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文檔簡介

1、用2-Ct法分析real-time PCR數據-聯合應用LightCycler Data Analysis軟件和MS ExcelBy netmee，netmee引用請注明作者。1、打開存取的數據文件，點擊2、依次點擊，這是適合SYBR green為染料的選項。點擊step1：Baseline下的“change graph settings”小圖標。取消彈出的Customize Graph選項卡中的Logarithmis選項，點擊“OK”按鈕，退出選項卡。3、點擊下的“change graph settings”小圖標，取消彈出的Customize Graph選項卡中的Logarithmis選項

2、，點擊“OK”按鈕，退出選項卡。4、在選項卡中拖動紅色標記線，選取個條曲線都為直線上升部位。5、可以在選項卡中觀察是否需選取的是曲線直線上升部分。觀察綠線部分與S型曲線交叉的部分是否為直線。6、如果確為直線，則左側的“Crossing Point”值為所需要的Ct值。7、依次選取下圖菜單：將數據導出為文本文件。8、打開所保存的文本文件，如圖選取9、將數據粘貼入新建的excel文件，“Crossing Point”列即是Ct值，刪除“Standard”和“Calculated Concentration”列。10、將目的基因，本例中為“iNOS”的Ct值按標本對應剪切入beta-actin值右側一列。分別標記兩列數據為“beta-actin”和“iNOS”。11、設置所有Ct值的單元格格式12、數字選項卡，分類選擇為數值，點擊確定。13、將E列（目的基因Ct值右側一列）輸入公式“=D4-C4”，求出目的基因與同管beta-actin Ct值之差，即Ct。14、向下拉復制公式，將Ct列數值計算出。15、在Ct 列右側一列插入公式“=POWER(2,(0-E4)”，此即目的基因相對beta-actin的相對表達量，即2-Ct（2的-Ct次方）。16、在2-Ct列右側插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-Ct”列，復制公式填滿所有標本對應的2-Ct空格。17、至

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