1、    支氣管哮喘患者痰白細胞介素16的測定及其意義        【摘要】目的探討白細胞介素16（IL-16）在支氣管哮喘發病機制中的作用。方法收集12例過敏性哮喘患者、8例非過敏性哮喘患者、10例過敏性體質患者和10名正常對照者的痰液，以酶聯免疫吸附測定法測定痰中IL-16的含量，并以免疫染色技術檢測CD+4細胞和活化嗜酸細胞（EG2細胞）數。結果哮喘患者無論是過敏性還是非過敏性，痰液中IL-16水平與過敏體質但無哮喘的患者和正常組比較，差異有顯著性（P<0.01）

2、。急性發作期哮喘患者經治療后IL-16水平能達緩解期水平。此外，痰液中CD+4細胞和IL-16水平比較呈顯著正相關（r=0.76，P<0.01）,痰液中EG2細胞數與IL-16水平呈顯著正相關(r=0.61, P<0.01)。結論IL-16參與了哮喘的發病過程，其機制可能是通過募集CD+4 T細胞從而在CD+4 T細胞所介導的哮喘氣道嗜酸細胞炎癥反應中發揮作用。【關鍵詞】白細胞介素類淋巴細胞嗜酸細胞哮喘Detection and significance of interleukin-16 in sputa from patients with bronchial asthmaSH

3、I Huanzhong, LIU Guangnan, CHEN Yiqiang,et al.Department of Internal Medicine, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University,Nanning 520021【Abstract】ObjectiveTo explore the significance of in the terleukin-16 (IL-16) in pathogenesis of bronchial asthma. MethodsInduced sputum samples were obt

4、ained from 12 allergic asthmatics, 8 non-allergic asthmatics,10 non-asthma allergic and 10 non-asthma non-allergic normal subjects. ELISA was used to determine the concentrations of IL-16 in sputum,and CD+4 T cells and activated eosinophils (EG2 cells) in sputum were detected by immunostaining. Resu

5、ltsIL-16 levels in both allergic and non-allergic asthmatics were much higher than those in non-asthma allergic or non-asthma non-allergic normal subjects. Effective anti-asthma treatment led to a significant decrease in IL-16 levels in patients with acute asthma. It was also found that the percenta

6、ges of CD+4 and EG2 cells were all positively correlated to IL-16 levels. ConclusionsIL-16 is involved in the asthmatic process by recruiting CD+4 T cells and thus plays an important role in CD+4 cell-dependent eosinophilic inflammation in asthmatic airways.【Key words】InterleukinsLymphocytesEosinoph

7、ilsAsthma 已有報道指出, 支氣管哮喘患者氣道的活化CD+4 T淋巴細胞明顯增多,CD+4 T細胞通過分泌多種細胞因子在哮喘炎癥反應的發生發展過程中發揮重要作用1。但是CD+4 T細胞浸潤到哮喘氣道的機制至今尚未明了。以前的研究表明，CD4 T細胞的浸潤過程涉及到其本身與血管內皮細胞間的相互作用，而調節這種細胞間相互作用的是粘附分子和細胞因子。白細胞介素16（IL-16，又稱淋巴細胞趨化因子）對CD+4 T細胞具有特異性活性，它可以選擇性地引發CD+4 T細胞遷移，還可以作為生長因子促進CD4 T細胞繁殖2。基于這種認識，推測IL-16在CD+4T細胞所介導的哮喘氣道炎癥過程中可能具有

8、某種調節作用。我們的研究初步探討了哮喘患者痰液中IL-16水平的變化，并分析其與CD4 T細胞和活化嗜酸細胞（EG2細胞）之間的關系。旨在加深認識IL-16在支氣管哮喘發病機制中的作用。對象與方法一、研究對象1.哮喘組：無吸煙史的哮喘患者20例，年齡2276歲。其中男6例，女14例；本組患者中12例為過敏性哮喘（急性發作期7例，緩解期5例），余8例為非過敏性哮喘（急性發作期5例，緩解期3例），診斷均符合全國哮喘會議所制定的哮喘診斷標準。有無過敏性根據多種常見過敏原皮膚劃痕試驗結果或血清特異性IgE水平確定。全部受試者于試驗前1個月無免疫治療史，其中包括糖皮質激素用藥史。2.過敏組：無吸煙史的過

