1、昌邑泰森活禽化驗室操作規程（SOP）化驗室管理規定1. 遵守化驗室的各項規章制度，認真完成檢測任務，對自己承擔項目的檢測結果負責；2. 嚴格按照本操作規程進行各項檢測工作，確保檢測數據的準確可靠；3. 填寫檢測原始記錄，任務完成后及時進行數據處理，并進行校對和審核；4. 及時報告實驗結果，并提出合理建議；5. 熟悉所用檢測儀器設備的性能，嚴格執行操作規程，使用前后認真檢查，并填寫儀器設備使用情況記錄表，負責所用儀器設備的保管、保養及自校工作，上報儀器設備的檢定、維修計劃；6. 化驗人員進入化驗室必須更換工作服，并在化驗室不允許干與工作無關的事情，如吃東西、高聲喧嘩等；7. 每天下午下班前打掃化

2、驗室衛生，每天完成實驗后化驗室用紫外線燈照射三十分鐘。8. 密切配合領導安排的各項工作；9. 負責化驗室的內務、衛生和安全；化驗室主任的崗位職責與權限1職責與權限1.1 負責化驗室日常檢測工作的管理與協調；1.2 負責監督檢查化驗員的日常檢測工作；1.3 負責培訓考核化驗員的日常工作與業務水平；1.4 負責發現和消除檢測工作中存在的安全隱患；1.5 負責標準菌株、化學、生物制劑的管理；1.6 組織完成上級及場區領導安排的各項臨時性工作；1.7 負責就檢測項目的試驗、檢測。2. 知識與能力2.1具備豐富的家禽微生物檢驗專業知識及實踐經驗；2.2 具有一定的工作能力；2.3具有基本的管理及協調能力

3、。化驗員的崗位職責與權限1. 崗位職責與權限1.1負責按照標準檢測程序進行樣品的制備與檢測；1.2負責孵化場、養禽場環境、器具、設備、水樣、空氣等的微生物檢測；1.3負責對養禽場血樣、種蛋的檢測；1.4及時、準確、詳細的做好原始記錄并出具、傳遞化驗結果；1.5負責完成化驗室的各項臨時性工作；1.6配合協調場區的其他部門工作。2. 知識與能力2.1具備豐富的檢驗專業知識；2.2具有一定的工作能力；2.3具有對檢測項目進行檢測、分析、判斷的能力。實驗室玻璃器皿的洗滌程序1. 目的：確保實驗室所用玻璃器皿的潔凈，規范玻璃儀器的洗滌及存放。.2. 范圍：實驗室內使用的玻璃儀器。3. 程序：3.1 玻璃

4、儀器的洗滌3.1.1 常用洗滌液的配制和使用方法3.1.1.1 鉻酸鉀-濃硫酸溶液（100g/L）（洗液）：稱取化學純重鉻酸鉀100g 于燒杯中，加入100ml 水，微加熱，使其溶解。把燒杯放于水盆中冷卻后，慢慢加入化學純硫酸，邊加邊用玻璃棒攪動，防止硫酸濺出，開始有沉淀析出，硫酸加到一定量沉淀可溶解，加硫酸至溶液總體積為1000ml。該洗液是強氧化劑，但氧化作用比較慢，直接接觸器皿數分鐘至數小時才有作用，取出后要用自來水充分沖洗7 次10 次，最后用純水淋洗23 次。如果使用過久或受到強烈的還原性物質污染，以致整個液體變為綠色時，則其中絕大部分的高價鉻鹽已被還原成為低價的硫酸鉻，此時洗滌液不

5、再具有氧化力，不宜再用。應集中進行處理，以回收鉻。3.1.1.2 肥皂洗滌液、堿洗滌液、合成洗滌劑洗滌液：配制一定濃度，主要用于油脂和有機物的洗滌。3.1.1.3 氫氧化鉀-乙醇洗滌液（100g/L）：取100g 氫氧化鉀，用50ml 水溶解后，加工業乙醇至1L，它適用洗滌油垢、樹脂等。3.1.1.4 鹽酸乙醇溶液：1份鹽酸和2份乙醇的混合物，用以洗滌有機試劑染色的器皿。3.1.2玻璃儀器的洗滌方法3.1.2.1 常規洗滌法：對于一般的的玻璃儀器，應先用自來水沖洗12 遍除塵后，如用強酸性氧化劑洗滌時，應將水瀝干，以免過多地耗費洗液的氧化力。若用毛刷蘸取熱肥皂液（洗滌劑或去污粉等）仔細刷凈內外

6、表面，尤其應注意容器磨砂部分。然后邊用水沖邊刷洗至看不出肥皂液時，用自來水沖洗35 次，再用蒸餾水或去離子水充分沖洗23 次。洗凈的清潔玻璃儀器上應不掛水珠。洗滌時應按少量多次的原則用水沖洗，每次充分振蕩后傾倒干凈。凡能用刷子刷洗的玻璃儀器，都應盡量用刷子蘸肥皂液進行洗刷，但不能用硬質刷子猛力擦洗容器內壁，因易使容器內壁毛糙，易吸附離子或其它雜質，影響測定結果或者難以清洗而造成污染。3.1.2.2 不便刷洗的的玻璃儀器的洗滌方法：可根據污垢的性質選擇不同的洗滌液進行浸泡或共煮，再按常法用水沖凈。3.2 玻璃儀器的干燥：將洗凈的玻璃儀器倒置在滴水架上或專用柜內控水晾干。如急用時，可置于11012

