1、精選優質文檔-傾情為你奉上1.何謂超薄切片？由于電鏡電子束穿透能力的限制，必須把標本切成厚度小于0.1um以下的薄片才適用，這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50至70nm。 2.透射電鏡標本取材的基本要求有哪些？為了使細胞結構盡可能保持生前狀態，必須做到快、小、準、冷：(1)動作迅速，組織從活體取下后應在最短時間內 (爭取在1分鐘內) 投2.5%戊二醛固定液。(2)所取組織的體積要小，一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因為固定劑的滲透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內部將不能得到良好的固定。(3)機

2、械損傷要小，解剖器械應鋒利，操作宜輕，避免牽拉、挫傷與擠壓。(4)操作最好在低溫(04)下進行，以降低酶的活性，防止細胞自溶。(5)取材部位要準確。3.電鏡標本的固定與普通光鏡標本的固定有何不同？一）.常用固定劑有1、四氧化鋨:有強烈的電子染色作用，用它固定的樣品圖象反差較好。2戊二醛:優點是對糖原、糖蛋白、微管、內質網和細胞基質等有較好的固定作用，對組織和細胞的穿透力比四氧化鋨強，還能保存某些酶的活力，長時間的固定(幾周甚至12個月)不會使組織變脆。缺點是不能保存脂肪，沒有電子染色作用，對細胞膜的顯示較差。二）.組織塊固定常規采用戊二醛鋨酸雙重固定法。分預固定和后固定，中間用磷酸緩沖液漂洗。

3、固定完畢，用緩沖液漂洗20分鐘后進行脫水。電鏡光鏡固定劑，四氧化鋨、戊二醛。10%福爾馬林或4%甲醛固定方法戊二醛-鋨酸雙重固定法。蒸汽固定、灌注固定。目的除了一般光學標本固定目的外，還有電子染色作用。將組織結構盡量接近與它生前的狀態。標本1mm×1mm×mm厚度3-4mm左右4.電鏡標本包埋操作中應注意的事項有哪些？包埋操作中應注意以下幾點：(1)所有試劑要防潮，最好存放在干燥器中；(2)所用器皿應烘干；(3)配包埋劑時，每加入一種試劑要攪拌均勻；(4)包埋 時動作要輕巧，防止產生氣泡；(5)皮膚盡量不要接觸包埋劑，以免引起皮炎；(6)盛放過包埋劑的容器要及時用丙酮清洗干

4、凈。5.超薄切片觀察前進行半薄切片光學顯微鏡觀察的目的是什么？半薄切片進行光學顯微鏡觀察的目的：(1) 定位：通過光學顯微鏡觀察，確定所要觀察的范圍，然后保留要用電鏡觀察的部分，修去其余部分。(2)便于對同一組織的同一部位進行光學顯微鏡和電鏡的對比觀察。6.電鏡標本為什么要染色，染色方法及常用的染色劑分別是什么？未經染色的超薄切片，反差很弱。因此，要進行染色處理，以增強樣品的反差。一般是用重金屬鹽與組織細胞中某些成分結合或被組織吸附來達到染色的目的。重金屬的原子對電子束形成散射，從而提高圖象的反差。 常用的染色劑有醋酸鈾和檸檬酸鉛。染色方法有兩種：1組織塊染色： 2切片染色7.電子顯微鏡在病理

5、學中主要用于哪些方面？病理學中的應用 1.腎臟疾病(腎小球腎炎)及肌病中應用：輕微病變性腎小球腎炎、彌漫性膜性腎小球腎炎、膜性增生性腎小球腎炎 2 腫瘤中的應用：電鏡檢查能夠發揮最大診斷潛能的、電鏡檢查能提供多半診斷性信息的8.在哪些情況下電鏡檢查在病理診斷中能夠發揮最大診斷潛能電鏡檢查能夠發揮最大診斷潛能的：1）.通過發現所謂的神經分泌型致密核心顆粒，證明腫瘤的（神經）內分泌性質。2.）評估具有顆粒狀胞漿（嗜酸性細胞，顆粒細胞，內分泌細胞）的腫瘤細胞的性質。3）.確定不同類型腫瘤中的上皮分化（包括腺體和鱗狀分化）。4）.通過檢測黑色素小體證明腫瘤的黑色素細胞性質。5.通過檢測Birbeck顆

