1、血栓藥效探究思路及方法(江西省婦幼保健院，江西 南昌330006) g摘要：對血栓的形成原因著手，闡述了血栓的藥效 研究思路與方法。關鍵詞：血栓；形成；藥效中圖分類號：r364. 1+5文獻標識碼：a文章編號： 1673-2197 (2009) 01-0116-02血栓是指機體血液中，由于血小板凝集或血液凝固等而 在心血管內形成的固體。血栓癥是一類嚴重危及人類健康及 生命的的心血管疾病。現就其成因及藥效研究闡述如下。1血栓形成的原因19世紀中期，virchowl首先提出血栓形成的三大因 素：血液高凝、血流滯緩及血管壁損傷，經過百年來臨床及 多種檢測手段的驗證，virchow的理論已得到公認。1

2、. 1血管高凝凝血是由系列凝血因子相繼酶解激活，最終生成凝血酶 和形成纖維蛋白的復雜過程，即所謂“凝血瀑布”。生理條 件下，體內還存在與凝血系統相對的抗凝血系統，以保證在 少量凝血因子被激活的可能下，不致發生連鎖凝血正反饋反 應。血液中重要的抗凝血因子主要有肝素、抗凝血酶iii (at-iii)、蛋白c系統和組織因子途徑抑制物(tfpi)等。血液凝固性增加表現為機體凝血功能亢進或抗凝功能降低， 是血栓形成的直接原因之一。1.2血流異常血流是影響血栓形成及其性質的重要因素，如在血流緩 慢的靜脈所形成的血栓，稱為紅色血栓；而在血流較快的動 脈形成的血栓，稱為白色血栓。血流異常主要涉及血液黏度 增高

3、和血流方式的異常。1.3血管內膜受損生理狀態下，血管內皮細胞具有強大的抗血栓形成的功 能。正常的血管內皮細胞既能生成和釋放使血管松弛的物 質，如前列環素（pgi2）和內皮松弛因子（edrf）；又能 生成和釋放抑制血小板粘附和聚集的物質，如pgi2、edrf 和6-酮-pge1、13軽十八碳二烯酸；以及多種抗凝血酶的 物質，如硫酸乙酰肝素、抗凝血酶（at）、凝血酶調節蛋白 （tm）和tfpio此外，血管內皮細胞還能合成和分泌組織型 纖溶酶原活化劑（t-pa）和尿激酶型纖溶酶原活化劑（u-pa）, 二者可與纖溶酶的集合在血管內皮細胞表面，使纖溶活性增 高，以清除正常血液循環中形成的少量纖維蛋白。此

4、外，血 管內皮細胞還可產生纖溶酶原活化劑抑制劑（pai）,使已形 成的血栓不被溶解，有利于血栓形成2。在炎癥和致動脈 粥樣硬化等多種因素的刺激下，血管內皮細胞可出現凋亡。 凋亡的血管內皮細胞不但失去抗血栓形成的功能，還能通過 磷脂酰絲氨酸（ps）表達增加失去膜磷脂不對稱性和抗凝膜 成分丟失，進而促進血栓形成。內皮細胞可因物理、化學、 生物、免疫等因素受到損傷，造成功能失衡，結果使內皮細 胞的抗栓功能減弱，引起血栓形成。2研究思路根據血栓形成的三大因素：血液髙凝、血流滯緩及血管 壁損傷，其藥效研究分為以下三個方面。2. 1降低血液高凝狀態凝血過程按照啟動方式及參與的凝血因子可分為內源 性凝血途徑

5、和外源性凝血途徑。體內抗凝系統大致可分為兩 方面：細胞抗凝機制和體液抗凝機制。細胞抗凝機制是單核 -巨噬細胞系統對激活的凝血因子、組織因子、凝血酶原復 合物及可溶性纖維蛋白的吞噬作用。體液抗凝系統中較重要 的有at-iii.蛋白c抗凝體系等。2.2改變血流速度2. 2. 1抑制血小板活化病理情況下，血小板在病變血管部位蓄積致血管閉塞， 引起缺血性組織損傷和血栓栓塞癥，因此抑制血小板活化是 抗血栓的重要一步。調節血小板功能概括起來包括花生四烯 酸系統、環核昔酸系統和ca2+o2. 2. 2調節纖溶纖溶是指纖維蛋白、纖維蛋白原被纖溶酶水解的過程， 其主要作用是將沉積在血管外的纖維蛋白溶解，防止血栓

6、形 成。(1) 纖溶酶原激活劑。在體內最基本的纖溶酶原激活 劑是組織型纖溶酶原激活劑和尿激酶型纖溶酶原激活劑。其 主要功能是將纖溶酶原激活成纖溶酶，啟動纖溶系統。(2) 纖溶抑制物。體內纖溶抑制劑包括纖溶酶原激活 抑制劑和纖溶酶抑制劑兩類，對纖溶系統起著重要調節作 用。所以，提高纖溶酶原激活劑含量和減少纖溶抑制物含量, 對抗血栓有重要意義。2.3避免內皮細胞受損在生理情況下，完整無損的血管內皮細胞具有抗栓功 能。因此避免內皮細胞受損，是研究抗栓藥物的重要內容。 內皮細胞產生的與血栓有關的物質主要有pgi2、edrf與 et、vwf、tm、硫酸乙酰肝素與at-iii.纖溶酶原激活劑與纖 溶抑制物