7、0的清潔烘箱內烘烤1 小時左右。4玻璃儀器的保存：4.1 將干凈的玻璃儀器倒置于專用柜內，關閉柜門防止落塵。4.2 凡有配套塞、蓋的玻璃儀器都必須保持原裝配套，不得拆散使用和存放。實驗室常用無菌器皿的滅菌和管理1. 目的：提供無菌器皿的滅菌和管理方法。2滅菌方法：2.1玻璃器皿的包裝和滅菌2.1.1玻璃器皿的包裝磨口瓶：將清洗干凈的磨口瓶瓶蓋倒置于磨口瓶上，用一層報紙包裝好再用線繩包扎。培養皿：將清洗干凈直徑為90mm的培養皿10個一包（直徑為75mm的培養皿12個一包）用一層報紙包裝或置于平皿專用滅菌桶內。吸管：將清洗干凈的吸管用報紙單個纏繞包裝。2.1.2將包裝好的玻璃器皿做好標識置于12

8、1高壓蒸汽滅菌15分鐘。2.2 塑料制品的包裝和滅菌將清洗干凈的塑料制品裝入適當的容器中，121高壓蒸汽滅菌15分鐘。2.3橡膠制品的包裝和滅菌將清洗干凈的橡膠制品裝入適當的容器中，121高壓蒸汽滅菌15分鐘。2.4解剖器械及其他金屬、陶瓷類用品的包裝和滅菌 將解剖器械及其他金屬、陶瓷類用品分別包扎或置入適當的容器中，121高壓蒸汽滅菌15分鐘。3. 管理方法：將包裝好未滅菌或滅菌的玻璃器皿分別放入指定、有標識的區域，避免出現混拿、錯拿現象。實驗室培養基進貨檢驗1. 目的：提供培養基進貨檢驗的標準操作方法。2. 相關材料：待確認培養基、標準菌種（特定）、培養箱、已確認合格的培養基3. 操作規程

9、3.1每次進貨后，先將干粉培養基放入待確認區域內，并作相應標識，嚴禁使用。3.2對于初次進貨的干粉培養基，可直接用相關的菌種進行檢測。3.3已確認合格并使用過的干粉培養基，按其使用說明配制后進行高壓滅菌，待培養基冷卻到50時，傾注平板待用。3.4把該培養基所檢測的目標菌，按無菌操作轉接到事先配制好的培養基上，根據該種菌株在該培養基的培養特性進行培養（一般37，2448h），觀察標準菌種在培養基上生長是否良好，菌形、色澤、質地、大小是否符合該菌特征、顏色變化是否明顯、生化試管培養基是否有產氣、產酸等狀態。3.5經檢測確認目標菌種特征能夠合格后，再次按3.4的方式用新進培養基與已確認合格并使用過的

10、干粉培養基作平行對比實驗，觀察其生長變化是否一致或相似。3.6確認合格后，將該種培養基轉入待用區域，并作相應的標識。不合格的培養基，有質量負責人將信息反饋采購部門等候處理。實驗室菌種的處理和保存1. 提供菌種的處理和保存標準操作方法。2. 相關材料：培養基、菌種、接種環、超凈工作臺、36±1培養箱、4冰箱3. 操作規程3.1菌種的處理3.1.1 無菌操作打開安甄瓶，用接種環挑取一環凍干菌，放入裝有滅菌肉湯試管中，做好標示，置于36±1培養24±2h。3.1.2 將培養后的肉湯培養物接種于裝有滅菌肉湯試管中，進行二代培養，置于36±1培養2 4±

11、2h。3.1.3 依照3.1.2的模式對菌種進行3代、4代的轉接培養.3.2 短期保存3.2.1 將處理好的菌種肉湯培養物接種于瓊脂斜面培養基上，做好標示，記清菌種名稱及接種時間，在36±1培養24±2h。3.2.2 將斜面培養物用包裝紙包好后，置于4冰箱內保存。3.2.3 每三個月對保存菌種進行復壯一次，同時檢查菌種特性。3.2.4 菌種的復壯于特性檢查3.2.4.1無菌操作將斜面培養物轉接至已滅菌的裝有肉湯的試管中，做好標示，置于36±1培養24±2h。3.2.4.2將肉湯培養物轉接至已事先備好的瓊脂斜面上，每支肉湯培養物接種三管斜面，做好標示，然后

12、置于36±1培養24±2h。3.2.4.3取一管斜面培養物，根據該培養物的類別采用與培養物相對應的檢測程序，對培養物的特性進行檢查并做好相應記錄。3.3 長期保存3.3.1 將處理好的菌種肉湯培養物接種于半固體培養基上，做好標示，記清菌種名稱及接種時間，在36±1培養24±2h。3.3.2將半固體培養物用包裝紙包好后，置于4冰箱內保存。3.3.3每一年對保存菌種進行復壯一次，同時檢查菌種特性，檢查方法同3.2.4.3進行。3.4對存放菌種的冰箱每周進行檢查一次，并將檢查情況做好記錄細菌抹片、制備及染色1目的：觀察細菌形態結構及鑒別的操作方法2相關材料：玻

13、片、5石炭酸液、龍膽紫粉末、碘片、碘化鉀、95酒精、堿性復紅粉末、美蘭、0.01%氫氧化鉀溶液、瑞氏染色劑粉、白甘油、中性甲醇、姬姆薩氏染色劑粉末、甲醇、顯微鏡、試管架、酒精燈、接種環、藥匙、稱量紙、電子稱、待試菌、滅菌蒸餾水、吸水紙、香柏油3細菌抹片的制備3.1 玻片準備：載玻片應清晰透明，潔凈而無油漬，滴上水后，能均勻展開，附著性好。如有殘余油跡，可按下列方法處理：3.1.1 滴上95酒精23滴，用潔凈紗布揩擦，然后在酒精燈上輕輕脫過幾次。3.1.2若上述方法未能去除油漬可再滴12滴冰醋酸，用紗布擦凈，再在酒精燈上輕輕通過。3.2抹片：所用材料不同，抹片方法亦有差異3.2.1液體材料（如液