6、粒，證明病變屬于朗格罕細胞組織細胞增生癥范疇。6.通過發現大量的滑面內質網和具有管泡狀嵴的線粒體，證明腫瘤由來自腎上腺皮質和性腺的產生類固醇的細胞組成。7.通過檢測WeibelPalade小體，證明腫瘤的血管內皮細胞性質。8.通過檢測各個系統的細胞漿微絲，確認骨骼肌和平滑肌細胞。9.通過檢測中軸突和其他特征，確認神經鞘細胞。10.通過檢測特征性的有界膜的晶體，證明腺泡狀軟組織肉瘤。11.確認GIST家族腫瘤中平滑肌，神經或其他類型的分化。9.電鏡檢查的局限性有哪些？1.無論在哪一點取樣，用于研究的只是腫瘤的一小部分。2.缺少真正的特異性超微結構特征，因為專屬于一種細胞或組織類型的細胞器或其他結

7、構的數量很少。3.可能將混雜在腫瘤中的非腫瘤性成分誤認為腫瘤。應當承認，任何技術均有這種可能性，但在電鏡檢查時尤為突出，因為在一塊小的組織樣本中評估空間關系是困難的。4.無法鑒定同一細胞類型的反應性病變、良性腫瘤和惡性腫瘤之間。5.電鏡檢查費用昂貴。 應用電鏡檢查最好的時機是，病理醫師已在光鏡水平將腫瘤的鑒別診斷確定在2或3種腫瘤之間，只有當超微結構特征與光鏡特征緊密聯系時，診斷性的電鏡觀察才能提供完整的信息，正如光鏡表現與大體病理和臨床特征相結合時才具有完整的意義一樣。流式細胞術復習題1. 什么是流式細胞術？試述流式細胞術樣本制備的基本原則。流式細胞術是利用流式細胞儀進行的一種單細胞定量分析

8、和分選技術，是單克隆抗體及免疫細胞化學技術、激光和電子計算機科學等高度發展及綜合利用的高技術產物。它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數;與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點，成為當代最先進的細胞定量分析技術。流式細胞術樣本制備的基本原則。1.用于FCM的樣本是單細胞懸液 ;2.使各種體液和懸浮細胞樣本新鮮 ;3.針對不同的細胞樣本進行適當的洗滌，酶消化或EDTA處理；4.新鮮實體瘤組織可選用或聯用酶消化法、機械打散法和化學分散法來獲得足夠數量的單細胞懸液。 2.什么是流式細胞儀的基本結構? 1.傳感系統:包括樣本遞送系統、樣品池、檢測系統、電子傳感器

9、和激光源等;2.計算機系統 ;3.電路、光路和水路系統 :有電源、光學傳導和濾片、鞘液循環和回收部分等。 3.流式細胞術臨床常應用于哪些領域?1.外周血細胞的免疫表型測定和定量分析；2.某一特定細胞群的篩選和細胞收集；3.細胞耐藥基因的檢測；4.癌基因和抑癌基因的檢測；5.細胞凋亡的定量研究、細胞毒功能檢測；6.細胞內某些蛋白質和核酸的定量分析。 （一）在腫瘤學中的應用：協助腫瘤早期診斷 。FCM可精確定量DNA含量的改變，作為診斷癌前病變發展至癌變中的一個有價值的標志，能對癌前病變的性質及發展趨勢作出估價，有助于癌變的早期診斷 。（二）在細胞免疫中的作用：FCM通過熒光抗原抗體檢測技術對細胞

