1、小鼠腫瘤模型的建立及鑒定 摘要 ：目的：建立小鼠荷瘤數據模型，探索腫瘤生長的本質及其發生發展的規律， 尋求對腫瘤生長及轉移有抑制作用的藥物及治療方法。方法：小鼠右腋下注射 H22腫瘤細胞，使小鼠荷瘤，觀察腫瘤生長，記錄體重數據并建立動物模型。結果：注射部位發生癌變，小鼠腫瘤生長明顯，切片結果證明實驗成功，模型構建完成，為靈芝多糖抗腫瘤研究奠定了動物實驗基礎。關鍵詞：小鼠，腫瘤，體重數據，動物模型:,. :H22a. :'s,a.: , , ,0 引言腫瘤是由機體中某些細胞基因發生突變為特征的一種全身性疾病，它的危害不僅在于它損害身體的各器官，而且還會產生各種腫瘤并發癥，如轉移、積水、疼

2、痛等，最終導致身體各器官功能衰竭而危及患者的生命。 腫瘤細胞除了以浸潤惡性生長方式向周圍侵蝕傳播之外，還可以通過其他途徑擴散到其它臟器和組織里邊去，使這些組織和臟器發生同樣的腫瘤，所以腫瘤的發現、診斷、治療要堅持三早、避免三晚。近幾年來，腫瘤化療取得了相當的進步，腫瘤患者生存時間明顯延長，特別是對白血病、惡性淋巴瘤等的治療有了突破，但對危害人類生命健康最嚴重的、占惡性腫瘤 90%以上的實體瘤的治療未能達到滿意的效果。藥學家和腫瘤學家越來越深刻地認識到：要提高腫瘤治療的療效，必須從腫瘤發生發展的機制著手，才能取得新的突破性進展。近年來，分子腫瘤學、分子藥理學的發展使腫瘤本質正在逐步闡明；大規模快

3、速篩選、組合化學、基因工程等先進技術的發明和應用加速了藥物開發進程； 抗腫瘤藥物的研究與開發已進入一個嶄新的時代。當今抗腫瘤藥物的發展戰略有以下幾點：以占惡性腫瘤 90%以上的實體瘤為主攻對象；從天然產物中尋找活性成分；針對腫瘤發生發展的機制，尋找新的分子作用 ( 酶、受體、基因 ) 靶點；大規模快速篩選 ( ); 新技術的導入和應用：組合化學、結構生物學、計算機輔助設計、基因工程、芯片、藥物基因組學 ( 功能基因組學與藥理學結合 ) 等。本實驗構建小鼠腫瘤的動物模型，為靈芝多糖抗腫瘤藥物的研究提供動物實驗基礎。1材料與方法1.1 實驗材料動物及分組： 取20只昆明鼠隨機分成 A組（ 10只）

4、，B組（ 5只），C組對照組（ 5只），編號飼養。試劑：無菌水，生理鹽水，臺酚藍， 2%冰醋酸， 甲醛，乙醇，二甲苯，石蠟等。儀器：離心機，顯微鏡，計數板，電子稱，超凈工作臺，溫箱，切片機等。1.2 實驗方法模型建立：取 H22腫瘤細胞， 3000轉離心分鐘，再用無菌生理鹽水洗滌腫瘤細胞3次，并做適當稀釋，取40微升細胞懸液加入10微升 0.4%臺酚藍染色并鏡檢計數，制成濃度為3*10 6個的腫瘤細胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種腫瘤細胞懸液0.2 毫升。：細胞計數：細胞計數液2%冰醋酸溶液。取50微升細胞懸液加入 450微升的細胞計數液中計數。1.3 記錄：接種完成后 , 逐日觀察接種部位有無感

5、染 , 腫瘤生長后有無自然消退, 用游標卡尺，每周測量腫瘤長徑a和短徑 b , 并計算平均直徑 , 即r = (a + b) /2 ，每天稱量小鼠體重和腫瘤并記錄，繪制曲線。1.4 制備組織切片：a處死小鼠，將腫瘤組織切成 1*1*0.4 的小塊。b將切塊的組織置于螺口瓶中，加入 40%甲醛固定，過夜。c固定完成后，倒出固定液，立即換上新鮮的 70%乙醇，洗脫兩次，室溫放置 20分鐘，繼而以 75%， 80%， 85%， 90%， 95%，100%乙醇脫水各兩次，每次 20分鐘。d從新鮮二甲苯除去乙醇，放置 2次，每次 10分鐘。e將樣品置于 60溫箱中融化石蠟 4次，每次 1.5 小時。f