14、體培養物、血液、滲出液、乳液）可直接用滅菌接種環取一環材料與玻片的中央均勻涂成適當大小的薄層。3.2.2不是液體材料（如菌落、膿、糞便等）則應先用滅菌接種環取少量生理鹽水或蒸餾水，置與玻片中央，然后再用滅菌接種環取少量材料，在液滴中混合，均勻涂布成適當大小的薄層。3.2 .3 組織臟器材料，先用鑷子夾持局部，然后以滅菌或潔凈剪刀取一小塊，夾出后將其新鮮切面在玻片上壓印或涂成一薄片。3.2.4 如有多個樣品同時須要制成抹片，只要染色方法相同，亦可以在同一張玻片上有序的排好，做多點涂抹，或者先用蠟筆在玻片上劃分成若干小方格，每方格涂抹一種樣品，需要保留的樣本片，應貼好標簽，注明菌名、材料、染色方法

15、和制片日期等。3.2.5 上述涂片應讓其自然干燥。3.2.6 固定：有兩類固定方法 3.2.6.1火焰固定：將干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精燈上來回通過數次，略作加熱（但不能太熱，以不燙手背為度）進行固定。3.2.6.2 化學固定：血液、組織、臟器等抹片要作吉姆薩染色時，不用火焰固定，而應用甲醇固定，可將已干燥的抹片侵入甲醇中23分鐘，取出晾干：或在玻片上滴加數滴甲醇使其作用23分鐘后，自然揮發干燥，抹片如作瑞氏染色，則不必先作固定。染料中含有甲醇，可以達到固定的目的。4常用的染色方法及 染色液的配制與操作： 4.1 美蘭染色液：美蘭0.3g、95%乙醇30ml、0.01%氫氧化鉀

16、溶液100ml.將美蘭溶解與乙醇中，然后與氫氧化鉀溶液混合。4.1.4 染色法：抹片在火焰固定后，加染液于玻片上，染色35分鐘。水洗、吸干、鏡檢。4.2 瑞氏染色液：瑞氏染色劑粉0.1g、白甘油1.0ml、中性甲醇60ml，置染料于一個干凈的乳缽中，加甘油研磨至完全細末，再加入甲醇使其溶解，溶解后盛于棕色瓶中一星期，過濾于中性的棕色瓶中，保存于暗處，該染色劑保存時間愈久，染色的色澤愈鮮。4.2.1 染色法：涂片任其自然干燥;加染色液約1ml于涂片上，染色1分鐘，使標本被染色液中甲醇所固定 ：再加上與染色液等量的磷酸鹽緩沖液或蒸餾水（或自來水）用口吹氣，使染色液與蒸餾水充分混合，并防止染料的沉淀

17、，經5分鐘左右，使表面顯金屬的閃光；沖洗、洗干、鏡檢。 注：磷酸二氫鉀緩沖液：磷酸二氫鉀6.63g、無水磷酸鈉2.56g、蒸餾水100ml。4.3 姬姆薩氏染色液：取姬姆薩氏染色劑粉末0.6g,，加入甘油50ml，置于5560溫度中1.52小時后，加入甲醇50ml，靜置一日以上，過濾后即可應用。4.3.1 染色法：加姬姆薩氏染色液10滴于10ml蒸餾水中，配成稀釋的溶液，所用蒸餾水必須是中性或微堿性（必要時加1%碳酸鈉液一滴于水中，使其變為微堿性）；抹片任其自然干燥，浸入盛有染色液的染色缸中，染色30分鐘或者染色數小時，過夜亦可；水洗、洗干、鏡檢。4.4 革蘭氏染液的配制：4.4.1龍膽紫原液

18、：龍膽紫粉末5g，加95酒精100ml。4.4.2石炭酸龍膽紫液：龍膽紫原液10ml、5石炭酸液90ml混合，慮過后備用。4.4.3.碘溶液（魯格氏液）：碘片1g、碘化鉀2g、蒸餾水300ml 先將碘化鉀2g加水30ml使其溶解，再將研碎的碘片1g加入，完全溶解后再加足量的蒸餾水，使全量為300ml。4.4.4脫色液：95%酒精4.4.5稀釋復紅：堿性復紅原液：堿性復紅粉末10g，加95酒精100ml。石炭酸復紅液：堿性復紅原液10ml, 5石炭酸液90ml混合,放置過夜后慮過，儲褐色瓶中備用。稀釋石炭酸復紅液：石炭酸復紅液10ml、蒸餾水90ml混合后，即為稀釋復紅。4.4.6 革蘭氏染色法

19、4.4.6.1在已干燥固定好的抹片上，滴加龍膽紫染色液，經12分鐘，水洗。4.4.6.2加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用13分鐘，水洗。4.4.6.3加95酒精于抹片上脫色，約30秒1分鐘，水洗。4.4.6.4加稀釋碳酸復紅1030秒鐘，水洗。4.4.6.5吸干、鏡檢。觀察細菌大小、形態和顏色（革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色）備注：在進行各種染色時都應注意，當抹片滴上染色液后，不可直接將剩余染液傾去，應用水連染液一起充分洗去，然后進行下一步驟，以免發生沉渣黏附，影響染色效果。實驗室菌落總數檢測1 目的：提供平板菌落計數的標準檢測方法2相關材料：2.1儀器設備：恒溫培養箱36±

20、1，吸頭（100微升）微量移液器，直徑為90毫米的培養皿,試管架2.2培養基和試劑：平板計數瓊脂，9生理鹽水，75酒精棉球3操作規程3.1 將采集到的樣品逐一編號、登記，不能及時檢測的放置于-4冰箱保存不得超過3小時。3.2 超凈工作臺用紫外燈照射三十分鐘后方可使用。3.3 檢測時先用75酒精棉球擦拭雙手。3.4 每個樣品液混勻后用微量移液器吸取100微升注于滅菌培養皿內，做好標識。每個樣更換一次吸頭，避免交叉污染。3.5 對于污染嚴重的樣品，作好倍比稀釋后在移入平皿。3.6 同時做空白對照，3.7移夜完畢后把45-50的平板計數瓊脂傾注于滅菌培養皿內，每皿約1215ml，在水平面上，順時針、

