1、概述 網織紅細胞網織紅細胞(reticulocyte，Ret)是介于晚是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡階段細胞，略幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡階段細胞，略大于成熟紅細胞。網織紅細胞是有核紅細胞剛剛大于成熟紅細胞。網織紅細胞是有核紅細胞剛剛失去核的階段，仍屬未完全成熟的紅細胞，漿內失去核的階段，仍屬未完全成熟的紅細胞，漿內尚殘留有嗜堿性尚殘留有嗜堿性RNA，經堿性染料（如天青，經堿性染料（如天青B、煌焦油藍或新亞甲藍）活體染色后，在包體內可煌焦油藍或新亞甲藍）活體染色后，在包體內可見藍色點狀或網狀結構，故名網織紅細胞。見藍色點狀或網狀結構，故名網織紅細胞。概述 紅細胞在骨髓中生成，至發育

2、為成熟紅細胞，經紅細胞在骨髓中生成，至發育為成熟紅細胞，經歷了不同階段：干細胞、原始紅細胞、早幼紅細胞、中歷了不同階段：干細胞、原始紅細胞、早幼紅細胞、中幼紅細胞、晚幼紅細胞、網織紅細胞，最后發育為成熟幼紅細胞、晚幼紅細胞、網織紅細胞，最后發育為成熟紅細胞。隨著細胞的成熟，紅細胞。隨著細胞的成熟，RNA含量逐漸減低，至細胞含量逐漸減低，至細胞完全成熟后消失或接近消失，即紅細胞中網線狀結構越完全成熟后消失或接近消失，即紅細胞中網線狀結構越多，表示細胞越幼稚。多，表示細胞越幼稚。ICSH（國際血液學標準委員會）（國際血液學標準委員會）將將Ret分為分為4型：型：型（絲球型）、型（絲球型）、型（花冠

3、型或網型（花冠型或網型）、型）、型（破網型）、型（破網型）、型（顆粒型）。正常生理狀型（顆粒型）。正常生理狀態下，態下，型只存在于骨髓，型只存在于骨髓，型在外周血也很難見到，型在外周血也很難見到，型僅有少量釋放到外周血，因此外周血網織紅細胞計型僅有少量釋放到外周血，因此外周血網織紅細胞計數時以數時以型為主。型為主。網織紅細胞分型ICSHICSH將網織紅細胞分類四型將網織紅細胞分類四型：IRF（未成熟網織紅細胞比例未成熟網織紅細胞比例 ）= HFR + MFRI I型（絲球型）：紅細胞幾乎被網織物充滿，此型亦僅見于正常骨髓中。型（絲球型）：紅細胞幾乎被網織物充滿，此型亦僅見于正常骨髓中。IIII

4、型（網型）：位于紅細胞中央線團樣結構，開始松散、此型大量存在于骨髓中。型（網型）：位于紅細胞中央線團樣結構，開始松散、此型大量存在于骨髓中。型（破網型）：網織結構稀小，呈不規律枝點狀排列，外周血中可見少量。型（破網型）：網織結構稀小，呈不規律枝點狀排列，外周血中可見少量。IVIV型（顆粒型）：胞漿中嗜堿物質很少，呈分散的細顆粒、短絲狀，正常外周血型（顆粒型）：胞漿中嗜堿物質很少，呈分散的細顆粒、短絲狀，正常外周血中的網織細胞大多見于此型。中的網織細胞大多見于此型。nnnnnHFRnMFRnLFR網織紅細胞檢測進展1.手工法手工法2.血細胞分析儀法血細胞分析儀法3.流式細胞儀法和專用網織紅細胞分

