1、人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立動物：c()裸小鼠，鼠齡 6 1 0 周，體重 l5 25 g ，雄性。飼養在無特殊致病菌、空氣潔凈的凈化工作臺內，室內恒溫、恒濕，定期消毒。籠具、墊料、飼料和飲水均經高壓蒸氣滅菌，并在無菌條件下適時更換。方法：收集培養的 823 細胞 (癌細胞在含 10% 小牛血清的 1640 培養液中，于 2 恒溫孵育箱中培養，常規傳代。 )在細胞培養至對數期時，用 1640 制成約 2 ×l0 7 個細胞懸液，取 02(4x106個 823細胞 / 只)注入裸小鼠頸部皮下或者背部皮下， 每組接種 3只鼠，當皮下移植瘤長至直徑為 l 3 左右時取出移腫瘤（大約在 10

2、d左右），及時放入含無血清培養液的平皿中， A 再在超凈工作臺內修剪腫瘤組織，去除脂肪，結締組織及壞死腫瘤組織，并用無血清培養液洗滌2 次，將瘤組織切成約 l ×l ×2 的小塊，加入適量的備用。以戊巴比妥經腹腔注射麻醉裸鼠，常規消毒背部肩胛區，（切開局部皮膚）用無菌套管針抽吸準備好的2 3 大小瘤塊，將其接種于裸鼠背部肩胛區皮下， 建立祼鼠皮下移植的人體胃癌祼鼠模型。作鼠間傳代(2 只代 )。移植瘤生長特性：胃癌細胞接種后的第三天即可見到裸鼠接種處皮下出現結節，直徑約1 5，質地較硬，在以后的幾天中，上述皮下結節沒有繼續增大，此階段為腫瘤細胞生長的潛伏期 (7-10d 左

3、右 )。隨后，裸鼠皮下的腫瘤結節開始緩慢生長 體積逐漸增大。大概 (25-30d) 傳代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生長情況與初代移植瘤相近。A 具體操作：1 一般要求需在無菌條件下進行。 可在接種罩、超凈工作臺或無菌室內操作。動物處死后，用新吉爾滅 (1 1000) 或碘酊、酒精消毒，對每個實體瘤應分別用滅菌的外科器械切取， 對腹水瘤則應分別用滅菌的空針抽吸。瘤塊污染常是接種失敗的主要原因， 應予注意在高溫季節操作時，應注意降溫，可在盛有瘤源的器皿周圍放置冰塊。常用腋下部位皮下作為實體瘤接種部位； 肌肉接種則用大腿肌肉；腹水型接種于腹腔。2 瘤塊的制備接種用的瘤塊應選擇接種后 7 10d 、腫瘤生長

4、旺盛且無潰破而動物健康較好的瘤源動物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，用碘酊及酒精消毒操作部位皮膚 (消毒面應盡可能大一些 )。切開皮膚、選擇生長良好無壞死或液化的瘤組織。在無菌平皿內，剪成 2 33 的小塊。平皿內放置少許消毒的生理鹽水緩沖液或其它營養液， 以保存瘤塊。平皿應放置在冰塊上。用無菌套管針抽吸或向套管針內塞進一小瘤塊，接種于同種受體動物右前肢腋窩皮下 (接種部位皮膚應先用碘酊、酒精消毒 )。接種操作時間應盡可能的縮短，從一個瘤塊所取的材料一般應在 30 內接種完。3 瘤細胞懸液的制備如每次需要接種的動物數量較多時，可用瘤細胞懸液接種。 具體方法為，在無菌操作下取瘤塊，除去壞死組織，將數個

5、瘤塊混合，剪成小塊，用玻璃組織勻漿器研磨，磨勻后放入無菌容器內，加生理鹽水適量稀釋成 1 3 1 4 的瘤細胞懸液。 容器置冰塊上， 用空針抽吸，每次抽吸前應將細胞混勻。每個動物接種0.2 。整個操作應在30 內完成。停止給予受試物之次日 (或停止給予受試物后 1 5d) 處死動物，先稱體重，后解剖皮下瘤塊，稱重。如對照組小白鼠腫瘤平均重量小于 1g 或 20% 鼠的瘤重小于 400 ，大白鼠腫瘤平均重量小于 2g ，表示腫瘤生長不良。在試驗期間給受試物組鼠死亡超過 20% ，或平均體重 (去瘤后 )下降 (自身對照 )超過 15% 者，表示受試物的毒性反應。應當減少劑量重新試驗。取平衡飼養

6、1 周的裸鼠若干只，于第 3d 將瘤細胞懸液按 0.5 只(含瘤細胞 7.5X10e 個)接種于裸鼠左側肋部皮下。823 單細胞懸液的制備：將 823 細胞，用一 1640 培養基培養基 (7.2 ，含 10% 胎牛血清，青霉素 100 ，鏈霉素 100) ，于 37 度， 502 ，飽和濕度的 C02 培養箱中培養， 23d 傳代一次。該細胞貼壁生長，呈多角形。實驗時取對數生長期細胞，用 0.25% 胰蛋白酶消化后機械吹打成單細胞懸液， 1500 離心，棄上清液，用適量配制成細胞濃度分別為 1.5x1) 懸液， 0.4% 臺盼藍染色法測細胞活力在 95% 以上。18 號的硬脊膜外穿刺針，把外面的套管針部分磨平磨尖（為什么要磨，看到實物你就明白了） ，里面的實體針不用磨。一次用 6 根左右就可以了，先用一個不銹鋼飯盒之類的東西作一個手術包，把所有相關的手術器械（剪刀鑷子什么的，包括接種針）都裝進去，蓋上蓋子， 8 層紗布包裹， 121 度，半個小時。操作的時候在超凈臺里面進行無菌操作，