21、逆時針各輕輕旋轉混勻培養皿3圈，避免培養基濺于皿蓋上。每個樣品從開始做到結束，時間不得超過20min。3.8 待培養基完全凝固后，翻轉平皿，置于36±1培養箱內，培養24h。3.9 培養后，立即計數每個平板上的菌落數，25250個菌落為合適范圍。如果不能立即計數，應將平皿存放于04，但不能超過24h。3.10 若平板上出現鏈狀菌落且菌落之間沒有明顯界限，每一條鏈作為一個菌落計，不能把鏈上生長的各個菌落分開來數。3.11 若平板上菌落密布，可選取平板的1/4或1/8計數3.12 計數和報告：將所數得的菌落個數乘以相應的稀釋倍數。固體以克為單位，液體以毫升為單位。表面涂擦液以平方厘米為單

22、位，消毒后種蛋以¢3.5cm規板計。3.13 查閱相關的限定標準，給出檢測樣品客觀評價。細菌對抗菌藥物的敏感試驗1目的：提供細菌對抗菌藥物的敏感試驗的標準采集與操作方法。2相關材料：無菌剪刀、無菌搪瓷盤、消毒劑、無菌容器(平皿、磨口瓶、包裝袋)、酒精燈、接種環、打火機、75%酒精棉球、一次性手套、普通營養瓊脂培養基或特殊培養基、藥敏紙片(購買或自制)、待測病料、無菌眼科鑷、無菌試管、試管架、試管塞、記號筆、2ml或5ml一次性注射器、超凈工作臺、37±1恒溫培養箱、帶刻度直尺3操作步驟：樣品的采集可由部門委托本室人員采集、也可由部門送檢。3.1要求待檢病料新鮮、無污染。3.

23、2采樣方法：首先將病、死禽放在盛有消毒液的瓷盆中浸泡5分鐘，以去除禽體表面雜菌。讓其仰臥，然后用無菌剪刀剝離皮膚，再打開體腔，剖開腹腔后，注意不能損壞腸道。再用另一把無菌剪刀灼燒后燙烙需采集臟器表面，并在燒烙部位刺一孔，然后用經酒精燈灼燒的的鉑金接種環的鉑耳伸入孔內，取少量組織或液體，以無菌操作劃線接種于普通營養瓊脂或特殊培養基上，做好標記，按臨床判斷標準進行有氧或無氧培養18-24h（37±1）后拿出備用。3.3采樣數量：以飼養場為單位，合為一個樣檢測。3.4樣品的標識：要求有樣品來源樣品名稱、樣品數量、樣品編號、抽樣日期、檢測項目等內容。3.5樣品的送檢：要求所采集的樣品以最快最

24、直接的途徑送往化驗室。4操作規程：4.1待測病料的分離培養：4.1.1在無菌操作條件下，將待測病料（含有典型臨床癥狀部分）用平板劃線分離法接種于普通營養瓊脂培養基或特殊培養基上（血瓊脂、ss瓊脂、麥康凱瓊脂），于37±1恒溫培養箱中培養18-24h后備用。4.1.2用灼燒過的接種環以無菌操作從普通營養瓊脂培養基或特殊培養基蘸取單個典型的菌落一環接種于肉湯培養管中，于37±1恒溫培養箱培養6h后，4保存備用。4.2操作步驟：4.2.1將培養6h后的肉湯培養物充分搖勻，用滅菌的棉棒蘸取少量菌液在普通營養瓊脂或者特殊培養表面均勻涂布。4.2.2用無菌眼科鑷，鑷取各種購買或自制的藥

25、敏紙片，分別貼于中培養基表面，并用鑷子輕按紙片使藥敏紙片與培養基表面密貼；藥敏紙片應在培養基表面均勻分布，一般可按培養基中央貼一種紙片，外周以等距離貼若干種紙片，這樣一個（直徑90mm）平板可貼8個藥敏紙片；同時在紙片與培養皿底部相應的位置作好標記；最后將貼好紙片的平板倒置放置于37±1恒溫箱中培養18-24h后，取出觀察結果。4.2.3結果觀察：凡對待測細菌有抑制能力的藥敏紙片，在其周圍會出現一個無菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。可用帶刻度直尺測量抑菌圈的大小，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感度越大，反之越小，則說明該菌對此藥具有耐藥性。5結果判定：判定結果時，應按抑菌圈直徑大小（以mm為

26、計量單位）作為判定敏感度高低的標準，具體的判定標準見下表：表1. 藥敏試驗判定標準抑菌直徑（mm）敏感度20以上極敏15-20高敏10-14中敏10以下低敏0不敏6記錄與報告：操作過程中做好記錄，根據檢測結果填寫報告單，由相關責任人簽名，及時傳遞到相關部門。藥物最佳抑菌濃度的選擇1目的：提供藥物最佳抑菌濃度選擇的標準操作方法2相關材料：試管、試管塞、試管架、培養皿、酒精燈、01000ul移液器、接種環、1ml吸頭、藥匙、稱量紙、萬分之一天平、超凈工作臺、37±1恒溫培養箱、營養肉湯、營養瓊脂、瓊脂糖、待試菌、抗菌藥、滅菌蒸餾水3操作規程3.1 試劑的制備：3.1.1不同濃度藥液的制備

27、：將準確稱量的不同劑量抗生素溶于等量的滅菌蒸餾水中，稀釋成所需的濃度。3.1.2不同濃度藥液培養基的制備：用移液器取3.1.1中不同濃度的藥液1ml以無菌操作注入無菌的空培養皿內，然后傾注融化并冷卻至45的定量瓊脂，隨即用手掌搓轉振蕩混勻，待瓊脂凝固后，倒轉放置4-8冰箱內備用。3.1.3待測細菌的分離與保存：將待檢病料用平板劃線分離法培養18-24h得到的單個菌落以無菌操作接種于營養瓊脂斜面上（內含4瓊脂粉），于4-8冰箱中保存。3.1.4待測細菌懸液的制備：用灼燒過的接種環以無菌操作從營養瓊脂斜面上蘸取適量被測菌接種于肉湯培養管中，37±1溫培養箱培養6h。3.2 操作步驟：3.

