1、藥用植物小蔓長春花的研究進展         09-08-06 09:00:00     編輯：studa20                          作者：孫宇宏，殷紅，高楊，張志強，崔迎【摘要】  小蔓長春

2、花作為一種引進的藥用植物品種，其有效成分在治療和改善腦血管疾病癥狀方面有良好的療效。近年來國內外通過不同的手段對其進行了研究和深層次的開發。本文通過查閱近年來對小蔓長春花研究的文獻，從其有效成分長春胺藥理作用的研究、通過Ri質粒改良植物材料、利用液膜分離技術提高植物材料的提取率、開發長春胺的衍生物及改良藥物劑型等方面進行了綜合性論述。 【關鍵詞】  小蔓長春花；長春胺；Ri質粒；液膜分離    Abstract  Vinca minor L as a introduction of a variety of medicinal plants,

3、can improve the symptoms of cerebral vascular disease. Its active ingredient Vincamine has become the focus of research. Through access to a recent study of literature about Vinca minor L, This article discusses the following aspects: the pharmacological effects about vincamine; use of Ri plasmid to

4、 improve plant material;application of emulsion liquid membrane to increase the rate of extraction of plant material;the development of the vincamine-derivatives.    Key words  Vinca minor L;vincamine；Ri plasmid；emulsion liquid membrane    小蔓長春花（Vinca minor L）為夾竹桃科

5、多年生草本植物，原產于歐洲東南部、中部和中亞地區。小蔓長春花喜溫暖氣候，平均氣溫在16 26 時最適宜植株生長。1953年，Schlittlery從該植物中分離得到抗血栓藥長春胺（vincamine）1。    隨著研究的深入，陸續從該植物內提取出阿樸長春胺（apovincamine）等結構類似生物堿。現在長春胺和長春胺衍生物脫水長春胺乙酯（ethyl apovincamine-22-oate）即長春西丁，已經廣泛地用于治療腦血管病變引起的各種癥狀如偏癱、失語癥和老年性腦退化等。    隨著物質生活水平的不斷提高，腦血管疾病和心血管疾

6、病成為威脅人類健康的兩大殺手，而長春胺類化合物所具有的獨特的藥理作用，成為緩解和治療腦血管疾病的一線藥物，對長春胺類藥物的需求日益增加，促使人們從多個角度對小蔓長春花的有效成分進行了研究。    1  小蔓長春花有效成分長春胺的藥理作用研究    長春胺是小蔓長春花中主要的活性物質，能透過血腦屏障，使病變區腦組織維持和恢復葡萄糖的氧化分解代謝，使乳酸的產生和二氧化碳的釋放恢復正常，從而擴張腦小血管，改善腦循環；對正常腦組織以及患者腦組織的正常腦區的血流無明顯影響，也不影響全身血液循環；此外還有輕微的鎮靜作用2。 &

7、#160;  最近的研究還表明，長春胺還有其他方面的藥理特性：如增加腦血流；促進大腦對葡萄糖和氧的攝取和利用，增加ATP，減少缺氧缺血時乳酸的生成；防止腦細胞中毒死亡；減輕腦缺氧的損害，保護神經元；增強多巴胺、5-羥色胺和去甲腎上腺素對神經的功能；防止腦、肝臟、肌肉組織和其他部位的缺血性損害；促進血管舒張，改善血液循環，但對外周的血流影響極小3。綜合看來，長春胺能夠有效地改善腦內微環境，在治療間歇性腦供血不足、腦血管痙攣、腦動脈內膜炎等疾病上具有較好的療效4。    由于長春胺具有擴張血管以及改善腦內血液循環的作用，因而可改善高血壓患者的神經系統癥狀。腦

8、動脈粥樣硬化導致的中風和精神狀態低下代表了神經和精神疾病中的一大類疾病。中風病例中許多是由于腦血管栓塞所引起的。栓塞造成血流障礙，進而引起腦代謝障礙，甚至產生局部腦組織壞死，因此迫切需要增加腦血流量，而長春胺正適于這方面的要求。    長春胺降壓效果舒緩。臨床應用于高血壓患者的治療,每天口服520 mg，共38個月,無任何不良反應，甚至一次劑量達100 mg也無不良反應。其特點為降壓作用并不突出，而主觀感覺明顯改善。33份不同地區臨床試用報告的綜合分析表明,75 %的腦血管疾病和腦功能受損患者在使用長春胺后癥狀獲得改善，沒有任何惡化的情況發生，也無明顯的不良反應。