5、析儀流式細胞儀法和專用網織紅細胞分析儀1.手工法 手工法分玻片法和試管法。由于玻片法容易使混合血液中的水手工法分玻片法和試管法。由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸發，染色時間偏短，因此結果偏低；試管法容易掌握，重復性分蒸發，染色時間偏短，因此結果偏低；試管法容易掌握，重復性較好，必要時還可以從混合血液中再取標本重新涂片復查。試管法較好，必要時還可以從混合血液中再取標本重新涂片復查。試管法被列為手工法被列為手工法Ret計數的參考方法。按衛生部計數的參考方法。按衛生部全國臨床檢驗操作規全國臨床檢驗操作規程程第第2版，采用試管法用煌焦油藍染液對血液標本進行紅細胞活體版，采用試管法用煌焦油藍染液對血液

6、標本進行紅細胞活體染色、制片，選擇細胞分布較均勻、厚薄適中的體尾交界處，每份染色、制片，選擇細胞分布較均勻、厚薄適中的體尾交界處，每份標本油鏡下標本油鏡下 ，Ret6 %，計數紅細胞，計數紅細胞1000個；個；3% 5 %計數紅細計數紅細胞胞2000個；個；1 %2% 應計數紅細胞應計數紅細胞4000個；小于個；小于1 %計數紅細胞計數紅細胞10000個。個。 網織細胞的活體染色: 染色時間:28min 比例:用2%的煌焦油蘭染色以滴數計1:5時,網織細胞數開始減少,1:2為最佳. 涂片部位:中部為佳. 玻片干燥程度:立即干燥者最佳.普通光學顯微鏡法:計數1000個RBC中的Ret,以百分數表

7、示. 傳統的顯微鏡計數方法操作較繁瑣、影響結果的因素較傳統的顯微鏡計數方法操作較繁瑣、影響結果的因素較多。近年來，國內開始使用國際血液學標準化委員會多。近年來，國內開始使用國際血液學標準化委員會(ICSH)推薦的推薦的Miller窺盤進行計數，規范了計算區域，減窺盤進行計數，規范了計算區域，減少了實驗誤差，使結果準確性有所提高少了實驗誤差，使結果準確性有所提高(衛生部臨檢中心衛生部臨檢中心建議，建議，CV控制在控制在15 %之內之內)。Miller窺盤法是將一種光學窺盤法是將一種光學圓片狀圓片狀Miller窺盤安放在顯微鏡目鏡中，窺盤中有面積比窺盤安放在顯微鏡目鏡中，窺盤中有面積比例為例為1：

8、9的的2個正方形計數方格，只需計數個正方形計數方格，只需計數19小方格內小方格內的紅細胞即可準確估量出整個大方格內的紅細胞數量的紅細胞即可準確估量出整個大方格內的紅細胞數量 計算方法 1.Miller窺盤法：網織紅細胞（窺盤法：網織紅細胞（Retic）百分率百分率(%)= （大方格（大方格內內Retic總數）總數）/（小方格內（小方格內RBC總數總數9）100% 2.直接計數法：網織紅細胞（直接計數法：網織紅細胞（Retic）百分率百分率(%)= 多個視野多個視野內內Retic總數總數/多個視野內多個視野內RBC總數總數100%衛生部臨床檢驗中心控制Ret計數CV15%需鏡檢的RBC數目手工法

9、網織紅細胞活體染色染料評價參考值成人：成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生兒：新生兒：0.02-0.06（2%-6%）兒童：兒童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人絕對值成人絕對值（24-84） 109/L 2.血細胞分析儀法 雖然儀器法雖然儀器法Ret計數有諸多優點，而且精密度明顯計數有諸多優點，而且精密度明顯優于手工法，但也存在一些不足優于手工法，但也存在一些不足 ：第一，所有儀器分析：第一，所有儀器分析的基本原理都是檢測的基本原理都是檢測Ret內內RNA 的存在量來決定其百分的存在量來決定其百分率和絕對值，當某些患者血液中有核細胞或淋巴細胞異率和絕對值，當