28、2.1將不同濃度藥液培養基平板從冰箱中取出，放置37±1恒溫培養箱中數分鐘以蒸發掉培養基表面的凝結水。3.2.2按3.1.4制備好待測細菌懸液，置37±1溫培養箱培養6h后，連同3.1.2中平板放于潔凈工作臺。3.2.3在無菌條件下，用接種環取一環待測菌懸液接種于不同濃度藥液培養基平板上（采用平板劃線分離培養法）。3.2.4劃線完畢，灼燒接種環，將培養皿倒轉放置于37±1恒溫培養箱中培養18-24h后觀察。4結果判定:不同藥液濃度平板在恒溫培養箱中培養24h后，觀察結果。凡平板中無細菌生長者，該平板所含的藥液濃度為最低抑菌濃度（MIC）。一般以最低抑菌濃度作為細菌

29、對藥物的敏感濃度。5記錄與報告：操作過程中做好記錄，根據檢測結果填寫報告單，由相關責任人簽名，及時傳遞到相關部門。消毒劑消毒效果的檢測（方法一）1. 目的：提供檢測消毒劑消毒效果的標準操作方法2. 相關材料：試管、試管塞、試管架、培養皿、酒精燈、01000ul移液器、接種環、1ml吸頭、藥匙、稱量紙、萬分之一天平、超凈工作臺、37±1恒溫培養箱、營養肉湯、營養瓊脂、待試菌、消毒劑、滅菌蒸餾水3. 操作規程3.1 取一個地方菌，在超凈臺中用滅菌接種環接種于營養肉湯中，于37培養24小時；3.2 把需要檢測的消毒劑分別按不同濃度依次稀釋好，置于滅菌試管中待用；3.3 分別吸取20微升菌液

30、（根據菌液渾濁度，菌多渾濁就加20微升，菌少就加50微升）放入滅菌平皿中，換槍頭后再分別吸取100微升3.2中不同濃度的消毒液依次放入不同的平皿中，在桌面上輕輕晃動，混合均勻，作上標記，室溫下反應30分鐘。3.4 在上述3.3平皿中依次倒入約45-50的營養瓊脂，在桌面上輕輕晃動，凝固后于37恒溫箱內培養24小時，計細菌總數。3.5 結果判定：根據細菌總數的多少來判定消毒劑的消毒效果。再結合生產實際和消毒劑的價格及稀釋配比，來選擇最合適的消毒劑。消毒劑消毒效果的檢測（方法二）1、 目的：提供檢測消毒劑消毒效果的標準操作方法2、 相關材料：試管、試管塞、試管架、三角瓶培養皿、酒精燈、01000u

31、l移液器、接種環、1ml吸頭、藥匙、稱量紙、萬分之一天平、超凈工作臺、37±1恒溫培養箱、營養肉湯、營養瓊脂、待試菌、消毒劑、滅菌蒸餾水3、 操作規程3.1將從孵化場和商品雞場分離到的菌株分別接種于營養肉湯，置于37恒溫箱培養612小時，連續傳代2次，備用；3.2將試管、刻度吸管、平皿等滅菌，備用；3.3將滅菌后的營養肉湯分裝成4.5mL/管，置37恒溫箱培養24h，備用；3.4將被檢測的消毒劑，按照各消毒劑推薦使用濃度進行稀釋備用。3.5分別取上述各濃度的消毒劑0.5mL，加入到4.5mL營養肉湯中，混勻。3.6分別取從養殖場和孵化場分離的菌株復壯培養液0.025mL，分別加入到被

32、測消毒劑的各稀釋濃度的肉湯培養基中，置37恒溫箱培養24h，同時設細菌陽性對照和空白陰性對照，觀察并記錄結果；3.7用接種環分別取各被測消毒劑肉湯培養液，接種于普通營養瓊脂上，置37恒溫箱培養24h，觀察并記錄結果。4、結果判定：4.1觀察肉湯培養基的混濁度，有細菌生長時，可見肉湯混濁，用“”表示；無細菌生長時，肉湯清晰透明，與空白陰性對照一致，用“”表示。4.2在普通營養瓊脂培養基中有細菌生長時，用“”表示；無細菌生長時，用“”表示。5、實驗結果分析5.1對實驗菌株敏感性由高到低的消毒劑分別是：5.2假如養殖場用水稀釋，同樣配制1噸消毒劑（即1000L），這時所需要花費的消毒劑成本分別為：消

33、毒劑成本由低到高分別為：球蟲卵囊的檢測1目的/目標：提供球蟲卵囊的檢測操作方法。2相關材料： 飽和鹽水 電子稱 150毫升三角瓶 紅細胞計數器 顯微鏡 載蓋玻片 移液槍 吸頭（剪掉尖頭）3操作步驟：3.1 將4克雞糞加到56毫升飽和鹽水中混合搖勻靜置3.2 調試顯微鏡3.3 將準備好潔凈血球計數板蓋上蓋玻片一塊3.4 用滅菌吸頭吸取一小滴稀釋液（不宜過多）滴入片子的一側，讓菌液自行進入計數室也可用吸水紙從另一側吸過一般計數室便可以充滿，注意不要產生氣泡。3.5 放入載物臺，先用低倍鏡找到視野，再用400倍進行計數。3.6 找到視野后從25個中方格選5個進行計數（可選4個角和中間）3.7 位于格