7、。3研究方法3. 1實驗動物的選擇各種血栓模型以大鼠最為常用，其次是兔和小鼠。對于 器官血栓，也可選用大鼠、犬或者兔。3.2動物模型3.2.1光化學引起的大鼠局部腦血栓模型3手術方法：麻醉后，仰臥固定大鼠。將大鼠頭部右側臥位,從左眼和左耳之中點，做突向耳側長約2. 5cm的弧形 切口，分離穎肌，自額弓前、后端剪斷并剪斷冠狀突。分離周圍軟組織暴露和顫弓相接的穎鱗骨。在顫弓與穎鱗骨交界的前下方用臺式牙科鉆車行顱骨鉆孔，用血管鉗擴大骨窗暴 露左側mca近側段主干，保持硬膜完整。個別大鼠mca變 異，如無明確主干或在嗅束水平就已分離則放棄不用。完全 暴露大腦下靜脈和嗅束之間mca段后，先用濕生理鹽水棉

8、球 蓋住傷口待用，再做左側股靜脈插管備用。血栓形成方法：選用激光如he2ne和靜脈注射光敏劑 如血嚇嘛衍生物。經投射孔徑將3mm的光導纖維引出并固定 于架上，投照孔徑對準嗅束和大腦下靜脈間的mca,纖維遠 端距mca約2mm,投照光能量密度大于640mw/ cm2。激光 照射mca同時，經股靜脈插管緩慢注射12. 5mg/kg體重血嚇 咻衍生物，注射時間超過lmin,直接照射15mino在手術顯 微鏡(opton, west gemiony)下觀察到mca血流中斷并變 為白色，即為血栓形成。3.2.2開顱電凝阻斷模型4手術方法：麻醉后，固定大鼠，沿眶上緣作弧形切口， 分離眶內結締組織后，可見視

9、神經孔，電凝切斷視神經，在 視神經孔外上方開窗，切開硬腦膜，即可看到大腦中動脈， 電凝并切斷大腦中動脈起始部至大腦下靜脈之間或者嗅束 內側2至大腦下靜脈之間的一段大腦中動脈，敷少許青霉 素鈉后逐層縫合穎肌和皮膚。術后用加熱墊維持動物體溫在 3738°c,蘇醒后送回原籠內。3.2.3化學法血栓模型5手術方法：大鼠腹腔注射20%烏拉坦麻醉(5 ml&#8226；kg)o常規氣管插管，行人工呼吸，然后開胸斷第 3、4肋骨，暴露心臟，打開心包膜，將吸有50%三氯化鐵溶 液的濾紙片貼于大鼠的冠狀動脈前降支根部，2 min后大鼠 腹腔注射氨甲苯酸(100 mg&#8226；kg)

10、, 60 min后取下濾紙 片。3. 2.4光一色素法動脈血栓模型6手術方法：大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，氣管插管、頸動脈 插管做血壓監測。開腹，置腸系膜于生理鹽水恒溫槽中灌流, 在顯微鏡下觀察腸系膜微循環狀況，經顯微一攝像一錄像系 統拍攝在正常狀況下微血管的流態。5m in后打開熒光顯微 鏡激發光光路，使特定波長的激發光照射在選定的目標血管 段上，第6min通過靜脈插管注入熒光素鈉fina (2ml/kg), 并以此時刻作為血栓模型建立的起始時間。在顯微鏡下或監 視器上觀察血栓生成的全過程并錄像，直至血栓完全栓塞目 標血管。3. 2.5靜脈血栓模型7手術方法：動物麻醉劑864麻醉后，于右側腹股溝區

11、沿 股動、靜脈走行切開皮膚8 cm,鈍性分離皮下及肌肉組織， 充分暴露股靜脈，于遠端上動脈夾后切開股靜脈，向心方向 安置自制螺旋銅絲進入股靜脈內并縫合，去靜脈夾，手術視 野檢查無滲血，術畢。3. 2.6小鼠角叉菜血栓模型8造模：精密稱取角叉菜膠，以生理鹽水配成4%濃度，給 大鼠稱重，于后足跖部皮下注射角叉菜膠，劑量為20 mg/ kg 體重。3.3檢測指標的選擇(1) 內皮細胞功能測定：6-酮-pgela、no與et-1、vwf、tm測定。(2) 血小板功能測定：血小板黏附、聚集、釋放功能 的測定、txb2測定。(3) 凝血因子和抗凝物質測定：凝血時間測定、凝血 酶原時間、凝血酶時間測定、組織

12、因子測定、at-iii測定、 蛋白c活性測定、組織因子抑制物活性測定。(4) 纖維蛋白溶解活性的檢測：d-二聚體測定、組織 性纖溶酶原激活劑測定、纖溶酶原激活劑測定。(5) 血液流變性測定：黏度測定、紅細胞比容檢測、 紅細胞沉降率測定、紅細胞電泳時間測定、紅細胞變形性測 定。(6) 血栓相關指標測定：血栓重量、長度與血栓形成 百分率、血栓形成時間、血流量、梗死面積或重量等。參考文獻：1 hansson p0, welinl, tibbin g. deep vein thrombosis and pul2monary embolism in the general population j arch intern med, 1997, 29 (3): 263 2 陳頌血管內皮細胞凋亡研究進展j .chinese journal of thrombosis and hemostasis, 2001, 2 (7)： 88-90.3 管興志.光化學大鼠大腦中動脈血栓形成模型的 改進j國外醫學腦血管疾病分冊,2000, 8(5)： 278-280.4 張玉勛局灶性腦缺血大鼠模型的研究j 上 海實驗動物科學，1999, 19 (2)： 96-101.5 任開環重組水蛭素抗大鼠冠狀動脈血栓形成的 作用研究j 醫藥導報，2005, 24 (5)： 369-372.6