1、喉粘膜上皮異型增生p53、H-ras過度表達與預后的關(guān)系    喉粘膜上皮異型增生p53、H-ras過度表達與預后的關(guān)系    癌癥1999年第18卷第1期    向明亮吳韻芳施達仁王紓宜穆美云    摘要目的：探討喉粘膜上皮異型增生p53、Hras過度表達與預后的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組化ABC法對63例喉粘膜上皮異型增生(經(jīng)隨訪其中40例惡變?yōu)榘?、56例喉鱗癌和7例喉正常組織進行檢測。結(jié)果：p53蛋白陽性率在喉粘膜上皮異型增生惡變組

2、為50.0，未惡變組為17.4，喉癌組為51.8，正常組織無表達。惡變組與未惡變組間，未惡變組與喉癌組間的p53蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義(分別為P0.05和P0.01)。Hras蛋白陽性率在喉正常組織、異型增生惡變組、未惡變組、喉癌組依次為0、52.5、52.2和73.2。惡變組和未惡變組間Hras表達差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論：p53蛋白的過度表達與喉粘膜上皮異型增生的預后有密切關(guān)系。Hras的表達與喉粘膜上皮異型增生的預后無關(guān)。    關(guān)鍵詞：蛋白，p53 免疫組化 喉粘膜上皮異型增生 預后    喉粘膜上皮異型增

3、生為喉癌前病變，其中一部分最終發(fā)展為喉癌。然預后不同的喉粘膜上皮異型增生，在病理形態(tài)學上并無明顯差異，若能客觀準確地預測其預后，將可明顯提高喉癌的早期診斷。    p53為一種抑癌基因，它的突變與許多腫瘤有關(guān)，在喉粘膜上皮異型增生和喉癌中亦可檢測到其蛋白產(chǎn)物1。Hras為常見的癌基因，與喉癌的發(fā)生可能有關(guān)2。國內(nèi)外迄今尚未見到有關(guān)p53、Hras與喉粘膜上皮異型增生預后關(guān)系的文獻。    本研究采用免疫組化法檢測p53、Hras蛋白在喉粘膜上皮異型增生和癌組織中的表達水平，旨在探討該二因子判斷喉粘膜上皮異型增生預后

4、的價值。    1材料和方法        全部組織選自我院病理科1986年1995年活檢或手術(shù)標本組織蠟塊。喉粘膜上皮異型增生的程度劃分標準參照文獻3，4所述，輕度：異型增生細胞局限于上皮層下1/3范圍；中度：異型增生細胞局限于上皮層下2/3范圍；重度：異型增生細胞已超過上皮層2/3范圍，接近全層。按隨訪資料將喉粘膜上皮異型增生63例分為惡變組和未惡變組。惡變組標本系隨訪4年內(nèi)發(fā)展為癌者，未惡變組標本為隨訪4年以上尚未惡變者。惡變組40例，含輕度粘膜上皮異型增生10例，中度

5、異型增生20例，重度異型增生10例。未惡變組23例，含輕度異型增生8例，中度異型增生10例，重度異型增生5例。    喉鱗癌56例，按1987年UICC標準，期15例，期13例，期12例，期16例。組織病理學分級：級20例，級29例，級7例。另取7例喉正常組織做對照。以上標本均經(jīng)10福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，病理確診。        采用免疫組化ABC法染色。行p53蛋白檢測的切片在上一抗前行微波處理。p53McAbDo7和CHarasp21McAbNccras001均為

6、丹麥DaKo公司產(chǎn)品，工作濃度分別為150和1100。生物素化馬抗鼠抗體及ABCKit為美國Vector公司產(chǎn)品。用已知陽性的喉鱗癌切片做陽性對照，TBS緩沖液替代一抗做空白對照。        在不知道臨床和病理資料的情況下，由兩位有經(jīng)驗的病理醫(yī)師分別觀察結(jié)果。陽性細胞數(shù)20個為()，占腫瘤細胞224為()，2550為()，50為()。    統(tǒng)計處理采用Epi Info Version5.0統(tǒng)計軟件，方法為卡方檢驗。    2結(jié)果&

7、#160;   喉粘膜上皮異型增生和鱗癌中，p53陽性細胞為：胞核染成棕黃色，胞漿及胞膜不著色(見圖1)。H-ras蛋白陽性細胞為：胞漿和胞膜染成棕黃色，胞核不著色(見圖2)。        圖1部分異型增生上皮細胞p53核陽性(ABC免疫組化法.×400)        圖2異型增生上皮胞漿Hras陽性染色(ABC免疫組化法.×100)    p

8、53、H-ras在喉粘膜上皮異型增生中的陽性表達見表1。惡變組與未惡變組之間的陽性差異見表2。    表1p53、Hras在喉粘膜上皮異型增生中的陽性表達            組別     例數(shù)     p53陽性     Hras陽性       

9、;     例數(shù)          例數(shù)                 惡變組     40     20     50.0     21 

10、;    52.5            未惡變組     23     4     17.4     12     52.2          &#

11、160; 2    表2惡變組與未惡變組的p53陽性比較            組別         例數(shù)     陽性例數(shù)     陽性率     2     P  &

