1、標題 : 叢枝菌感染玉米之培養(yǎng)繁殖第5組10132007 章懷升10132021 林辰儒10132030 林昀澍10132032 陳品全10132021 楊佑彬10132043 蔡亞修2021/01/20實驗摘要大型樹林在移植時需斷根處理，處理後常發(fā)生根系生長 不良，進而導(dǎo)致樹木死亡。叢枝菌根菌主要擁有 促進植物根 系發(fā)展，並具有固磷效果，可以有效改善並增加樹林移植存 活率，這種菌類常見於松樹根系內(nèi)，但由於松樹根系生長較 緩慢且植株較昂貴，所以我們改以生長速度快，生命力強的 玉米進行叢枝菌根菌的寄生。實驗?zāi)康?. 利用玉米作為寄主，使菌感染玉米根部，進而觀察在不同 比例帶菌土的混和下，玉米的生

2、長情形，找出最適合的混和 比例2. 將6組樣本分別作染色切片，觀察每一樣本的感染情況前人研究背景資料近年來由於生物肥料使用推廣，在內(nèi)生菌根菌方面已實際應(yīng)用於洋香瓜及西瓜之育苗， 將內(nèi)生菌根菌與育苗之介質(zhì)或泥土混合置於穴盤或育苗袋上，有助於幼苗之成活率且瓜苗健 旺根部發(fā)育佳，可提早一星期採收，果實品質(zhì)顯著提高，同時磷肥之施用量亦較不接種菌根 菌之處理減少一半以上，生產(chǎn)本錢因而降低，進而增加收益。材料與器材樣本培養(yǎng)：1.帶菌之土壤及菌根五葉松?玉米種子？培養(yǎng)土？穴盤2培養(yǎng)基？手術(shù)刀？鑷子？無菌水？75%酒精？ 3N次氯酸鈉無菌培養(yǎng)切根染色：1N HCI? 2.5N KOH?染色劑100ml 甘油

3、+90 ml 水+10ml 1N HCI +0.1g 甲基藍?75%酒精？無菌水試管？燒杯？加熱器？溫度計？鑷子？手術(shù)刀？載玻片？顯微鏡？磁石？滴管菌株培養(yǎng)1無菌栽培:作為對照組，幫助我們了解玉米本身之結(jié)構(gòu)2先栽培後感染：先以培養(yǎng)土將玉米培養(yǎng)到根系開始發(fā)展約二三週的時間再將原本的土 依比例100%，50%，25%，0%換成帶菌之介質(zhì)，日後再觀察生長情況3直接種於帶菌介質(zhì)中：這是嘗試玉米假設(shè)直接在帶菌介質(zhì)中栽培是否可得到更好之結(jié)果，依比例100%，50%，25%種植結(jié)果：本身介質(zhì)不適合玉米生長，所以效果不佳。本次實驗取上方標 藍色記號的五組及松樹的菌根共六組來做感染觀測實驗方法無菌栽培 : 1.

4、先將玉米種子用清水沖泡過2. 用酒精擦拭種子外表3. 配置 3%次氯酸鈉4. 準備 2 瓶無菌水5. 將玉米種子放置錐形瓶並參加次氯酸鈉6. 搖至瓶內(nèi)充滿泡泡7. 進入無菌操作臺，將瓶內(nèi)的次氯酸鈉倒掉8. 並參加無菌水搖至種子外表無次氯酸鈉殘留 泡泡 9. 等待種子稍微晾乾後即可以接種切根染色 :1. 用清水將根洗淨2. 將根放入試管中，參加 2.5N KOH 淹過根頂部 ，以水浴法 90oC 煮1020分鐘 視材料根之軟硬而增減時間 3. 倒出 KOH ，並以清水沖洗三次4. 以 1N HCl ，酸化五分鐘5. 倒出HCI，參加染色劑，以水浴法90 °C煮510分鐘視材料根而增減時

5、間 6. 倒出染色劑，以 75%酒精將染劑洗去7. 切片，在顯微鏡下觀察可能導(dǎo)致實驗失敗 找不到菌 的原因1. 感染時間不夠 .菌尚未感染至寄主根部2. 所採之土壤本身就不帶有所要菌種3. 顯微鏡放大倍率缺乏，無法觀測到菌4. 樣本切片太厚，使顯微鏡觀測不到5. 栽培方式，環(huán)境 濕度、溫度、介質(zhì) 不利於菌種生長6. 染色過程錯誤，將該菌種消滅導(dǎo)致觀測時找不到7. 寄主選擇錯誤，菌根無法感染寄主8. 染色時間不夠或太久導(dǎo)致觀測不到菌種實驗記錄植株生長情形：1/4混合比例生長最 好，純原土因原土介質(zhì) 為沙質(zhì)及碎石組成，不 適合玉米生長所以生 長明顯較其他的樣本 緩慢植株根系比較：在根系發(fā)展的局部，

6、則 是由1/4的樣本發(fā)展最 好且有明顯的白色絲 狀菌絲，純原土的樣本 根系就較為緩慢，純培 養(yǎng)土的根系也發(fā)展得 不錯，但就找不到白色 菌絲純原土樣本切片染色可以發(fā)現(xiàn)少數(shù)的菌體1/2混合比例樣本切片染色可以發(fā)現(xiàn)少數(shù)的菌體1/4混合比例樣本切片染色菌體數(shù)量明顯較多無菌培養(yǎng)樣本切片染原根松樣本切片染純培養(yǎng)土樣本切片染色沒有菌體的發(fā)現(xiàn)沒有菌體的發(fā)現(xiàn)且因為 根系較纖細，染色的顏色 明顯較深由於解頗顯微鏡放大倍 率缺乏，原在光學(xué)顯微鏡 下觀測到的菌體在這邊 就不是很明顯，不過還是 可以勉強觀測到菌體結(jié)果與討論這次實驗因為切片的技術(shù)經(jīng)驗及顯微鏡的放大倍率缺乏，導(dǎo)致最後的樣品沒辦法清楚的 觀察到菌落的存在，不

7、過結(jié)果也證明了，使用叢枝菌在植株的根系發(fā)展上有顯著的幫助，再 來就是要選擇大量繁殖時適用的宿主，因為我們在進行取菌時會對飼主根系造成一定的傷 害，本次實驗所使用的玉米本身還是以糧食作物為主，在大量繁殖所要用的宿主選擇上最好 是有根系發(fā)展快速 ? 生命力強容易生長 ? 四季皆可栽培 等優(yōu)點。現(xiàn)在業(yè)界多還是採用這種 傳統(tǒng)式盆栽菌根菌種原繁殖技術(shù) ，不過已有最新的技術(shù) 氣霧式 叢枝內(nèi)生菌根種原生產(chǎn)技術(shù) 了，氣霧式菌種繁殖法，係在氣霧栽培箱內(nèi)，將營養(yǎng)液打成霧狀 後，經(jīng)接種的植株懸浮於箱內(nèi)，而直接產(chǎn)孢於空氣中，氣霧式栽培法培養(yǎng)的宿主，可在無土 的情況下大量生產(chǎn)菌根種源，且在老根採收後，新根又繼續(xù)生長，造成種源生產(chǎn)既快速又不 中斷的生產(chǎn)線，氣霧式栽培法所生產(chǎn)的菌根經(jīng)採收風乾後，質(zhì)量輕可以直接郵寄或混合其它 介質(zhì)，直接變?yōu)樯唐贰Ｓ伸稓忪F式培養(yǎng)法所生產(chǎn)的菌種遠較砂耕法來得乾淨且少污染