10、表面抗原分析，進行細胞分類和亞群分析。用FCM還可以監測腎移植后病人的腎排斥反應。（三）在血液病診斷和治療中的應用：FCM通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測分析，對各種血液病的診斷、預后判斷和治療起著舉足輕重的作用。(1) 白血病的診斷和治療；（2）造血干細胞移植技術。 4.什么是基因芯片? 目前基因芯片主要應用于哪些領域?1）基因芯片又稱DNA芯片(DNAcMp)，是指固著在固相載體上的高密度的DNA 微點陣。具體地說就是將大量靶基因或寡核苷酸片段有序地，高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龍膜等載體上，這就是基因芯片。 （2）目前基因芯片主要應用于哪些領域?（1）測 序：

11、基因芯片利用固定探針與樣品進行分子雜交產生的雜交圖譜而排列出待測樣品的序列。（2）基因表達水平的檢測：用基因芯片進行的表達水平檢測可自動、快速地檢測出成千上萬個基因的表達情況。（3）基因診斷：從正常人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出標準圖譜；從病人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出病變圖譜；通過比較、分析這兩種圖譜，就可以得出病變的DNA信息。（4）藥物篩選：利用基因芯片分析用藥前后機體的不同組織、器官基因表達的差異,從基因水平解釋藥物的作用機理。 5.什么是組織芯片? 組織芯片的特點 組織芯片(tissue chip)又稱組織微陣列 (tissue microa

12、rray)；是將數十個至數百個小的組織片整齊地排列在某一載體上而成的微縮組織切片；組織芯片的特點：體積小，信息量大，能高效、快速和低消耗地進行各種原位組織學的研究和觀察，并有較好的內對照及實驗條件的可比性。 免疫組化復習題1.試述免疫組化的基本原理及主要優點。應用免疫學及組織化學原理，對組織切片或細胞標本中某些化學成分進行原位定性、定位或定量研究，這種技術稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。主要優點：1.原位的化學 。2.呈色反應。3.形態、代謝、功能三結合。4.方法上一通百通。5.定性可靠、定位準確、定

13、量可靠（特異性強，敏感性高）。6.跨學科的廣泛應用。2.常用的免疫組化方法有哪些？按標記物質： 1.免疫熒光法； 2.放射免疫法；3.酶標法；4.免疫金銀法。按染色步驟： 直接法； 間接法按結合方式： 抗原-抗體結合（PAP法）親和連接（ABC法、SP法）3.簡述免疫組化在病理診斷和研究中的作用。1.確定細胞類型 ； 2.辨認細胞產物 ； 3.了解分化程度4.鑒定病變性質 5.發現微小病灶 ； 6.探討腫瘤起源或分化表型 ；7.確定腫瘤分期 8.指導治療和預后； 9.輔助疾病診斷和分類； 10.尋找感染病因4.免疫組化中組織固定的目的是什么？組織固定應注意哪些問題?為更好保持細胞和組織原有形態

14、結構，防止組織自溶，有必要對細胞和組織進行固定。固定的作用不僅是使細胞內蛋白質凝固,終止或抑制外源性和內源性酶活性,更重要的是最大限度地保存細胞和組織的形態結構和抗原性,使水溶性抗原轉變為非水溶性抗原,可有效防止組織自溶壞死、抗原丟失彌散。組織固定應注意哪些問題?1.標本離體后30分鐘內應進入固定液或貯存于液氮罐內或-70冰箱內低溫保存。2.空腔器官需依照規范方法剪開后固定。3.實質性器官須由器官背面，沿長軸每間隔2cm縱向平行剖開，切成數片再固定。4.微小組織和液體沉淀物，須先用拭紙或濾紙妥為包裹后固定。5.為什么要進行抗原修復？抗原修復方法有哪些？因為部分抗原在甲醛固定過程中發生蛋白之間的