34、線菌體一般只數上方和右邊線上的算出5個方格的總數3.8 一毫升中球蟲的含量計算公式： A/5×25×15A為5個中方格球蟲總數4 檢測標準：每克糞便中球蟲含量不得超過3000。雞白痢平板凝集試驗1目的：提供雞白痢（或雞傷寒）平板凝集試驗的標準操作方法2相關材料：雞白痢雞傷寒多價平板凝集抗原、雞白痢強陽性血清、雞白痢弱陽性血清、雞白痢陰性血清、待檢血樣、玻璃板、針頭、離心機、酒精燈、火機、酒精棉、微量移液器、吸頭等3操作步驟：3.1操作方法取一塊潔凈的玻璃板，用酒精棉擦拭后，點火燃盡在玻璃表面的酒精。在20-25環境條件下用定量移液器吸取血清30ul滴加在潔凈的玻璃板上，然后

35、用微量移液器取30ul抗原與血清充分混合均勻，并使混合液散開至直徑約2cm時不斷搖動玻璃板，計時在2分鐘內判定結果。同時設陽性血清、弱陽性血清、陰性血清對照。3.2結果判定3.2.1判定標準如下100%凝集（+）：紫色凝集塊大而明顯，混合液稍渾濁。75%凝集（+）：紫色凝集塊較明顯，混合液有輕度渾濁。50%凝集（+）：出現明顯的染色顆粒，混合液較渾濁。25%凝集（+）：僅出現少量顆粒，混合液渾濁。 0%（）：無凝集顆粒出現，混合液渾濁。3.2.2在2分鐘內抗原與強陽性血清混合后應呈100%凝集（+）、與弱陽性血清混合后應呈50%凝集（+）、與陰性血清混合后不凝集（）判試驗有效。3.2.3在2分

36、鐘內被檢血清與抗原之間出現50%（+）以上凝集者為陽性，不發生凝集的則為陰性。介于兩者之間的為可疑反應（50%0%）此時應該將該雞隔離飼養，一個月后再做檢測，若仍為可疑反應，按陽性反應判定。4記錄與報告：操作過程中做好記錄，根據檢測結果填寫報告單。分析實驗結果，注意沙門氏菌污染動態變化趨勢，即時判斷雞場沙門氏菌污染情況。由相關責任人簽名，及時傳遞到相關部門。養禽場雞舍環境、設備、器具表面及空氣樣品的采集與檢測1目的：提供雞舍環境、設備、器具表面及空氣樣品采集與檢測的標準操作方法2相關材料：裝10m l滅菌生理鹽水的滅菌試管、滅菌棉簽、酒精燈、規板（102）、打火機、試管架、75%酒精棉球、記號

37、筆、泡沫箱、剪刀、平板計數瓊脂、90培養皿。3. 環境、設備、器具表面及空氣樣品采集的方法3.1 環境、設備、器具表面樣品的采集3.11兩名化驗員以生產區工人入場程序進入雞舍。用75%酒精棉球擦拭雙手。3.1.2 打開包裝生理鹽水試管，擺設與試管架架上，一人在酒精燈上灼燒規板后，放于待測物表面。3.1.3 另一人拿出一支試管，取出一支棉簽在靠近酒精燈處打開試管塞，用滅菌棉簽蘸取少量生理鹽水，蓋好管塞，上下左右擦拭規板內面積2遍后，打開管塞將棉簽在管口處用剪刀剪斷，塞好塞子做好標識。3.1.4 采下一個樣時再次灼燒規板，更換試管。3.1.5 雞舍地面采樣時，須選取雞舍五點（四個角及中央）是樣品具

38、有代表性32 空氣的采樣法將檢查合格的倒有平板計數瓊脂的90培養皿帶入待測雞舍，在雞舍四個角及中央選取58個點各放置一套培養皿。打開皿蓋開始計時，15分鐘后蓋上皿蓋，帶回化驗室置于36±1培養24h計數。表3.養雞場微生物檢測標準參考數據分級平板上菌數（進雞前）平板上菌數（正常養雞時）評價1060 0600優良2611006001000安全310114010001400注意通風414120014002000需消毒5201以上2000以上禁止進雞表4. 設備、器具表面微生物檢測標準（菌數/2）分級平板上菌數評價10-18干 凈219-36輕度污染337-54中度污染454以上高度污染養

39、禽場水樣的采集與檢測1. 目的：提供水樣采集與檢測的標準操作方法2. 相關材料：滅菌試管15×150 、滅菌棉簽、打火機、試管架、記號筆3. 操作步驟：3.1 洗凈雙手并消毒3.2 把滅菌試管打開包裝紙，擺于試管架上3.3 用打火機灼燒待測水籠頭，以殺滅管口的微生物。擰開水籠頭，讓水流35分鐘。3.4 打開滅菌試管的塞子，接取10ml左右水，塞好塞子，立即帶回化驗室檢測，不能立即檢測的，保存于4攝氏度冰箱中。3.5 取井水、池水、河水等地面水樣時，須用特制的取樣器，距水面10-15厘米深處取水。3.6 取雞舌飲水器和水槽中的水樣時，關閉水源，使水靜置30分鐘，用滅菌的吸管吸取水樣放入

40、滅菌的玻璃瓶中備用。3.7 取水樣檢查前，應將水樣充分振搖25次。3.8 檢測方法同環境、設備表面微生物檢測方法。表5. 家禽飲用水微生物學標準級別評價細菌總數/毫升大腸桿菌數/毫升優純水0-100良可飲用水10-1000中尚可飲用水1000-1000010-50差污水10000以上100消毒前后種蛋表面、孵化廳及孵化器內空氣采樣及檢測1目的：提供消毒前后種蛋表面、孵化廳及孵化器內空氣微生物檢測的標準操作方法。2相關材料：2.1 種蛋表面微生物檢測所需材料被測試種蛋、普通瓊脂培養基、平板計數培養基、.滅菌培養皿、滅菌15×150mm試管、0.9%滅菌生理鹽水、剪刀、酒精棉球、記號筆、