10、某些患者血液中有核細胞或淋巴細胞異常增加時，可導致常增加時，可導致Ret計數結果的假性增加；第二，冷計數結果的假性增加；第二，冷凝集素存在、紅細胞的聚集、某些病理因素或藥物都能凝集素存在、紅細胞的聚集、某些病理因素或藥物都能使紅細胞產生自身熒光；第三，自動化分析儀結果的準使紅細胞產生自身熒光；第三，自動化分析儀結果的準確性除了依賴于儀器本身的良好性能外，還應有良好的確性除了依賴于儀器本身的良好性能外，還應有良好的質控物隨時檢測儀器的狀態。另外，儀器成本高、價格質控物隨時檢測儀器的狀態。另外，儀器成本高、價格貴，基層醫療單位投入較為困難。貴，基層醫療單位投入較為困難。 說明:雖然大多數儀器都利用

11、了流式細胞技術,但它們在應用的染料,檢測技術方面還是有各自的特點.通常熒光的強度,光吸收量,和光散射量與網織細胞的RNA含量成正比.儀器型號儀器型號處理處理染色染色檢測技術檢測技術Bayer ADVIA 120活體Oxazine 750光吸收Bayer H*3活體Oxazine 750光吸收Abbott CellDyn CD3200活體新亞甲藍光散射Abbott CellDyn CD3500活體新亞甲藍光散射Abbott CellDyn CD3700活體新亞甲藍光散射Abbott CellDyn CD4000熒光CD4K 530熒光法Becton Dickison ReticCount FAC

12、SCount 熒光噻唑橙熒光法Beckman Coulter STKS活體新亞甲藍VCSBeckman Coulter GENS活體新亞甲藍VCSSysmex XE2100熒光聚次甲基熒光染料光散射ABX Pentra 120 Retic熒光噻唑橙光散射3.流式細胞儀法和專用網織紅細胞分析儀 流式細胞儀流式細胞儀(flowcytometry，FCM)是一種多用是一種多用途的精密分析儀器，應用派若寧、吖啶橙、噻唑橙等途的精密分析儀器，應用派若寧、吖啶橙、噻唑橙等這些特殊的熒光染料與這些特殊的熒光染料與Ret中的中的RNA結合，當結合，當FCM 發發出的激光照射于細胞上時，根據細胞能否發射出特定出

13、的激光照射于細胞上時，根據細胞能否發射出特定顏色的熒光，通過單參數定量測定顏色的熒光，通過單參數定量測定RNA，從而精確測，從而精確測定定Ret占成熟紅細胞的比率。還可根據激光照射后發射占成熟紅細胞的比率。還可根據激光照射后發射出的熒光強度，或光吸收量大小、光散射量多少等參出的熒光強度，或光吸收量大小、光散射量多少等參數的比例關系對數的比例關系對Ret成熟程度進行分群，將其劃分為低成熟程度進行分群，將其劃分為低熒光強度網織紅細胞熒光強度網織紅細胞(LFR)、中熒光強度網織紅細胞、中熒光強度網織紅細胞(MFR)、高熒光強度網織紅細胞、高熒光強度網織紅細胞(HFR)。3.流式細胞儀法和專用網織紅細

14、胞分析儀 FCM 測定精密度明顯高于手工法測定精密度明顯高于手工法36倍，倍，可在數秒中檢測可在數秒中檢測20000個以上的紅細胞，如個以上的紅細胞，如Ret在在1.76.6 %，其平均，其平均CV值在值在4.3 %。不足之處，流式細胞儀計數不足之處，流式細胞儀計數Ret受受HOWELLJolly小體、瘧原蟲和血小板等干擾。小體、瘧原蟲和血小板等干擾。6 6項網織紅系參數項網織紅系參數網織紅細胞百分比網織紅細胞百分比RET%RET%網織紅細胞數網織紅細胞數RET#RET#未成熟網織紅細胞比例未成熟網織紅細胞比例IRFIRF低熒光強度網織紅細胞比率低熒光強度網織紅細胞比率LFRLFR中熒光強度網