15、交聯及醛基的封閉作用而遮蔽抗原決定簇，使免疫組化標記敏感性明顯降低。通過抗原修復，使得細胞內抗原決定簇重新暴露?？乖迯头椒ㄓ校夯瘜W方法：酶消化方法，常用有胰蛋白酶及胃蛋白酶； 物理方法：熱引導抗原決定簇修復，常用有單純加熱、微波處理和高壓加熱。6.免疫組化染色中一般應設置哪些對照？免疫組化染色中對照片設置非常重要，它是判斷染色是否成功的關鍵依據，而且也是檢測每一個抗體的質量標準，沒有對照的免疫組化結果是毫無意義的。包括陰性對照、陽性對照和自身對照。替代對照，回收實驗陰性對照。陰性對照 一抗由PBS或非免疫血清取代。陽性對照 用已知含有檢測抗原的切片作陽性對照。自身對照 如actin、CD34

16、在正常組織中血管壁肌層應為陽性，vimentin可以間質細胞對照， desmin以血管壁及肌束為對照，S-100蛋白以神經末梢為對照等，如應為陽性的組織是陽性，則免疫組化技術正確，如為陰性，則表明染色技術或試劑質量有問題。形態學技術與方法概論復習題1.分辨力與放大倍數。分辨力：區分兩點間最小距離的本領。放大倍數：用顯微鏡放大鏡放大物體至肉眼能觀察到的程度；在一定范圍內（不超過分辨力），放大倍數越大，肉眼觀察到的物體就越清楚。2.肉眼：肉眼能直接觀察到的事物的限度為0.1mm。3.暗視野顯微鏡：應用：觀察因反差或分辨力不足的微小顆粒，如梅毒螺旋體、細菌等微粒的運動?？煞直?.004um-0.2u

17、m微粒4.透射電子顯微鏡：電子束為“光源”,以電磁為透鏡，分辨力為0.1nm-02nm，放大倍數80100萬倍(0.1mm/0.1nm)，成像原理:電子散射不同組織結構對電子的散射能力有差別（用重金屬鹽-醋酸鈾、硝酸鉛染色可提高反差）。5.掃描電子顯微鏡：原理：利用從標本表面反射回來的二次電子成像特點，景深長，成像有立體感：可觀察物體表面凹凸不平的細節，標本制備簡單，分辨本領可達600nm。圖像分析復習題一.什么是圖像的定性分析和定量分析？圖像的定性分析是指用肉眼、顯微鏡、電鏡等觀察圖像結果后對圖像的結構特點和含義所作的描述、分析、推理和判斷。圖像的定量分析是指用量化的方法一數字的表達形式對圖

18、像中各種結構信息的定量描述及在此基礎上對圖像含義所做的定量分析、推理、判斷和概括。通常所說的圖像分析特別是計算機圖像分析一般指的都是圖像定量分析.二.圖像分析和圖像處理有什么不同？圖像分析和圖像處理是有密切聯系但又不同的兩個概念，圖像處理本質上是指對圖像的修飾，通過這種修飾去除圖像的缺陷或不足，將模糊圖像變為清晰圖像或以新的圖像形式來表達原圖像等。圖像分析包括圖像的定性分析和定量分析。三.什么是數值圖像？所謂數值圖像就是把圖像畫面劃分成由數字化的像素集所構成的圖像。是像素灰度值的二維數組。四.什么是形態測量學？是指定量測試和分析組織宏觀或微觀水平的二維和三維結構的原理、方法及其應用的一門科學。