41、滅菌的1000ul吸頭、01000ul移液器、滅菌棉棒、內徑為3.5cm的規板、37±1恒溫培養箱2.2 孵化廳及孵化器內空氣微生物檢測所需材料平板計數培養基、滅菌培養皿、計時器、包裝紙、37±1恒溫培養箱3操作方法：樣品的采集應由本室檢測員采集。3.1種蛋表面微生物檢測樣品采集與檢測步驟：3.1.1將被測種蛋夾在直徑為3.5cm的規板內,大頭朝上。3.1.2在裝有5mL滅菌生理鹽水的試管中浸濕滅菌的棉棒，在試管壁上擠去多余的生理鹽水，然后在規板范圍內滾動棉棒涂抹蛋殼表面取樣。3.1.3在試管口用剪刀剪斷棉棒的手持端，使取樣端落入試管中，蓋好試管塞，放置于試管架上，做好標記

42、帶回化驗室檢測。3.1.4無菌條件下反復晃動試管，以充分洗滌下棉棒上的細菌。3.1.5用01000ul微量移液器吸取1000ul細菌懸液，注入滅菌的空培養皿內，然后傾注熔化并冷卻到45-50的營養瓊脂，充分搖勻混合。3.1.6待營養瓊脂凝固后，倒轉培養皿，置37±1恒溫培養箱中培養24小時后，準確計數出培養皿內的菌落數。3.1.7根據培養皿內的菌落數和菌液的稀釋倍數計算出取樣范圍內的細菌總數。規板內細菌總數=培養皿內的菌落數×稀釋倍數3.2孵化廳及孵化器內空氣微生物檢測操作步驟：3.2.1將滅菌并冷卻至45-50的瓊脂倒入滅菌培養皿內，待凝固后，放置于37±1恒溫

43、培養箱中培養18-24小時后觀察無細菌生長者，備用。3.2.2將無細菌生長培養皿在孵化廳或孵化器內暴露10分鐘，然后蓋上培養皿蓋，用包裝紙包好并作上標記帶回化驗室。3.2.3將3.2.2中培養皿置37±1恒溫培養箱中倒置培養24小時后，計算培養皿內的菌落數。3.2.4每臺孵化廳或孵化器，取樣4-8個，求其平均菌落數。4 檢測標準：4.1消毒前后種蛋表面微生物檢測標準如下：表6. 未消毒種蛋微生物檢測標準分級種蛋評價蛋殼表面總菌數規板（¢3.5cm）內菌數1干凈蛋3200以下600以下2臟蛋40003000076057003極臟蛋400000以上76000以上表7.消毒后種蛋

44、微生物檢測標準 分級消毒率（%）蛋殼表面總菌數規板（¢3.5cm）內菌數優100900320060良898032164061120中7970641960121180差69以下961以上181以上4.2孵化廳及孵化器內空氣微生物檢測標準如下表：表8. 孵化器、孵化室微生物檢測標準（空氣暴露10分鐘）分級評價孵化器菌落數孵化室菌落數1優0100152良112516363中264637574差476658765劣678677966糟87以上97以上表9. 采用四級分類平板空氣暴露法級 別評 價平板上平均總菌落數1干凈0-102輕度污染11-203中度污染21-304高度污染30以上5 記錄

45、與報告操作過程中做好記錄，根據檢測結果填寫報告單，由相關責任人簽名，及時傳遞到相關部門。出雛器中絨毛樣品的采集與檢測1 目的：提供出雛器中絨毛微生物檢測的標準操作方法2 相關材料：滅菌鑷子，滅菌培養皿，（90毫米），滅菌吸頭，三角瓶、滅菌蒸餾水、記號筆、平板計數瓊脂、滅菌稱量紙、移液器3 操作步驟31在出雛接近完成時，用無菌鑷子刮取出雛器中的絨毛，每臺出雛器測2份絨毛，置于滅菌培養皿中，帶回化驗室。32用滅菌稱量紙稱取0.25克絨毛放入盛有100毫升滅菌蒸餾水的三角瓶中充分搖動，使絨毛浸濕但不要粘到三角瓶壁上。3.3使混合液靜置30分鐘。3.4無菌吸取混合液1mL注入滅菌平皿內，將45

46、7;1的平板計數瓊脂培養基傾入培養皿內，正反時針各輕輕搖三圈，混勻。3.5待瓊脂凝固后，反轉平皿，置于36±1培養24h計數。3.6平板上所得的菌數乘以400即為每克絨毛中所含菌數。表10. 出雛器熏蒸前后絨毛微生物檢測標準（菌數/g）級別熏前菌數熏后菌數優7500025000300000100000差300000以上100000以上禽血液樣本的采集1. 目的：提供采集禽（以雞為例）血液樣本的標準方法，適用于血凝血抑試驗、平板凝集試驗、瓊脂擴散試驗。2相關材料：2ml或5ml一次性注射器、1.5ml無菌離心管、75%酒精棉球、離心管架、保溫箱或泡沫箱、冰塊、

47、記號筆3操作步驟：樣品的采集可由部門委托本室人員采集、也可由部門送檢。3.1血樣采集方法：3.1.1 方法一：心臟采血法（可單人或雙人操作） 以龍骨突為準的定位方法進行心臟采血。助手左手握雞的兩腿向后拉,右手按住體部,右側臥保定在小凳或地面上。雞體矢狀面與地平行,背側向助手,腹側向術者。確定部位以龍骨突為準,距4厘米處劃一與背平行的線,再由龍骨突向后2厘米處劃尸垂直線,交點即是進針處。以手指按壓稍有凹陷(龍骨間隙),觸之心動明顯。操作時左手拇指抵于龍骨突上,其余四指輕輕向_L向背側分開心區周圍羽毛,拔除細絨毛,再用左手食指稍向背部推壓皮膚,繃緊固定,酒精消毒,右手持注射器采血。使用7號針頭,避

