1、August 6, 2021 寶日醫生物技術（北京）有限公司寶日醫生物技術（北京）有限公司 Clontech 慢病毒相關技術介紹 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 2 28/6/20218/6/2021 背景簡介背景簡介 病毒載體病毒載體基因傳遞基因傳遞 慢病毒載體慢病毒載體 容易容易 轉染轉染 物理方法物理方法 非病毒載體非病毒載體 Clontech 慢病毒相關產品 可以轉染非分裂細胞胞 實現持久有效表達 逆轉錄病毒載體逆轉錄病毒載體 腺病毒載體腺病毒載體 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 3 38/6/20218/6/2021 內容介紹內容介紹 1 提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴

2、度的策略2 提高轉導效率的方法提高轉導效率的方法3 Lenti-X慢病毒包裝系統慢病毒包裝系統 1 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 4 48/6/20218/6/2021 Lenti-X慢病毒包裝系統慢病毒包裝系統 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 5 58/6/20218/6/2021 背景簡介背景簡介 慢病毒慢病毒 的應用的應用 生物生物 安全性安全性 病毒病毒 包裝滴度包裝滴度 靶細胞靶細胞 轉導效率轉導效率 l 病毒包裝流程示意圖病毒包裝流程示意圖 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 6 68/6/20218/6/2021 第四代包裝系統第四代包裝系統Lenti-X HTX

3、 Lenti-X HTX 將將Gag-Pro和和RT-IN分離，降低產生具有復制分離，降低產生具有復制 能力病毒的幾率，大大提高生物安全性。能力病毒的幾率，大大提高生物安全性。 創新點創新點I 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 7 78/6/20218/6/2021 第四代包裝系統第四代包裝系統Lenti-X HTX Lenti-X HTX 引入引入Tet-Off誘導表達系統，誘導表達系統，大大提高病毒滴度！大大提高病毒滴度！ 創新點創新點II 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 8 88/6/20218/6/2021 Lenti-X包裝系統包裝系統 通過流式細胞儀測定：通過流式細胞儀測

4、定： Lenti-X包裝系統獲得的病毒滴度包裝系統獲得的病毒滴度 高高 于于108 IFU/ml； 只需只需10 l 病毒上清即可轉導大部病毒上清即可轉導大部 分分HeLa細胞。細胞。 Lenti-XLenti-X 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 9 98/6/20218/6/2021 Clontech慢病毒系統的優點慢病毒系統的優點 將將 Gag和和Pol分離分離 同時轉染同時轉染5個載體才可以包裝出具有感染個載體才可以包裝出具有感染 性的病毒性的病毒 更高的生物更高的生物 安全性安全性 引入引入Tet-Off技術技術 包含改善載體性能和提高病毒滴度的包含改善載體性能和提高病毒滴度的

5、WPRE、RRE和和cPPT/CTS序列序列 更高的包裝更高的包裝 病毒滴度病毒滴度 基于基于VSV-G的病毒可應用于幾乎所有類的病毒可應用于幾乎所有類 型細胞型細胞 ECO 取代取代VSV-G，只限于鼠類細胞，只限于鼠類細胞 兩種形式的兩種形式的 病毒：泛嗜病毒：泛嗜 性和單嗜性性和單嗜性 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 10108/6/20218/6/2021 慢病毒載體的種類慢病毒載體的種類 cDNA載體載體 pLVX-Puro RNAi載體載體pLVX-shRNA1 pLVX-shRNA2 ProteoTuner載體載體 pLVX-PTuner pLVX-Ptuner Green

6、 誘導表達載體誘導表達載體 pLVX-Tet-On Advanced pLVX-Tet-Off Advanced pLVX-Tight-Puro 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 11118/6/20218/6/2021 慢病毒載體的種類慢病毒載體的種類 pLVX-EF1-IRES-Puro pLVX-EF1-IRES-ZsGreen1/mCherry pLVX-EF1-AcGFP1-N1 & C1 EF1啟動子載體啟動子載體 熒光標簽載體熒光標簽載體 pLVX-DsRed-Monomer-C1 & N1 pLVX-AcGFP1-N1 & C1 雙表達載體雙表達載體 pLVX-DsRed-

7、Monomer-C1 & N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 12128/6/20218/6/2021 慢病毒相關系統慢病毒相關系統 1、慢病毒包裝系統慢病毒包裝系統 l 高效，可獲得的病毒滴度高達高效，可獲得的病毒滴度高達5 X 108 IFU / ml l 具有兩種假型病毒：泛嗜性（具有兩種假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和單嗜性（）和單嗜性（ECO） Lenti-X HTX Packaging System (631247/49) Lenti-X HTX Ecotropic Packaging System (631251) 2、慢病毒慢病毒c

8、DNA表達系統表達系統 l 高效基因傳遞系統，可用于幾乎所有哺乳動物細胞高效基因傳遞系統，可用于幾乎所有哺乳動物細胞 Lenti-X Expression System (632164) Lenti-X Bicistronic Expression System (Neo/Hyg/Puro, 632181/2/3) 3、慢病毒慢病毒RNAi表達系統表達系統 l 可以獲得高效率的可以獲得高效率的RNAi，可用于幾乎所有哺乳動物細胞，可用于幾乎所有哺乳動物細胞 Lenti-X shRNA Expression System (632177) 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 13138/6/2