6、將準備好的包埋工具，用一熱玻璃吸管加入融化的石蠟，再用熱鑷子快速將樣品移至充滿石蠟的模具中， 置于室溫，使起完全凝結。g從包埋模具中取出石蠟塊，放于室溫干燥處，切片。2結果2.1 腫瘤生長狀況 ：接種當天全部動物右后肢外側皮下接種部位均可見細胞懸液形成的液泡 , 半日后液體為組織所吸收 , 皮膚表面恢復平整。 從兩組小鼠腫瘤生長狀況看，前五天均無明顯生長跡象，從第六天開始腫瘤迅速出現并增大，從腫瘤曲線中可以發現，兩組小鼠的腫瘤生長速度不盡相同，明顯的分為三個檔次：第一類生長緩慢，達到一定大小后既不再生長或生長緩慢； 第二類先以較快的速度達到一定大小后，開始穩定的持續生長；第三類是少數個體以近似

7、恒定的高速生長，曲線斜率基本達到 1，生長迅速，效果明顯。 A組10號小鼠腫瘤于三周后萎縮消失，但生命力旺盛未見消瘦。 4 號和 8號小鼠分別于第二十天，二十一天腫瘤處皮膚破裂，有積液流出。 1號小鼠喉部于第二十三天出現另一腫瘤，大小約 5*5 ，持續生長并于第二十七天與腋下腫瘤相連。 7號小鼠腫瘤兩周后擴散到右前肢，基本喪失行動能力，于第三周死亡。 B組5號小鼠于第十七天在右頸部出現另一腫瘤，大小約 1*2 ，一直沒有繼續增大。C組小鼠在近一個月的時間里平均體重增幅為 2g，增幅平緩。體重曲線與組曲線對比明顯。2.2 體重數據A組體重數據 單位A1A2A3A4A5A6A7A83.1131.9

8、824.5728.828.1735.2225.4728.0429.973.1230.1124.4329.128.6634.6425.3528.6330.063.1330.5424.829.428.8434.5226.9829.6730.143.1431.1325.4329.629.6634.9428.3530.6330.63.1531.5925.6429.5529.8734.5431.0532.0430.043.1632.1825.729.4330.7334.6832.4233.0727.083.1732.726.6830.9631.7836.1233.7332.4529.263.1832.1

9、926.329.4530.8633.5932.3630.4528.743.1933.3926.1930.1130.932.433.1728.4129.173.233.6826.0130.5430.1532.8432.9828.9530.543.2134.2126.4131.8130.1933.1832.5929.5431.483.2234.3826.9231.329.7433.6432.7330.932.633.2334.7827.331.1830.8534.3631.1831.0134.13.2436.3328.1330.831.7135.7130.8834.6437.183.2537.85

10、27.9330.4332.1336.730.0735.6839.123.2637.4928.3630.8632.1935.833.5937.2440.243.2737.128.0131.6233.0737.2831.138.0841.73.2835.6426.829.2231.2535.0731.4236.4740.253.2937.9827.1732.7132.6337.6133.7532.8442.923.338.0626.7132.633.3838.3134.06死亡44.463.3138.827.2331.933.538.7234.16死亡45.254.138.4427.332.083

11、4.6539.835.07死亡48.394.240.0227.532.5734.4140.9934.15死亡49.524.342.427.9332.4231.5641.9335.44死亡43.014.442.6628.5532.2530.78死亡35.48死亡死亡4.545.228.4633.2630.79死亡37.38死亡死亡4.645.7828.6432.8130.08死亡36.31死亡死亡4.748.5228.8831.0529.92死亡36.58死亡死亡A組腫瘤數據單位A1A2A3A4A5A6A7A8A93.11000000003.12000000003142