48、開皮下血管,由進針處垂直小心刺入,當觸及心臟時即有搏動感,再繼續進針0.30.4厘米即有回血,若無回血再稍進針或提針,同時抽動活宋,便可見回血,固定針頭抽至需要量。切不可亂刺。日齡較小雛雞多采用此方法進行血樣采集。3.1.2 方法二：固定雞后，展開翅膀在翅下選一條粗大靜脈，用75%酒精棉球消毒，待干燥后以指壓迫靜脈的回心端，使靜脈努張，然后用1ml或5ml一次性注射器針頭刺入血管，發現血液回流時抽取血液，一般抽取0.6-1.0ml；然后緩慢注入1.5ml無菌離心管中，置于離心管架上做好標記。在室溫下靜置待血液凝固，（或有血清自然析出時）填寫抽樣單連同血樣一起送往化驗室。日齡較大的雞只多采用此方

49、法進行血樣采集。3.2采樣位點：如在雞場采樣，注意選取雞舍的不同位置；每個飼養群隨機取樣，并使樣品具有代表性。3.3樣品標識：要求有樣品來源、樣品名稱、樣品數量、樣品編號、抽樣日期、檢測項目等內容。3.4樣品送檢：要求所采集的樣品以最快最直接的途徑送往化驗室。如果樣品能在采集后4小時內送抵化驗室，則可在常溫下送檢；若24小時內送抵化驗室應放在保溫箱中加冰塊冷藏送檢，若超過24小時要先將樣品血清吸出并冷凍，在保溫箱內加大量冰塊運輸，途中不能超過48小時，以防止影響檢測結果禽流感（法氏囊）瓊脂凝膠免疫擴散試驗1目的：提供禽流感瓊脂凝膠免疫擴散試驗檢驗的標準操作方法2相關材料：禽流感瓊擴抗原、禽流感

50、瓊擴陽性血清、磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、氯化鈉（分析純）、瓊脂糖、打孔器 、培養皿、燒杯、玻璃棒、水浴鍋、冰箱、酒精燈、針頭、被檢血清、脫脂棉、微量移液器、吸頭、量筒、恒溫培養箱、氫氧化鈉、10ml刻度吸管、蒸餾水3試劑的制備：3.1 pH6.4、0.01mol/LPBS的配制：甲液： Na2HPO4·12H2O 3.58g 加蒸餾水至1000ml；乙液： KH2PO4 1.36g 加蒸餾水至1000ml；待甲乙二液充分溶解后，分別保存，用時取甲液24ml，乙液76ml 混合即可。 滅菌或過濾，PBS一經使用，于4保存不超過3周。

51、3.2 瓊脂板的制備：稱量瓊脂糖0.8g，加入100ml的pH6.4、0.01mol/LPBS中，在水浴中煮沸充分融化，加入8.0g氯化鈉（NaCl），充分溶解后加入1%硫柳汞溶液1ml，冷至4550時，將潔凈干熱滅菌直徑90mm來皿置于平臺上，每個平皿加入18ml20ml，加蓋待凝固后，把平皿倒置以防水分蒸發，于冰箱中保存備用(時間不超過2周)。1.3 禽流感瓊擴抗原：標準陰性與標準陽性血清均由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所提供，按說明書操作。4操作步驟：4.1 打孔：反應孔現用現打，將瓊脂板從冰箱中取出，在酒精燈上稍加熱蒸發其表面水分，在制好的瓊脂板上用外徑為4mm的打孔器按七孔一組的梅花

52、形圖案打孔，中心孔與周圍孔的孔距為3mm，將孔中的瓊脂用8號針頭輕輕向上挑出，注意勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。4.2封底：將制好的瓊脂板在酒精燈火焰上稍加熱至瓊脂剛剛要溶化為止，以封閉孔的底部，防止瓊脂與培養皿底分離和側漏。4.3加樣：用微量移液器吸取瓊擴抗原滴加入圖一中間孔，陽性對照血清分別加入周圍1，4孔中，被檢血清按編號順序分別加入4個孔（2，3，5，6，）每孔均以加滿不溢出為度，每加一個樣品應換一個吸頭。23476115圖一4.4反應：加樣完畢后，靜止5-10分鐘待孔中液體吸干后，然后將培養皿輕輕倒置放入加蓋濕盒內于37±1恒溫培養箱中作用2472小時，分別在24h、48h、

53、72h對光觀察結果病記錄。5結果判定：5.1 判定方法：將瓊脂板置日光燈或側強光下觀察，標準陽性血清與抗原孔之間出現一條清晰的白色沉淀線，則試驗可成立。5.2 判定標準：陽性：陽性血清與抗原孔之間有明顯致密的沉淀線時，被檢血清與抗原孔之間也形成沉淀線。或者陽性血清的沉淀線末端向毗鄰的被檢血清孔內側偏彎者，此被檢血清判為陽性（+）。弱陽性：被檢血清與抗原孔之間沒有沉淀線，但陽性血清的沉淀線末端向被檢血清孔偏彎，此被檢血清判為弱陽性（需重復試驗）如重復試驗還是弱陽性，則判為陰性（）陰性：被檢血清與抗原孔之間不形成沉淀線，或者陽性血清的沉淀線向毗鄰的被檢血清孔直伸或向其外側偏彎者，此被檢血清判為陰性（）。6記錄與報告：操作過程中做好記錄，填寫檢測報告單，由相關責任人簽名，及時傳遞到相關部門。禽流感（新城疫）微量紅細胞凝集抑制試驗1目的：提供禽流感微量紅細胞凝集抑制試驗的標準操作方法2相關材料：禽流感抗原、禽流感陽性血清、禽流感陰性血清、被檢血清、1%雞紅細胞懸浮液、PBS液、離心機、微量振蕩器、微量移液器、V型96孔微量反應板、100ul吸頭、架盤天平、37±1恒溫培養箱、氯化鈉(分析純)、吸耳球、培養皿、燒