9、在1 481例中只有28例反映有胃腸不適。據此認為,可以長時間的每天口服長春胺60 mg5。    2  利用生物技術手段提高小蔓長春花中長春胺的含量    根瘤菌屬中的農桿菌（Agrobacterium）與植物的關系研究已久。尤其是含有Ri質粒的發根農桿菌（A.rhizogenes），它在感染植物后，在植物的傷口部位誘發產生毛狀根（hairy root）。毛狀根在無激素的培養基上，可迅速繁殖，可以利用毛狀根的這種特點生產植物的次級代謝物，提高植物有效成分的生產效率。如黃遵錫等6利用該技術提高紅豆杉中紫杉醇的產量，劉偉華等7

10、利用發根農桿菌轉化龍膽再生植株提高龍膽苦苷含量。    在發根農桿菌中一般存在三種質粒：pArA4a、pArA4b、pArA4c。黃瓜堿型質粒pRi17248是鐮田在日本千葉縣“密倫”（哈密瓜的一個類型）毛狀根中發現的。該質粒只有單一的T-DNA，具有合成黃瓜堿合成酶基因。該類型質粒致病性弱，感染時可用生長激素處理獲得毛狀根，然后在無激素的MS培養基上培養，毛狀根可以迅速的增殖。    Tanaka等9采用二元載體法將質粒pBI121（具有NPT基因和GUS基因）通過電穿孔引入發根農桿菌DC-AR2（含有黃瓜堿型質粒pRi1724）中

11、，將在LB培養基培養36 h的菌液與處理得到的小蔓長春花葉肉細胞原生質體在含1%瓊脂的培養基上,光照培養3 d后，轉入含有500 g/ml青霉素鈉和500 g/ml 萬古霉素的MS培養基培養，利用抗生素除去毛狀根中的發根農桿菌，將無菌的新生毛狀根在低鹽White培養基中25 下暗培養，用含有50 g/ml卡那霉素的MS培養基篩選有pBI121轉錄活性的毛狀根，利用冠癭堿檢測（Opine assay）證明該毛狀根是Ri T-DNA轉化根。    他們還發現，Ri質粒感染的小蔓長春花產生的毛狀根具有pBI121所攜帶外源基因的活性，在MS培養基上具有高增殖率。毛狀根分

12、化后，顯示出與普通小蔓長春花不同的表型特征，如具有較高的側出分枝率，不定芽的伸長百分率是普通小蔓長春花的2.5倍，頂端優勢較普通植株有所減弱9，而且Tanaka等10還發現由毛狀根離體培養分化得到的植株葉部長春胺含量是普通植株的兩倍。這些都提示利用pRi質粒感染小蔓長春花所得到的毛狀根，進行分化后得到的離體植株是很好的獲得長春胺的植物材料，這種辦法也是便捷、高效的。    3  利用現代分離技術提高小蔓長春花植物材料的提取效率    傳統方法從植物材料中提取生物堿，要采取酸化后溶出，堿化后有機萃取等多個步驟，在多個容器中進行

13、，有效成分的耗損比較大，而且酸化后和堿化后的廢液造成環境污染。    液膜分離技術是用液膜模擬生物膜的結構,通常由膜溶劑、表面活性劑和流動載體組成。它利用選擇透過性原理,以膜兩側的溶質化學濃度差為傳質動力,使料液中待分離溶質在膜內側富集濃縮,分離待分離物質。    按構型和操作方式的不同,液膜主要分為乳化液膜（emulsion liquid membrane, ELM） 和支撐液膜（supported liquid membrane, SLM）11 。其中乳化液膜分離技術是將含有表面活性劑和膜溶劑的油相和水相（內水相）置于容器中，在高

14、速攪拌下制成油包水型乳狀液，再將此乳狀液分散到另一種水溶液（第三相）中。在乳珠與第三相間有巨大的接觸面積，同時每個乳珠內部又包含無數個直徑非常小的內水相微滴。這樣的分散體系有很快的傳質速度。另外，由于內水相的作用，它的分離富集作用不受平衡的影響，打破了萃取過程的平衡。利用乳化液膜提取生物堿的研究，進行的不多，以前只有Yu12和Wang等13學者利用該技術回收煙葉提取物中尼古丁的文獻報道。    小蔓長春花的提取物中，長春胺以游離態（B）和質子化態（BH+）存在，普通提取法利用游離態生物堿易溶于有機溶劑難溶于水的方法，在堿性環境中進行萃取提取。當在pH為4的醋酸鹽緩沖液中，長春胺會被質子化以BH+存在，但當在有機環境中，醋酸分子會以非解離狀態（H+A-）溶解于有機相中，長春胺分子與非解離的醋酸分子形成一種離子締合物（BH+A-），這種離子締合物同樣也易溶于有機相中。    利用長春胺的這種特性，Boyadzhiev等14設計了由含有小蔓長春花粗提取物的pH 4醋酸鹽緩沖液為第三相