12、#160;         輕度     惡變組     10     4     40.0         0.05            

13、0;    未惡變組     8     1     12.5                    中重度     惡變組     30  

14、0;  16     53.3     4.55     0.05                 未惡變組     15     3     20.0   &

15、#160;                喉癌中的p53陽性率為51.8(29/56)，與不典型增生未惡變組間的p53表達差異顯著(2=7.93，P0.01)，與惡變組間的表達差異無統(tǒng)計學意義。    喉癌中H-ras陽性率為73.2(41/56)，與惡變組和未惡變組間均存在統(tǒng)計學差異。正常組織中p53、H-ras染色陰性。(喉正常組織H-ras染色見圖3)。   &

16、#160;    圖3正常喉粘膜上皮Hras陰性染色(ABC免疫組化染色.×200)    p53、H-ras在喉粘膜上皮異型增生和癌中的表達均無協(xié)同現(xiàn)象，與異型增生程度無關(guān)。    3討論    p53蛋白由位于人染色體17P13.1上的p53基因所編碼，按其性質(zhì)和功能的不同有野生型和突變型之分。正常情況下為野生型，屬腫瘤抑制因子。突變型p53蛋白乃p53基因發(fā)生突變后編碼的產(chǎn)物，它失去野生型的功能，可能通過結(jié)合野生型p53

17、蛋白或獲得某種新的功能而具有致癌作用5。野生型p53蛋白量少，性質(zhì)不穩(wěn)定，半衰期僅620分鐘，通常情況下檢測不出。突變型p53蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，半衰期明顯延長，可采用免疫組化法檢測，故p53蛋白檢測陽性，即意味著p53基因已有突變。    為觀察p53蛋白過度表達在預后不同的喉粘膜上皮異型增生中有無不同，筆者將有完整隨訪資料的喉粘膜上皮異型增生按預后分為惡變組和未惡變組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：p53蛋白過度表達在喉粘膜上皮異型增生惡變組中為50.0，未惡變組中僅17.4，兩者間表達差異有統(tǒng)計學意義。惡變組的輕、中、重度異型增生，其p53蛋白陽性率分別為40、60、40，

18、較未惡變組輕、中、重度異型增生的12.5、20.0、20.0的陽性率明顯為高，兩組之間中重度異型增生的p53蛋白陽性率差異有統(tǒng)計學意義。提示：p53蛋白過度表達與喉粘膜上皮異型增生的預后有密切關(guān)系。p53蛋白檢測，可對喉粘膜上皮異型增生的發(fā)展趨勢及預后進行有價值的判斷，有利于臨床采取正確的處理措施。    本研究中，惡變組喉粘膜上皮異型增生的p53蛋白陽性表達與喉癌中的基本一致，這與Dolcetti1等的研究結(jié)果類似。提示：在分子生物學方面，此類喉粘膜上皮異型增生可能已具有了“癌的特性”。臨床應(yīng)予以高度重視，密切隨訪，以利喉癌的早期診斷。 &#

19、160;  癌基因H-ras的編碼產(chǎn)物為一種分子量為21000的蛋白質(zhì)。正常情況下，H-ras蛋白量極少，位于細胞質(zhì)膜內(nèi)面，參與控制細胞生長的細胞外信號的傳導。當H-ras基因發(fā)生擴增或點突變后，產(chǎn)生過多或異常的H-ras蛋白。該蛋白可使GTPase活性降低，致GTP降解成GDP的速率大大減慢，因而始終保持活化狀態(tài)，持續(xù)地激活靶分子，使細胞持續(xù)增殖，從而導致癌的形成6。    本研究結(jié)果，H-ras蛋白表達率在喉癌中為73.2，與國外文獻報道類似2。喉粘膜上皮異型增生惡變組和未惡變組的Hras蛋白表達分別為52.5和52.2，兩組之間

20、同等增生程度間的異型增生，其H-ras蛋白表達差異亦無統(tǒng)計學意義，結(jié)果提示：H-ras蛋白表達與喉粘膜上皮異型增生的預后無明顯關(guān)系。    Parada7等曾在實驗中觀察到，p53需ras協(xié)同作用方能使鼠胚胎成纖維細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。本研究顯示，在喉粘膜上皮異型增生和鱗癌中，p53與H-ras蛋白表達無協(xié)同現(xiàn)象。    作者單位：向明亮吳韻芳王紓宜穆美云（上海醫(yī)科大學眼耳鼻喉科醫(yī)院耳鼻喉科(上海，200031)）    施達仁（上海醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院病理科(上海，200032)）&#

21、160;   參考文獻    1Dolcetti R, Doglion C, Mastro R, et al. P53 ovexpression is an early event in the development of human squamous cell carcinoma of the larynx: Genetic and prognostic implication. Int J Cancer, 1992, 52:178    2Scambia G, Catozzi L

22、, Panici PB, et al. Expression of ras oncogene p21 protein in normal and neoplastic laryngeal tissues correlation with histopathological features and epidermal growth factor receptors. Br J Cancer, 1994, 69:995    3Elo JZ, Balatoni ZS, Varga L, et al. Inverstigation of premalignant lesions of larynx epithelium with histoautoradiog