9、敏體質者10例，年齡1056歲。男女各5例。本組患者診斷過敏性鼻炎7例，過敏性皮炎3例，均無哮喘發作史。3.正常對照組：無吸煙史的健康對照者10名，年齡2056歲。其中男6名，女4名。均無特殊病史，體檢無異常發現，近2個月無感染史。二、痰液收集和處理緩解期哮喘者、過敏組和正常組受試者各收集痰液1次；急性發作期哮喘患者分別于治療前、治療（糖皮質激素氨茶堿2受體激動劑）1周和2周后各收集痰液1次。痰液的收集和處理方法見文獻3。所有患者霧化吸入3.5%的氯化鈉溶液，以涼開水漱口后鼓勵其將深部痰咳出，每2.5分鐘咳1次共20分鐘，或直至收集到5ml痰液為止。將所收集的痰液與同體積的二硫蘇糖醇溶液（1

10、mmol/L，溶于Hank緩沖鹽溶液）混勻后于37孵化15分鐘。離心后收集上清液凍存于-70，待測其中IL-16水平。痰細胞涂片根據文獻4的免疫染色方法，檢測CD+4 T細胞（抗CD+4單克隆抗體購自美國Dako公司）和EG2細胞（EG2單克隆抗體購自瑞典Pharmacia公司）所占有核細胞（除外鱗狀上皮細胞）總數的百分比。三、IL-16的測定IL-16的測定采用酶聯免疫吸附方法（ELISA），ELISA測定試劑盒購自美國Biosource公司。IL-16的測定根據試劑盒說明書進行操作。四、統計學處理數據以±表示，所用的統計方法包括方差分析、q檢驗、配伍組間方差分析、t檢驗以及直線相

11、關分析。結果各組痰IL-16水平比較見1。本組研究結果顯示，取自正常人的痰標本也可以檢測到一定量的IL-16(24.1±5.0) ng/L。哮喘組無論是過敏性(62.3±8.0) ng/L還是非過敏性哮喘患者(58.0±9.8) ng/L，痰液中IL-16水平比較(P<0.01)，過敏組(26.4±5.9) ng/L和正常對照組比較(P<0.05)；但過敏性和非過敏性哮喘者之間IL-16水平差異不明顯(P>0.05)；過敏組IL-16水平也并不高于正常組(P>0.05)。急性發作期患者治療前IL-16水平(69.3±8.

12、2) ng/L與緩解組(44.3±5.9) ng/L比較，(P<0.05)，發作期患者經治療1周后IL-16水平(45.9±5.9) ng/L明顯下降至緩解期水平(P>0.05，2)，但仍高于正常水平(P<0.01)。與過敏組比較*P<0.05，與正常組比較P<0.051哮喘患者及非哮喘患者白細胞介素16水平比較與正常對照組比較*P<0.01；與治療后1周、2周比較P<0.01；與緩解組比較P>0.052哮喘急性發作期患者治療前后IL-16水平變化所有受試者的痰中均可檢測到數量不等的CD+4細胞（表1）；EG2細胞僅見于哮喘組

13、，而過敏組及正常組則未發現EG2細胞。哮喘發作期患者痰CD+4細胞數均分別高于緩解期者、有過敏體質但無哮喘的患者以及正常對照組(P<0.05或0.01)。哮喘發作期患者EG2細胞亦明顯高于緩解期患者(P<0.05)。表1各組痰CD+4和EG2細胞結果比較(±)組別例數CD+4細胞(%)EG2細胞(%)哮喘組發作期12哮喘組緩解期8過敏組100正常組1003顯示20例哮喘患者痰CD+4和IL-6之間的相關關系(r=0.74，P<0.01)，可以看到，IL-16水平越高，浸潤到呼吸道的CD+4細胞也就越多，兩者呈明顯的正相關關系。4顯示EG2細胞數與IL-16水平呈顯著

14、正相關(r=0.61, P<0.01)，即痰IL-16水平越高，其EG2細胞數也越高。另外，本組哮喘患者中有8例于收集痰液當天測定了氣道反應性，結果以一秒鐘用力呼氣容積下降20%時所吸入的乙酰甲膽堿濃度(PC20-Mch)表示。相關分析表明，PC20-Mch越低的患者，其痰IL-16水平越高，兩者存在明顯的負相關關系(r=-0.57，P<0.05)。320例哮喘患者CD+4T細胞與白細胞介素16水平的相關關系420例哮喘患者EG2細胞與IL-16水平的相關關系討論近年強調支氣管哮喘是一種以活化的淋巴細胞和嗜酸細胞浸潤氣道為特征的炎癥以來，在尋求作為觀察此種炎癥的可溶性標志物方面做了