12、21221543.153324217.57.53.1656253210.593.1787375314.510.53.1897464516113.19108474519.5113.2118484.5520.512.513.2113.585.5106.5522163.221486127523.5173.2315751112623.5193.24178411.51362422.513.2517.5941115527.5223.2618541314527.527.53.27186.561216728.530.53.2818561316727.529.53.2920551416728.5333.3226

13、61316.510死亡343.312256142010.5死亡36.54.12266192111死亡36.54.22267171911死亡334.3224.56162210.5死亡384.422.55716死亡8.5死亡384.524.55618.5死亡9死亡死亡4.6245821.5死亡7.5死亡死亡24.725.54.5820死亡8死亡死亡2A組腫瘤變化曲線40A135A230A325A4直徑 /mm20A515A6105A70A81357911 13 15 17 19 21 23 25 27A9時間A10A組小鼠平均體重39373533體重 /g 31292725時間B組體重數據單位B1

14、B2B3B4B5平均值3.1626.4929.3427.0723.8325.0326.3523.1726.3428.5627.3124.6525.9826.5683.1826.4528.4726.8825.3926.1526.6683.1926.1228.8426.4526.7726.4526.9263.226.5529.0127.2128.4926.7227.5963.2125.629.2226.6529.1827.527.633.2227.1628.3233.0228.2528.5929.0683.2326.3329.5932.5829.8629.2329.5183.2426.8929.7

15、13329.6230.4429.9323.2527.2930.3332.3729.4730.4329.9783.2625.1928.7932.328.0930.0728.8883.2728.130.8634.2730.5431.1230.9783.2827.663034.383030.4130.493.292831.1634.8531.731.3731.4163.328.131.4734.9331.330.6931.2983.3128.3931.4135.0233.1531.3331.864.128.3230.8734.5632.2630.9431.394.228.7231.2133.2732

16、.1131.131.2824.329.9432.4634.7833.9831.7432.584.430.8532.7734.734.5231.932.9484.531.231.534.0535.732.2232.9344.631.6332.4434.6834.7333.1733.334.730.9432.6934.134.532.3132.908B組腫瘤數據單位B1B2B3B4B53.16000003.17000003.18000003.19000003.2000003.21001003.2201.5111.53.2332.52223.243.52.5524.53.2572.55253.267

17、2.55253.277.535.5263.287.536.5273.2983.57.5263.31058283.31123.57.52.574.11157374.2115849.54.3124.586104.410.55.56.56.5104.5135.56.58.59.54.613.55.5699B組小鼠平均體重34323028體重 /g262422201357911131517192123時間B組腫瘤曲線1614系列11210系列2直徑 /mm 8系列36系列44系列52013579111315 171921時間C組體重數據單位C1C2C3C4C5平均值3.1627.0226.5428.6

18、127.4525.9327.113.1727.326.6428.4527.6125.8427.1683.1827.6126.8328.6427.8725.7527.343.1927.8426.7528.8727.9125.9327.463.227.6126.6428.9428.1626.1627.5023.2127.9426.7228.6428.3626.7127.6743.2227.5426.9328.7628.7726.2627.6523.2327.6126.9728.3328.4525.9427.463.2428.8227.2128.9428.3726.7728.0223.2528.96

19、27.1629.2128.4526.4528.0463.2627.0626.5928.0727.1625.1826.8123.2728.7927.5129.5428.6726.6128.2243.2828.5427.4829.3128.5226.0827.9863.2928.7427.5929.6528.3726.6128.1923.329.1327.9429.4528.6426.4828.3283.3129.1328.0629.9128.9226.6828.544.129.2428.1529.6729.0626.8628.5964.229.428.2230.1529.3726.9128.814.329.5128.4130.6829.4827.0329.0224.429.3328.3930.4529.6327.6129.0824.529.4228.3630.7929.4527.8629.1764.629.3828.4630.6829.3827.3529.054.729.8828.0730.8129.6127.2729.128C組小鼠平均體重變化曲線302928體重 /g2726251357911131517192123時間三組平均體重變化對照曲線4035A組體重 /g 30B組C組2520時間2.3 腫瘤照片3討論：實驗腫瘤學的需要導致腫瘤動物模型的產生 , 借以研究人類腫瘤的