15、織紅細胞比率中熒光強度網織紅細胞比率MFRMFR高熒光強度網織紅細胞比率高熒光強度網織紅細胞比率HFRHFRRBCLFRMFRWBCPLT-OHFRRET%=RET# / RET%=RET# / RBC-ORBC-ORET# =RET# =RBC-ORBC-O* *RET% RET% IRF=MFR+HFRIRF=MFR+HFRLFR=LFR#/ RET# -OLFR=LFR#/ RET# -OMFR=MFR#/ RET# -OMFR=MFR#/ RET# -OHFR=HFR#/ RET# -OHFR=HFR#/ RET# -Ol RET%-RET%-網織紅細胞占全部紅細胞的比率網織紅細胞占全

16、部紅細胞的比率l RET#-RET#-網織紅細胞絕對數目網織紅細胞絕對數目l IRF-IRF-未成熟網織紅細胞比例未成熟網織紅細胞比例=HFR+MFR=HFR+MFRl LFRIVLFRIV型網織紅細胞型網織紅細胞l MFRIIIMFRIII型網織紅細胞型網織紅細胞l HFRIHFRI型和型和IIII型網織紅細胞型網織紅細胞小結網織紅細胞計數方法學評價臨床意義臨床意義 1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 再障再障時，明顯降低。絕對值低于時，明顯降低。絕對值低于5109/L可做為急性再障可做為急性再障的輔助診斷指標。的輔助診斷指標。失血、多數失血、多數溶血性貧血溶

17、血性貧血患者網織紅細胞可明顯高于正常。患者網織紅細胞可明顯高于正常。營養不良性貧血營養不良性貧血在治療前網織紅細胞可保持正常、輕度升在治療前網織紅細胞可保持正常、輕度升高或降低。高或降低。（2 2）評價療效）評價療效網織紅細胞反應：網織紅細胞反應：IDA或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素生素B12或葉酸治療或葉酸治療23d后，網織紅細胞計數值開始上升，后，網織紅細胞計數值開始上升，710d達到最高達到最高(10%左右左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞、血紅蛋白開始升高。紅細胞、血紅蛋白開始升高。骨髓移植、骨髓移植、EPO治療后：治

18、療后：若骨髓開始恢復造血功能，若骨髓開始恢復造血功能，RMI升高，網織紅細胞計數值上升。升高，網織紅細胞計數值上升。（3 3）放、化療監測）放、化療監測 機體接受放、化療后，如出現骨髓抑制，早期機體接受放、化療后，如出現骨髓抑制，早期HFR和和MFR降低，然后才檢測到網織紅細胞的降低。而停止放、化療，降低，然后才檢測到網織紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復后，又見上述指標依次上升。可指導臨床醫骨髓功能恢復后，又見上述指標依次上升。可指導臨床醫師適時調整治療方案，避免造成嚴重的骨髓抑制。師適時調整治療方案，避免造成嚴重的骨髓抑制。網織紅生成指數網織紅生成指數（Reticulocyte p

19、roduction index,RPI） RPI=RPI=病人網織紅細胞（病人網織紅細胞（% %）/ /2 2 * * 病人病人HCT/HCT/正常人正常人HCTHCT（男男0.450.45，女，女0.400.40） 臨床應用：臨床應用： 3 3提示溶血性貧血或急性失血性貧血；提示溶血性貧血或急性失血性貧血；網織紅細胞檢測的臨床應用 Ret計數及其各種參數計數及其各種參數(IRF、RMI、MRV、RPI等等)在貧血的診治、骨髓移植、在貧血的診治、骨髓移植、腫瘤的放化療和藥物療效檢測等方面具腫瘤的放化療和藥物療效檢測等方面具有重要參考價值。有重要參考價值。1網織紅細胞計數的應用 貧血的恢復是通過

20、骨髓釋放紅細胞生成素貧血的恢復是通過骨髓釋放紅細胞生成素(EPO)完成的，完成的，Ret增加可被看成是骨髓造血功能對貧血的增加可被看成是骨髓造血功能對貧血的正常反應。失血性貧血時患者正常反應。失血性貧血時患者Ret各項指標會顯著增各項指標會顯著增高，失血高，失血510 d內內Ret可達高峰，出血停止后可達高峰，出血停止后2周可周可恢復正常，臨床上可應用此參數和特點來判別出血恢復正常，臨床上可應用此參數和特點來判別出血是否停止；缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血時也可見是否停止；缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血時也可見患者患者Ret輕度增加。輕度增加。Ret降低主要和造血功能減低有降低主要和造血功能減低有關，