19、它通過有關量化指標反映組織的結構特點。五.什么是幾何校正？什么是光密度校正？幾何校正是將一標準尺度輸入計算機圖像分析系統，計算機根據該尺度就可確定出該標準尺度輸入的條件下有關圖像的尺度單位，及圖像中每一像素所代表的實際尺寸，這一過程通常稱為標定。光密度校正也稱為光密度標定，它是將一套標準的光密度片通過顯微鏡和（或）攝像機輸入圖像分析系統并以此為標準對光密度參數進行校正。六.圖像分割有哪些方法？它們各有什么特點？圖像分割的方法有手工分割、灰度分割、和色彩分割。手工分割：通過手工方法，借助鼠標，通過勾描感興趣的特定結構來實現圖像分割，可與色彩分割相結合?；叶确指睿菏歉鶕O定的灰度閾值進行圖像分割

20、，常與手工分割聯合應用。色彩分割：就是通過指定特定的顏色，并將該顏色的圖像結構提取出來。這種分割方法對于特殊顏色結構的圖像具有良好的分割效果。七.什么是計算機圖像分析？計算機圖像分析指用計算機圖像分析系統對圖像結構的定量測試，以及在此基礎上對圖像的定量描述、理解、識別和分類。八.圖像定量分析的結構參數大致上可分為哪幾大類？大致上可分幾何參數、光密度參數、和特化參數三大類。九.什么是吸光度（光密度OD）和積分吸光度？吸光度（光密度OD）是指光線通過溶液或某一物質前的入射光強度I0與該光線通過溶液或物質后的透射光強度Ib比值的對數，即：OD=log(I0/Ib).）積分光密度（IOD）：又稱積分吸

21、光度，為所測范圍內各像素光密度值之和。十.在測試腫瘤細胞DI（DNA指數）時，最好用什么細胞作標準二倍體對照？與腫瘤細胞同一來源的細胞。十一.計算機圖像分析在腫瘤病理學上有哪些應用？主要是通過定量揭示腫瘤組織的形態結構特征來闡明腫瘤的發生、發展、診斷、分型、分類、浸潤、轉移、復發和預后等病理學問題。一）在腫瘤發生發展方面; 二）在病理診斷、分類、分型方面; 三)在腫瘤預后判斷方面; 四）在腫瘤轉移和復發方面; 五）在腫瘤免疫組化和分子病理學研究方面.十二.計算機圖像分析應用中應注意哪些問題？1.設計在先、測試在后，注意有關測試所需滿足的基本條件。2.注意計算機圖像分析測試并不等于體視學測試，同

22、時應注意計算機圖像分析測試中的誤差。 3.注意測試樣本的代表性。4.注意測試方法和計算公式的使用條件。5.注意現有參數的局限性，注意新參數的開發和利用。6.注意正確理解和解釋測試參數及結果的意義，注意參照空間的“陷阱”問題。7.注意多種參數的聯合應用，包括形態結構參數、DNA倍體分析參數、核仁組成區參數、免疫組化和分子病理學參數。8.注意在切片上對DNA進行定量存在的不足。9.對于計算機圖像定量診斷（也包括其他診斷方法），應注意應用診斷試驗的評價方法和有關評價指標，如診斷的靈敏度、特異度、漏診率、誤診率、陽性預測值、陰性預測值和準確度等進行科學的評價。9.在臨床病理學應用中應在有非?？煽俊⒊浞?/p>

23、和穩定的定量診斷和鑒別診斷結果依據的基礎上逐步過渡到臨床應用。10.注意將定量病理學與分子病理學結合，注意發展分子病理學。12.注意以科學的態度對待計算機圖像分析的測試結果，應充分看到計算機圖像分析的優點和局限性，不應僅僅站在圖像定量分析的角度片面夸大計算機圖像分析的作用，也不應單純站在定性的角度而否認或排斥計算機圖像分析的作用。注意定量數據與定性資料相結合，充分利用定性資料所包含的各種信息。原位雜交復習題一. 什么是原位雜交？原位雜交（In Situ Hybridization Histochemistry , ISH）是核酸分子雜交的一部分，是將組織化學與分子生物學技術相結合來檢測和定位核

