1、ICSDB45廣西壯族自治區地方標準DB 45/T XXXXX2012葡萄中白藜蘆醇含量的測定 液相色譜法Testing resveratrol of grape Liquid chromatography analysis（征求意見稿）2012-XX-XX發布2012-XX-XX實施廣西壯族自治區質量技術監督局發布DB45/ XXXXX2012前言本標準根據GB/T1.1-2009要求進行編寫。本標準由廣西大型儀器協作共用管理委員會辦公室提出并歸口。本標準由廣西壯族自治區分析測試研究中心起草。本標準主要起草人：周琳、陳秋虹、莫建光。本標準為首次發布。3葡萄中白藜蘆醇含量的測定 液相色譜法1

2、范圍本標準規定了液相色譜法測定白藜蘆醇含量的方法原理，使用儀器與設備、測定方法及結果計算。本標準適用于葡萄中白藜蘆醇含量的測定。2 規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 603 化學試劑 試驗方法中所用制劑及制品的制備 GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法 JY/T 024 高效液相色譜法通則3 方法原理葡萄采用勻漿后加無水硫酸鈉干燥處理，葡萄中的白藜蘆醇經乙酸乙酯提取，旋轉蒸干，用甲醇定容，高效液相色譜儀測定，根據保留時間和峰面積進行定性和

3、定量。4 試劑和材料4.1 一般規定 本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T 6682-2008中規定的三級水；流動相用水應符合GB/T 6682中一級水的規定。所述溶液如未指明溶劑，均系水溶液；所用制劑和制品按GB/T 603配制。4.2 試劑4.2.1 乙腈：色譜純。4.2.2 甲醇：分析純。4.2.3 乙酸乙酯：分析純。4.2.4 無水硫酸鈉：分析純。4.2.5 乙酸：分析純。4.2.6 乙酸溶液0.1 （V/V）：量取1 mL冰醋酸，加水至1 000 mL。4.2.7 白藜蘆醇標準品（分子式C14H12O3）：含量99 。4.3 白藜蘆醇標準溶液 精密稱取白

4、藜蘆醇標準品10.0 mg于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。制成1.00 mg/mL的標準儲備溶液，白藜蘆醇標準工作液臨用前配置，用甲醇稀釋至20.0 µg/mL。5 儀器與設備5.1 液相色譜儀帶紫外檢測器，其靈敏度及穩定性符合JY/T 024-1996第6章要求。5.2 液相色譜工作站或色譜數據處理機。5.3 微量進樣器：25L或100L。5.4 均質分散器。5.5 恒溫振蕩器。5.6 旋轉蒸發器5.7 分析天平：感量0.000 1g。6 測定步驟6.1 提取取新鮮葡萄用分散器攪成勻漿，精確稱取樣品5.000 0 g（精確至0.000 1g），加入無水硫酸鈉研磨至

5、干燥均勻分散，置磨口三角瓶中用乙酸乙酯50 mL在40恒溫下振搖提取30 min，反復提取三次。合并乙酸乙酯提取液，減壓蒸干，用甲醇溶解殘留物，至5 mL棕色量瓶定容。搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜(0.45m)濾過，取續濾液作為供試品溶液。分別取供試品溶液與白藜蘆醇標準工作液（4.3）各20µL注入液相色譜儀。6.2 液相色譜條件6.2.1 色譜柱：C18(4.6 mm×250 mm，5m)：或性能相當的色譜柱。6.2.2 柱溫：25 。6.2.3 流動相：取0.1 （V/V）乙酸溶液750 mL加入250 mL乙腈6.2.4 流動相流速：1.0 mL/min。6.2.5 檢測波長：306 nm。6.2.6 檢測靈敏度：1 AUFS。6.3 測定 外標法分析測定。分別吸取10L標準溶液和樣品溶液上機進行色譜分析。標準溶液及樣品重復進樣，所得峰面積（或峰高）平均偏差小于3 %。6.4 液相色譜圖（見圖1）7 結果計算和表達7.1 計算公式試樣中白藜蘆醇的含量X，以質量分數毫克每百克（mg/100g）表示，按照公式（1）計算： .（1）式中：V試樣溶液定容體積，mL；As試樣溶液對應的色譜峰面積響應值；Asd白藜蘆醇標準溶液對應的色譜峰面積響應值；白藜蘆醇標準溶液的含量，µg/mL；m試樣的質量