21、典型病例為原發性再生障礙性貧血、溶血性再關，典型病例為原發性再生障礙性貧血、溶血性再生障礙性危象；此外還有急性白血病、繼發性再生生障礙性危象；此外還有急性白血病、繼發性再生障礙性貧血、化療和放療引起的骨髓造血功能抑制障礙性貧血、化療和放療引起的骨髓造血功能抑制或減退等或減退等。2網織紅細胞生成指數(RPI)的應用 RPI代表網織紅細胞的生成相當于正常代表網織紅細胞的生成相當于正常人的多少倍。不同生理、病理情況下，人的多少倍。不同生理、病理情況下，Ret從骨髓釋放人外周血所需時間不同，故從骨髓釋放人外周血所需時間不同，故Ret計數值不能確切反映骨髓紅細胞系統造血計數值不能確切反映骨髓紅細胞系統造

22、血功能，還應考慮功能，還應考慮Ret生存期限。通常生存期限。通常Ret生生存期限約為存期限約為2d，若未成熟網織紅細胞提前，若未成熟網織紅細胞提前釋放入血，釋放入血，Ret生存期限將延長，為了糾正生存期限將延長，為了糾正網織紅細胞提前釋放引起的偏差，用網織紅細胞提前釋放引起的偏差，用RPI來來反映反映Ret生成速率。生成速率。 2網織紅細胞生成指數(RPI)的應用 RPI= RET% 被測被測HCT/ 正常人正常人HCT 1/ RET 成熟天數成熟天數。釋放入外周血的網織紅細釋放入外周血的網織紅細胞越趨于幼稚，其成熟時間越長。由于網織紅胞越趨于幼稚，其成熟時間越長。由于網織紅細胞體積大于成熟紅

23、細胞，大量網織紅細胞的細胞體積大于成熟紅細胞，大量網織紅細胞的提前釋放在某種程度上影響血細胞比容的測定提前釋放在某種程度上影響血細胞比容的測定結果。經觀察，網織紅細胞成熟時間與結果。經觀察，網織紅細胞成熟時間與Hct存存在下列關系在下列關系 2網織紅細胞生成指數(RPI)的應用 RPI在估計紅細胞生成有效性和貧血起在估計紅細胞生成有效性和貧血起因的分類方法中起到重要作用。因的分類方法中起到重要作用。Kinetic等等應用應用RPI較為準確地表達出較為準確地表達出Ret的成熟狀態，的成熟狀態，從而對貧血的類型進行劃分，如健康者平均從而對貧血的類型進行劃分，如健康者平均RPI為為1，當，當RPI3

24、時表示紅細胞生成增加，時表示紅細胞生成增加，如溶血性貧血和治療后的營養性貧血；而如溶血性貧血和治療后的營養性貧血；而RPI2時為紅細胞生成減少，如缺鐵性貧血；時為紅細胞生成減少，如缺鐵性貧血；對于對于EPO缺乏、無效造血等情況時，缺乏、無效造血等情況時，RPI多多在在23之間，之間，Kinetic法則還無法確定。法則還無法確定。3網織紅細胞成熟度(IRF)的應用 IRF為不成熟的為不成熟的Ret與總與總Ret的比值，健康者平均值為的比值，健康者平均值為0.22，參考范圍參考范圍0.10.38，IRF越大表示不成熟的越大表示不成熟的Ret的數量越多。這的數量越多。這種幼稚種幼稚Ret水平的改變一