9、0218/6/2021 4、慢病毒誘導表達系統、慢病毒誘導表達系統 l 可以在幾乎所有哺乳動物細胞中精確地誘導基因表達可以在幾乎所有哺乳動物細胞中精確地誘導基因表達 Lenti-X Tet-On Advanced Inducible Expression System (632162) Lenti-X Tet-Off Advanced Inducible Expression System (632163) 5、慢病毒報告系統慢病毒報告系統 l 利用熒光或化學發光檢測法研究啟動子活性利用熒光或化學發光檢測法研究啟動子活性 l 可用于多種類型細胞可用于多種類型細胞 Lenti-X DD Cyan

10、/Green/Red Reporter System (631748/51/53) Lenti-X Ready-To-Glow Secreted Luciferase Reporter System (631746) 慢病毒相關系統慢病毒相關系統 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 14148/6/20218/6/2021 提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 15158/6/20218/6/2021 影響慢病毒滴度的因素影響慢病毒滴度的因素 轉染效率轉染效率 l 轉染試劑的類型轉染試劑的類型 l 轉染的轉染的DNA量量 l 轉染的轉染的DNA質量質

11、量 p 細胞種類細胞種類 p 細胞密度細胞密度 p 細胞狀態細胞狀態 包裝細胞包裝細胞 u 測定滴度時細胞測定滴度時細胞 的選擇的選擇 u 測定方法的選擇測定方法的選擇 測定滴度測定滴度 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 16168/6/20218/6/2021 Clontech提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略 策略策略 p 使用的病毒載體中包含改善載體性能和使用的病毒載體中包含改善載體性能和 提高病毒滴度的提高病毒滴度的WPRE、RRE和和 cPPT/CTS序列序列提供多種病毒載體提供多種病毒載體 p 包裝組分中含有經過比例優化的包裝組分中含有經過比例優化的5種非病種非病 毒載體

12、毒載體引入引入Tet-Off誘導表達系統誘導表達系統 p 配以配以Tet 系統專用的胎牛血清（系統專用的胎牛血清（FBS） p 使用高品質的使用高品質的293T包裝細胞系包裝細胞系 Lenti-X 293T Cell Line p 使用創新型的轉染試劑使用創新型的轉染試劑Xfect 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 17178/6/20218/6/2021 高品質包裝細胞系高品質包裝細胞系Lenti-X 293T Time of transfectionHarvest Time 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 18188/6/20218/6/2021 Lenti-X 293T VS

13、293FT Clontech的的 293T包裝細胞獲得的病毒滴度是包裝細胞獲得的病毒滴度是293FT的的2.6倍倍 ！ 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 19198/6/20218/6/2021 創新型轉染試劑創新型轉染試劑Xfect (631317/8) 哺乳動物細胞用創新型轉染試劑哺乳動物細胞用創新型轉染試劑Xfect l應用的細胞類型廣泛、轉染效率高！應用的細胞類型廣泛、轉染效率高！ l由可生物降解的、低細胞毒性的納米顆粒制備而成。由可生物降解的、低細胞毒性的納米顆粒制備而成。 l操作流程簡便、兼容血清。操作流程簡便、兼容血清。 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 20208/6/

14、20218/6/2021 創新型轉染試劑創新型轉染試劑Xfect (631317/8) 高效高效的的Xfect 低毒性低毒性的的Xfect 實驗驗證：實驗驗證：Xfect轉染轉染293T包裝細胞的效率高達包裝細胞的效率高達97%！ 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 21218/6/20218/6/2021 提高轉導效率的方法提高轉導效率的方法 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 22228/6/20218/6/2021 慢病毒濃縮試劑盒慢病毒濃縮試劑盒 Lenti-X Concentrator (Cat No.631231&631232) 操作簡便，無需超速離心操作簡便，無需超速離心 可

15、以純化大體積病毒樣品可以純化大體積病毒樣品 病毒滴度提高病毒滴度提高100倍，回收率高達倍，回收率高達90% 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 23238/6/20218/6/2021 快速滴度測定快速滴度測定 Lenti-X qRT-PCR Titration Kit (Cat No.631235) 基于基于HIV-1的的qRT-PCR法的滴度測定試劑盒法的滴度測定試劑盒 1 1天內即可完成收獲病毒、測定滴度和感染靶細胞天內即可完成收獲病毒、測定滴度和感染靶細胞 可以獲得精確的病毒滴度，為獲得穩定的感染效果奠定基可以獲得精確的病毒滴度，為獲得穩定的感染效果奠定基 礎礎 慢病毒慢病毒相關技

16、術相關技術介紹介紹 24248/6/20218/6/2021 快速滴度測定快速滴度測定 LentiTM-X GoStixTM (Cat No.631243,631244&631241) 陽性結果：病毒滴度陽性結果：病毒滴度5 x 105 IFU/ml 30秒內即可定性地判斷病毒滴度秒內即可定性地判斷病毒滴度 可以確定收獲病毒的最佳時機可以確定收獲病毒的最佳時機 操作簡便操作簡便 慢病毒慢病毒相關技術相關技術介紹介紹 25258/6/20218/6/2021 快速高效轉導相關產品快速高效轉導相關產品 Lenti-X Accelerator(Cat No.631256,631257&631254)