1、1會計學CTC循環腫瘤細胞循環腫瘤細胞腫瘤循環細胞的特性腫瘤循環細胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液約107個白細胞中僅有1個CTC 非典型形態非典型形態：比血液細胞、正常組織細胞的體積大、細胞核大，不規則，核質比高、不容易發生形變 異質性異質性：細胞表面抗原標志物表達差異、攜帶不同的分子信息、轉移潛力差異 易聚集成團易聚集成團CTM：成瘤遷移能力是CTC的23-50倍外周血細胞的遮蔽阻礙了它們的分離與分子鑒定，因此的檢測是制約其臨床應用的關鍵循環腫瘤細胞循環腫瘤細胞的概念與特性的概念與特性循環腫瘤細胞的特性循環腫瘤細胞的特性CTCs可以是間質型、上皮型、上皮間質混合型、成團的CTCs(CTM

2、)CTCs檢測的臨床可行性檢測的臨床可行性健康狀態癌前病變惡性腫瘤腫瘤轉移CTC檢測臨床意義臨床意義CTC監測分析耐藥性檢測耐藥性檢測動態跟蹤CTC數目，判斷是否產生耐藥性腫瘤復發檢測腫瘤復發檢測CTC數目增多是腫瘤復發的前兆腫瘤新藥物的開發腫瘤新藥物的開發配合研制新的抗腫瘤藥物體外早期診斷體外早期診斷腫瘤在1mm時，血液中可檢測出CTC預后判斷預后判斷根據治療前后CTC個數判斷預后及存活時間化療藥物的療效評判化療藥物的療效評判根據化療前后CTC數目變化，確定藥物是否有效循環腫瘤細胞的檢測循環腫瘤細胞的檢測循環腫瘤細胞的循環腫瘤細胞的分析鑒定分析鑒定循環腫瘤細胞的分離富集循環腫瘤細胞的分離富集

3、CTCs分離分離、分型、分析、分型、分析原 理技術產品免疫捕獲法(根據細胞表面標志物)陽性富集法：CellsearchTM系統CTC芯片（CTC-chip）MACSCell Separation陰性篩選法：Easy SepCyttel過濾法(根據細胞大小)ISET膜過濾 密度梯度離心（根據細胞密度）OncoQuick分離體系CTCs的檢測方法及代表技術產品的檢測方法及代表技術產品magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automa

4、ted fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細胞結合，在特定磁場作用下達到分離CTC的目的。陽性富集陽性富集-CellsearchTMCTCWBCCellsearchTM CTCs鑒定鑒定上皮來源的CTCs的判定：DAPI（細胞核）陽性、角蛋白CKs陽性、CD45陰性芯片的表層排布了78 000個包被抗 EpCAM抗體的微位點血液樣本流經芯片時，抗體與腫瘤細胞結合粘附在芯片上制造相對困難，成本昂貴，顯微位點周圍的血流通暢性限制了與抗體覆蓋位點接觸的CTC數量陽性富集陽性富集- CTCs-Chip 原理原理：聯合上皮

5、細胞標志及腫瘤特異性標志通過免疫磁珠分選特異性腫瘤的CTCs聯合抗MUC1和EpCAM抗體檢測乳腺癌和直腸癌通過RT-PCR擴增腫瘤標志物來鑒定CTCs特點特點：較單一使用EpCAM抗體更特異不適用于EpCAM和CK陰性或弱化的CTCsPCR鑒定敏感性高，但易造成假陽性陽性富集- Adna Test 檢測系統 Cyttel/Cytelligen 檢測系統 原理原理: 利用CD45磁珠抗體吸附白細胞，在磁場作用 下去除白細胞，CTCs被富集沉淀 特點：特點： 可檢出EpCAM、CK陰性的間質型CTCs 樣本處理步驟多，CTCs易丟失步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩定 判定標準：DAPI陽性、C

6、D45陰性，8號染色體擴增；特異性不足HepG2 cells stained with anti-KL1濾膜法濾膜法 原理： 根據腫瘤細胞與白細胞密度不同，通過梯度離心分離CTCs OncoQuick分離體系 方法： 密度梯度離心后，白細胞通過多孔濾膜被濾除，而CTCs被富集在介 質層中，洗脫后得到CTCs. 特點：可分離CK陽性和陰性細胞 局限性：CTCs遷移可能至血漿層、紅細胞層和粒細胞層而丟失；CTCs微栓子可能沉入紅細胞層而丟失；與腫瘤細胞特性、離心時間和溫度等有關；用血量多15-30ml技術技術優勢優勢局限性局限性陽性率陽性率樣本量樣本量CellsearchTM特異性好、重復性好、可

7、自動化不能分型、漏檢轉移侵襲能力較強的間質型CTCs及CTM71%（MBC）47%（MCRC）78%（AIPC）7.5mLCTCs-chip(HB-chip)特異性好、靈敏度高、HB芯片可富集到CTM不能分型、漏檢轉移侵襲能力較強的間質型CTCs93%(MPC )0.9-5mlCyttel可檢測出EpCAM、CK陰性的CTC、未對CTC進行任何標記不能分型、鑒定不穩定、鑒定時易發生CTCs丟失64.5%(NSCLC)5mLISET膜過濾CTC丟失少、適用于CK陰性腫瘤、適用于形態學、免疫學和基因特異性分析不適合小神經內分泌腫瘤細胞、特異性低、殘留大的白細胞80%（BC）1-15ml腫瘤循環細胞

8、的特性腫瘤循環細胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液約107個白細胞中僅有1個CTC 非典型形態非典型形態：比血液細胞、正常組織細胞的體積大、細胞核大，不規則，核質比高、不容易發生形變 異質性異質性：細胞表面抗原標志物表達差異、攜帶不同的分子信息、轉移潛力差異 易聚集成團易聚集成團CTM：成瘤遷移能力是CTC的23-50倍外周血細胞的遮蔽阻礙了它們的分離與分子鑒定，因此的檢測是制約其臨床應用的關鍵循環腫瘤細胞循環腫瘤細胞的概念與特性的概念與特性magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automated fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細胞結合，在特定磁場作用下達到分離CTC的目的。陽性富集陽性富集-CellsearchTMCTCWBC芯片的表層排布了78 000個包被抗 EpCAM抗體的微位點血液樣本流經芯片時，抗體與腫瘤細胞結合粘附在芯片上制造相對困難，成本昂貴，顯微位點周圍的血流通暢性限制了與抗體覆蓋位點接觸的CTC數量陽性富集陽性富集- CTCs-Chip 原理原理：聯合上皮細胞標志及腫瘤特異性標志通過