25、般比患者水平的改變一般比患者HGB、血小板、白細胞和臨床、血小板、白細胞和臨床癥狀的變化出現更早。癥狀的變化出現更早。IRF和和HFR的增高在很多白血病患者化療的增高在很多白血病患者化療中是與粒細胞反應一致的指標和骨髓移植后恢復的第一信號中是與粒細胞反應一致的指標和骨髓移植后恢復的第一信號 。IRF與與Ret#和和RPI呈一弱的、顯著的正相關：呈一弱的、顯著的正相關：IRF增加增加(0.23)，一，一般伴有般伴有Ret#增加，提示患者對于貧血有足夠的紅系反應；若增加，提示患者對于貧血有足夠的紅系反應；若IRF0.23，且，且RPI2，則說明紅系造血活性下降，則以慢性腎功能，則說明紅系造血活性下

26、降，則以慢性腎功能不全居多；不全居多；Ret#正常或略低，正常或略低，RPI2，但，但IRF0.23，見于急性感，見于急性感染、鐮狀細胞性貧血危象、妊娠和染、鐮狀細胞性貧血危象、妊娠和MDS等狀況。等狀況。IRF是評價貧血是評價貧血紅系增生活性的一項新的有用的指標，紅系增生活性的一項新的有用的指標，IRF結合結合Ret#和和RPI可以可以為進一步闡明貧血分類提供有價值的信息。為進一步闡明貧血分類提供有價值的信息。用于促紅細胞生成素貧血治療 對溶貧患者重組人紅細胞生成素對溶貧患者重組人紅細胞生成素( (rHuEPOrHuEPO) ) 治療過程中，給予適量鐵劑補治療過程中，給予適量鐵劑補充時，充時

27、，HFRHFR 的變化的變化都要比傳統的紅細胞和鐵代謝參數更為顯著，可作為診都要比傳統的紅細胞和鐵代謝參數更為顯著，可作為診斷缺鐵性紅細胞斷缺鐵性紅細胞的可的可靠參數，也可以對溶血患者在利用靠參數，也可以對溶血患者在利用rHuEPOrHuEPO 治療過程中治療過程中的反應進的反應進行監測行監測 觀察貧血療效觀察貧血療效 缺鐵性貧血或者巨幼細胞性貧血有效治療后缺鐵性貧血或者巨幼細胞性貧血有效治療后2 23 3天后天后IRFIRF達到高峰達到高峰2 23 3天后天后RetRet開始上升開始上升貧血的分型診斷及治療監測骨髓移植后造血功能恢復的監測 IRFIRF是最早出現的骨髓造血功能恢復的敏感指標（

28、外周血粒細胞計數和是最早出現的骨髓造血功能恢復的敏感指標（外周血粒細胞計數和血小板用于移植監測均不理想）血小板用于移植監測均不理想） 網織紅細胞計數是一個獨立監測骨髓造血恢復的附加參網織紅細胞計數是一個獨立監測骨髓造血恢復的附加參數：如第數：如第21 d 21 d RET# 15RET# 1510109 9/L /L ，常表示無移植并發癥，常表示無移植并發癥, ,而感染和輸血都不會影響網而感染和輸血都不會影響網織紅細胞計數。但若織紅細胞計數。但若 15 1510109 9/L /L 并伴有中性粒細胞和血小板的上并伴有中性粒細胞和血小板的上升，升，可可能提示骨髓移植失敗能提示骨髓移植失敗。放、化療對造血功能影響的監測 在癌癥化療過程中，在癌癥化療過程中，IRFIRF是反映骨髓抑制和恢復的一項非常敏感的指是反映骨髓抑制和恢復的一項非常敏感的指標標 在骨髓完全受抑制階段，在骨髓完全受抑制階段，IRFIRF可降為零；可降為零； 化療后骨髓受到抑制，早期恢復時，化療后骨髓受到抑制，早期恢復時，IRFIRF首先升高，并明顯高于正常，首先升高，并明顯高于正常，而網織紅細胞計數升高得較晚。而網織紅細胞計數升高得較晚。用于促紅細胞生成素貧血治療 對溶貧患者重組人紅細胞生成素對溶貧患者重組人紅細胞生成素( (r