜炎、外傷、敗血癥和成人醫源性尿道。 臭鼻鼻硬節催娩菌引起臭鼻癥。菌引起鼻腔、咽喉和其他呼吸道的硬節病。菌可引起呼吸道和泌、創傷與敗血癥等。（三）腸桿菌屬1.生物學特性（1） 形態與染色：G-，短而粗的桿菌，有周鞭毛，部分菌株有莢膜，無芽胞。（2） 培養特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度為 30，營養要求不高。在普通瓊脂上形成大而濕潤的黏液狀菌落

25、；在血瓊脂板上不溶血；腸道菌選擇培養基上多數形成乳糖發酵菌落；在液體培養基中呈均勻混濁，表面有薄膜，有黏稠性沉淀物。（3） 生化反應：IMViC：-、-、+、+ 2.致病性陰溝、產氣、日等腸桿菌常導致條件致病，引起呼吸道、泌尿生殖道，亦可引起菌血癥，引起新生兒腦膜炎。（四）菌屬臨床標本中以粘質1.生物學特性（1）形態與染色：菌最常見。G-，細小桿菌，有周鞭毛，有些菌種有微莢膜，無芽胞。粘質菌是最小的細菌。（2）培養特性：兼性厭氧，營養要求不高，在普通營養瓊脂上生長良好，呈白色、紅色或粉紅色菌落。各種菌株可以產生兩種色素：靈菌紅素（非水溶性）和吡羧酸（水溶性）。（3）生化反應：本屬的關鍵生化反應是 DNA 酶陽性、葡萄糖酸鹽陽性。2.致病性粘質液化菌可導致呼吸道與泌。菌存在于植物和嚙齒類動物的消化道中，是人的條件致病菌，主要引起呼吸道。【例題】ESBLs 的主要產生菌株，同時也是人類泌尿系A.大腸埃希菌的主要病原菌是B.菌C.陰溝腸桿菌第12頁臨床醫學檢驗輔導微生物檢驗D.銅綠假單胞菌E.傷寒沙門菌【正確】A【