24、酸的技術。它是用標記了的已知序列的核苷酸片段作為探針（probe），通過雜交直接在組織切片、細胞涂片或培養細胞爬片上檢測和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。二什么是探針？從化學和生物學意義上理解，探針是一種分子，它帶有供反應后檢測的合適標記物，并僅與特異靶分子反應。三.探針的種類及其優缺點比較？基因探針分類：根據標記方法不同可粗分為放射性探針和非放射性探針(包括熒光素和非熒光素標記:地高辛或生物素)兩大類。根據探針的核酸性質不同又可分為DNA探針，RNA探針，cDNA探針，cRNA探針及寡核苷酸探針等幾類，DNA探針還有單鏈和雙鏈之分。優缺點比較：1.DNA探針（包括cDNA探針）的主要優

25、點：這類探針多克隆在質粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡，制備方法簡便。DNA探針不易降解（相對RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。DNA探針的標記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移，隨機引物法，PCR標記法等，能用于同位素和非同位素標記。 2.RNA探針RNA探針是一類很有前途的核酸探針，由于RNA是單鏈分子，所以它與靶序列的雜交反應效率極高。早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針，這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的，標記效率往往不高，且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的，而不是用于檢測。RNA探針和cRNA探針具有DNA探針所不

26、能比擬的高雜交效率，但RNA探針也存在易于降解和標記方法復雜等缺點。 3.寡核酸探針由于鏈短，其序列復雜度低，分子量小，所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短，寡核苷酸探針可識別靶序列內1個堿基的變化，因為短探針中堿基的錯配能大幅度地降低雜交體的Tm值。一次可大量合成寡核苷酸探針（110mg），使得這種探針價格低廉，與克隆探針一樣，寡核苷酸探針能夠用酶學或化學方法修飾以進行非放射性標記物的標記。最常用的寡核苷酸探針有1840個堿基，目前的合成儀可有效地合成至少50個堿基的探針。 四.原位雜交組織化學技術的操作流程。 由于核酸探針的種類和標記物的不同，在具體應用的技術方法上也各有差異，但其基

27、本操作流程和應用原則大致相同。大致可分為：雜交前準備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等；雜交；雜交后處理：洗滌顯示（visualization）：包括放射性自顯影和非放射性標記的顯色。五組織預處理有哪些？它們的作用？ （一） 固定 1.保持細胞結構2.最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；3.使探針易于進入細胞或組織。（二）玻片和組織切片的處理 1玻片的處理.應用粘附劑預先涂抹在玻片上，干燥后待切片時應用，以保證在整個實驗過程中切片不致脫落。2.增強組織的通透性和核酸探針的穿透性，提高雜交信號，3.減低背景染色， 4防止RNA酶的污染 在整個雜交前

28、處理過程都需戴消毒手套。常規病理切片復習題1.常規石蠟切片及染色流程：新鮮標本固定洗滌脫水透明浸蠟包埋切片烤片脫蠟染色脫水透明封固. 1）、固定：將需要觀察的組織構造盡量接近于它生前的正常狀態。a.固定要及時，否則細胞內的酶分解蛋白質氨基酸滲出細胞或病原微生物繁殖而腐敗組織結構破壞b.原理：使蛋白質沉淀或凝固c.固定劑的量：不少于組織體積的4倍d.固定時間：根據溫度、組織大小、及各種固定劑的穿透力e.固定容器不能過小f.固定種類：化學固定劑、微波（1970年Mayers首次應用）g.固定劑兼有硬化作用 .常用固定劑： 固定劑分為簡單（單純）和混合固定液.甲醛：a又稱福爾馬林，其英文為（Form

