1、反相高效液相色譜法測定開郁舒肝丸中大黃素的含 【摘要】 目的：建立高效液相色譜法測定開郁舒肝丸中大黃素含量的方法。 方法：采用 C18 色譜柱（4.6mm 250mm 5 卩 m，以甲醇-0.1%磷酸（85:15 ） 為流動相，流速為 1.0ml min 1,檢測波長為 254nm 結果：大黃素進樣量在 0.1051.375 卩 g 線性范圍內呈良好的線性關系，相關系數為 0.9999，回收率 為 99.01%, RSD 為 1.1%。結論：本方法是可靠、簡便的開郁舒肝丸中大黃素含 量測定新方法。 【關鍵詞】 高效液相色譜法開郁舒肝丸大黃素含量測定 HPLC Determ in atio n

2、of Cinn amaldehyde in kaiyu shuga n pill 【Abstract 】 Objective:To establish an HPLC method for determ in ati on of Cinn amaldehyde in kaiyu shuga n pill .Method:The chroma tographic colu mn of Shimadu VP-ODS was used .The mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid （85： 15） and the flow

3、rate was 1.0ml min-1.The detertion wavelength was 254nm .Results : The linear of scutellarin was 0.105 1.375 卩 g （r=0.9999 ） .The average recovery of assay was 99.01% with RSD 1.1% .Conclsion : The HPLC method is simple and reliable for the Cinn amaldehyde in an ti- ton sillitis matches . 【Key words

4、 】HPLC kaiyu shugan pill ； Cinnamaldehyde ； determ in ati on 開郁舒肝丸為臨床常用的中成藥，由當歸、蒲黃、五靈脂（醋 炒）、赤芍、小茴香、川芎、肉桂、大黃等十七味中藥組成，具溫經活血、散 寒止痛功效。現執行標準中國藥典 2005 年版一部，此標準只有赤芍的薄層 鑒別項目，無含量測定項目。筆者經多次試驗，研究建立了高效液相色譜法測 定開郁舒肝丸中大黃素的含量，以作為開郁舒肝丸的質量控制方法之一。結果 表明，此法能使被測組分很好地分離，且在測定范圍內線性關系良好，能迅 速、準確地指導生產和監控開郁舒肝丸質量。 1 儀器與試藥 日本島津 L

5、C-10ATVF 高效液相色譜儀，SPD-10AV 紫外檢測器，浙 江大學 N2000 雙通道色譜工作站。 開郁舒肝丸（吉林市雙士藥業有限公司生產，批號： 070801， 070802， 070803），大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定 用，批號： 110710-200212）。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試藥均為分析 純。 2 方法與結果 2.1 色譜條件與系統適用性 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。 色譜柱：VP-ODS 250 4.6，柱號 4042784;甲醇-0.1%磷酸（85:15 ）為流動 相；檢測波長為 254nm 流速：1.0ml min 1。柱溫：室溫（2

6、5C）。理論板 數按大黃素峰計算應不低于 3000。 2.2 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品 10mg 置 100ml 量 瓶中，用 50%?醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取大黃素溶液 5ml，置 100ml 量瓶中，加 50%甲醇至刻度，搖勻，用 0.45 卩 m 微孔濾膜過濾，即得。 （大黃素每 1ml 中含 5 卩 l ）。 2.3 供試品溶液的制備 取本品 6g，精密稱定，研細，取 1g，精密 稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘， 放冷，稱重，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續 濾液 25ml，濃縮至干，加 30

7、%醇-鹽酸（10:1 ） 35ml，沸水浴回流水解 1 小 時，放冷至室溫，轉移至分液漏斗中，用氯仿提取 5 次，每次 20ml，合并氯仿 層，水洗兩次，每次 30ml，棄去水層，氯仿層低溫蒸干，殘渣加甲醇溶解，定 量轉移至 10ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法 :分別精密吸 取對照品溶液與供試品溶液各 10 卩 l，注入液相色譜儀，測定，即得。 2.4 陰性對照品溶液的制備及測定 為進一步考察實驗設計及含量 測定方法的可行性和專屬性，取不含大黃的處方，按制備工藝制成缺大黃的陰 性對照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。精密吸取 10 卩 l 注入液相色譜儀，按上

8、述方法測定，結果表明大黃陰性對照品的色譜圖在大黃 素相應的保留時間附近無干擾峰，溶劑峰亦無干擾，證明本法具有良好的專屬 性。 2.5 穩定性考察 精度吸取大黃素對照品溶液 10 卩 l，在上述色譜 條件下，于 0、2、4、8、24hr 分別進樣，結果大黃素峰面積的相對偏差 (RSD 為 0.45% (n=5)，表明大黃素對照品溶液在 24hr 內穩定。 2.6 線性關系考察 精密吸取大黃素對照品溶液，分別進樣 5、 10、15、20、25、30 卩 l 測定，以進樣量(卩 g)為橫坐標，峰面積為縱坐標， 得線性回歸方程為：y=4475603.341584x 9060.425 (r=0.9999

9、6 )。線性范圍 0.105 1.375 卩 g。 2.7 精密度考察 精密吸取供試液，連續進樣 5 次，進樣量 20 卩 l，以峰面積積分值計算，RSD 為 0.12%。結果表明，本方法操作精密度良 好。 2.8 重復性考察 取開郁舒肝丸(批號：070801 )獨立進行五次試 驗，依法測定，結果大黃素的平均含量為 4.6mg 丸1，RSD 為 0.10%。 2.9 回收率考察 精密量取已知含量的開郁舒肝丸(批號 070802) 5 份，每份20ml精密量取， 精密加入一定量大黃素， 按 2.2項下測定法測得回 收率為 99.01%, RSD 為 1.1% (n=5)。 2.10 樣品測定 依上述方法測定 3 批樣品，以外標法計算樣品中大黃 素含量，高效液相色譜圖如下。 3 結論 根據中國藥典 2005 年版一部標準，開郁舒肝丸具溫經活血， 散寒止痛功效。用于寒凝血瘀所致的月經后期、痛經、產后腹痛，癥見行經后 錯、行經小腹冷痛、經血紫暗、有血塊、產后小腹疼痛喜熱、拒按。為臨床廣 泛應用的婦科用藥。本文建立的高效液相色譜法測定開郁