15、許多有益的工作。其中研究較為深入的是某些細胞因子、粘附分子和嗜酸細胞顆粒相關蛋白等5。但迄今尚未找到一種較為可靠的指標。在本組研究中，我們發現哮喘患者即使是處于臨床緩解期，其痰液中IL-16水平明顯高于有過敏體質但無哮喘的患者以及正常人。當哮喘急性發作時IL-16水平增高更為明顯，顯著高于緩解期水平，經治療哮喘癥狀緩解后IL-16水平隨即明顯下降。此外，過敏性和非過敏性哮喘患者之間的IL-16水平并無差異。可見僅僅處于過敏狀態，其痰液中IL-16水平并不升高。導致IL-16水平升高的是哮喘的發病過程。盡管體外試驗表明，外周血中CD+8和CD+4細胞是IL-16的重要來源6，但Laberge等7

16、的研究證實，哮喘患者支氣管粘膜組織中所表達的IL-16 mRNA及蛋白水平明顯增高，因而其來源主要是氣道上皮細胞。所以我們推測，哮喘患者痰中所增高的IL-16既可以是血循環中CD+8和CD+4細胞的IL-16所滲透進入氣道的部分，也可認為是氣道局部所分泌。事實上，當哮喘氣道局部給予抗原刺激，6小時后即可在其支氣管肺泡灌洗液中檢測到高水平的IL-168。本組研究結果還表明, 痰液中CD+4 T細胞EG2細胞與IL-16均具有顯著的正相關。既然IL-16可以選擇性地促進CD+4 T細胞遷移并促使其活化2，并且組織學研究也顯示，CD+4 T細胞總是聚集到IL-16蛋白表達呈強陽性的氣道上皮層7，9，

17、那么就有理由認為，高水平的IL-16出現于氣道后就趨化CD4細胞浸潤到哮喘患者的呼吸道，并進一步將其激活。CD+4細胞一旦被激活，便會釋放一系列對嗜酸細胞具有趨化作用的細胞因子,其中包括白細胞介素5(IL-5)。我們以前的研究表明，IL-5不但可以直接趨化嗜酸細胞浸潤到哮喘患者的呼吸道，還可以促使其活化，從而參與哮喘的發病過程3，4。而IL-16是否對嗜酸細胞浸潤氣道具有直接的趨化作用，尚待進一步研究證實。另一方面，當嗜酸細胞被募集到哮喘患者的呼吸道之后，和CD4 T細胞一樣，其本身又是IL-16的重要來源，因為嗜酸細胞具有產生IL-16功能10。顯然具有一種循環效應。當考察測定痰IL-16水

18、平是否對哮喘具有診斷價值時，我們注意到痰IL-16水平在臨床上與哮喘患者的氣道反應性的確存在著明顯的相關性，氣道反應性越高，IL-16水平也越高。同時我們也注意到，不同患者的IL-16水平變化幅度較大，哮喘患者和非哮喘患者之間IL-16水平多有重疊，以致難于確定一個“診斷界限” 。可見，IL-16水平的高低本身對哮喘而言，其診斷價值并不太大。然而，對于每例患者而言，監測其痰IL-16水平的動態變化，卻可以較好地反映出其氣道的炎癥反應過程。作者單位：530021 南寧，廣西醫科大學第一附屬醫院呼吸內科參考文獻1Erb KJ, Le Gros G. The role of Th2 type CD+

19、4 T cells and Th2 type CD+8 T cells in asthma. Immunol Cell Biol， 1996,74:206-208.2Cruikshank WW, Center DM, Nisar N, et al. Molecular and functional analysis of a lymphocyte chemoattractant factor: association of biological function with CD+4 expression. Proc Natl Acad Sci USA， 1994,91:5109-5113.3S

20、hi HZ,Xiao CQ,Zhong D, et al. Effect of inhaled interleukin-5 on airway hyperre activity and eosinophilia in asthmatics. Am J Respir Crit Care Med, 1998,157:204-209.4Shi HZ,Qin SM, Huang GW, et al. Infiltration of eosinophils into the asthmatic airways caused by interleukin-5.Am J Respir Cell Mol Bi

21、ol,1997,16:220-224.5OByrne PM, Hargreave FE. Noninvasive monitoring of airway inflammation. Am J Respir Crit Care Med, 1994,150:100-200.6Laberge S, Gruikshank WW, Hornfeld H,et al. Histamine-induced secretion of lymphocyte chemoattractant factor from CD+8 T cells is independent of transcription and translation: evidence for constitutive protein synthesis and storage.J Immunol, 1995,155:2902-2910.7Laberge S, Ernst P,Ghaffar O, et al. Increased expression of interleukin