29、eldehyde）。市售最高為濃度為40%，用于固定的為4%，按1：9配制，d.甲醛滲透力強，對組織收縮較少，能使組織硬化，增加韌性e.甲醛容易氧化變成甲酸，使溶液變成酸性；放置久后可產生白色沉淀（三聚甲醛）f.經甲醛固定的陳舊組織（以多血的臟器如脾、肝等）會產生黑色沉淀稱福爾馬林色素g.甲醛是一種還原劑乙醇：a.又稱酒精，為無色液體，能與水在任何比例下混合b.既有固定作用，也有脫水作用，用來固定的濃度在80%95%c.能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但沉淀的核蛋白能溶于水，故d.滲透力弱，對組織收縮大，能硬化組織特別在高濃度酒精中時間長能使組織變脆e.70%乙醇是組織的保存劑f.50%以上濃度

30、的乙醇可以溶解脂肪及類脂體 醋酸；a.有刺激味的無色液體，溫度低于15時結成冰狀，故又稱冰醋酸b.常用濃度不大于5%c.不能沉淀白蛋白、球蛋白，但能沉淀核蛋白d.穿透力強，但易使組織膨脹f.很少單獨用，都與其它固定劑配合使用 丙酮；a.無色，易燃，易揮發之液體b.能與水、乙醇等多種溶液混合c.滲透力強，組織收縮劇烈d.廣泛應用在組織化學中酶的固定，免疫組化冰凍切片的固定 中性甲醛液：此液固定組織效果較好 AF液;此液兼有脫水作用，Bouin液:滲透力強，對組織收縮小 2.染色（蘇木素-伊紅染色，簡稱HE染色） 染色方法: a.切片脫蠟至水，入蘇木素液5分鐘b.水洗，分化，藍化。 c.入伊紅液數

31、秒，水洗，脫水透明封固 d.結果：細胞核藍色，其他紅色四、特殊染色 一）、膠原纖維染色：1.Van Gieson染色（苦味酸酸性復紅法1889年，簡稱VG）操作方法：石蠟切片脫蠟至水洗；Weigert鐵蘇木素5min，水洗、分化、藍化、DW洗；加VG液15min，傾去染液，95%乙醇速洗；無水乙醇、二甲苯、中性樹膠封固。結果：膠原纖維紅色、肌纖維、胞質、紅細胞黃色、核藍褐色。注意：1.鐵蘇木素甲乙兩液若預先混合，易氧化沉淀而失去染色能力。2.若膠原纖維較少時，VG液中甲：乙=1：7。3.酸性復紅易被水洗去，苦味酸易被乙醇洗去，因此VG染色后易褪色2.、Masson三色法（根據Masson192

32、9）操作方法：石蠟切片脫蠟至水洗；Weigert鐵蘇本素5min，水洗，分化，藍化，DW洗；麗春紅酸性品紅液510min，DW洗；1%磷鉬酸5min；不水洗，加苯胺藍液5min，DW洗；1%冰醋酸約1min，DW洗；脫水、透明、封固。結果：膠原纖維藍色，胞質、肌纖維、紅細胞紅色、細胞核藍褐色。3.應用：1.來源于間胚葉的腫瘤，如纖維瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤等都產生一定的纖維，常規染色難以區別；2. 在慢性炎癥、機化和疤痕形成中，可隨病理過程的發展而出現膠原纖維。如慢性腎小球腎炎的腎小球纖維化后，膠原纖維（+）；胃十二指腸潰瘍愈復時，潰瘍底部出現膠原纖維構成的疤痕；肝硬化時膠原纖維的增生；3. 良、惡性高血壓病的區別，良性高血壓，小動脈玻璃樣變，膠原纖維（+），惡性高血壓病，小動脈管壁為纖維素樣壞死，膠原纖維（-），纖維素（+）。4.Masson和VG比較:在Masson和VG染色中都有酸性復紅，在Masson染色中，將肌纖維染成紅色，而在VG中，將膠原纖維染成紅色，為什么？ 1. 組織、細胞間是有間隙的，間隙大小決定滲透性，間隙小，組織致密，滲透性就小，反之則大。2. 大分子量染液只能進入結構疏松