第五章 黃酮類化合物 Chapter 5 flavonoids,概 述1 、廣泛存在于自然界的一類天然有機化合物2 、具有顏色，且大多呈黃色或淡黃色，因此稱為黃酮3 、多存在于高等植物中，低等植物中為數不多4 、植物體內，大部分成苷，一部分以苷元游離形式存在5、具有多種生物活性： 對心血管系統的作用 蘆丁、槲皮素、槲皮苷、葛根素、立可定擴冠、增強心臟收縮 橙皮苷、花色素、兒茶素類、蘆丁等降低血管脆性及異常通透性 大多活血化瘀中藥含flavonoids,抗肝臟毒性作用 水飛薊素、異水飛薊素、次水飛薊素抗炎作用 蘆丁、羥乙基蘆丁、二氫槲皮素抗菌及抗病毒作用 木犀草素、黃芩苷、黃芩素抗菌 槲皮素、桑色素、山柰酚抗病毒雌性激素樣作用瀉下作用解痙作用止咳祛痰作甜味劑,第一節 黃酮類化合物的分類 (classification of flavonoids),以前，黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮類(2-phenylchromone)化合物，現在則是泛指兩個苯環通過中央三個碳原子相互連接而成的一系列化合物。極少數化合物中央的碳原子少于三個或多于三個。,根據中央三碳原子的氧化程度和成環狀況可將黃酮類化合物分為以下幾類:,其他：Biflavones 雙黃酮 2分子黃酮 或 2分子二氫黃酮 或 1分子黃酮和1分子二氫黃酮 通過C-C 或 C-O-C鍵連接而成,R1=CH3,R2=H 銀杏素 ginkgetin R1=H,R2=CH3 異銀杏素 isoginkgetin R1=R2=H 白果素 bilobetin,CC鍵,扁柏黃酮hinokifavone （C-O-C鍵連接）,特殊類型的黃酮化合物 1. 水飛薊素（silybin）：黃酮木脂體類,2.生物堿型黃酮：,常見取代基 OH、OCH3、異戊烯基等多以苷類形式存在常見組成黃酮苷的糖類：單糖類：D-Glu、D-Gal、D-Xyl、D-葡糖醛酸、L-Rha、L-Ara等雙糖類：槐糖、蕓香糖、新橙皮糖、龍膽二糖、次槐二糖等三糖類：龍膽三糖、槐三糖等,2,3,4,2,6,5,1,4,2,1,6,5,a,4,3,2,5,6,7,3,4,5,6,1,4,5,6,7,8,黃酮類化合物生物合成的基本途徑 三個丙二酰輔酶A和一個桂皮酰輔酶A在查爾酮合成酶的作用下首先生成查爾酮，在經過查爾酮異構化酶的作用下形成二氫黃酮。其他黃酮類化合物大都是經過二氫黃酮在各種酶的作用下生合成而來的。,第二節 黃酮類化合物的理化性質及顯色反應 (physicochemical property and colouring reaction of flavonoids),2.1 性狀 (shape),多數為結晶性固體，少數為無定形粉末。 苷具有旋光性，且多為左旋(含有糖)。除二氫黃酮，二氫 黃酮醇，二氫異黃酮，黃烷，黃烷醇外苷元一般無旋光性。 黃酮、黃酮醇及其苷 灰黃-黃色; 查耳酮 黃-橙黃色; 二氫黃酮、二氫黃酮醇 無色; 異黃酮 淺黃色; 花色素及苷元 顏色隨PH變化而改變 PH 8.5 蘭色,2.2 溶解度(solubility) 苷元難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑及堿水中。苷可溶于水，易溶于甲醇、乙醇等。 OH 水溶性 ; 糖 水溶性,黃酮、黃酮醇、查爾酮等 堆砌緊密,分子引力大,平面型 二氫黃酮、二氫黃酮醇等 非平面型 花色素 離子型,水溶性,2.3 酸堿性,2.3.1 酸性 多數黃酮類化合物具有酚羥基，故可溶于堿水、吡啶、甲酰胺、二甲基甲酰胺等。 酸性強弱順序: 7,4 - 二OH 7或4 - OH 一般PhOH 5及3 OH NaHCO3 Na2CO3 0.2% NaOH 4% NaOH 2.3.2 堿性 吡酮環上的氧原子有未共用電子對，故有微弱的堿性，可與強無機酸(如H2SO4,HCl等)成鹽，但生成的鹽極不穩定，加水即可分解。在濃鹽酸中生成的鹽常有特殊顏色，可用于鑒別。某些甲氧基黃酮溶于濃鹽酸中顯深黃色，且可與生物堿沉淀試劑生成沉淀。,2.4 顯色反應 2.4.1 還原反應(1). 鹽酸-鎂粉反應,黃酮(醇)、二氫黃酮(醇): 橙紅-紫紅(少數紫-藍色) B環有OH或OCH3時顏色加深 查耳酮、橙酮、兒茶素: (-), 異黃酮少數顯色 花青素及部分橙酮、查爾酮等在濃鹽酸中也會變色，故需作對照。為排除提取物顏色的干擾，可觀察泡沫的顏色。,H,+,(2). 鹽酸-鋅粉反應 二氫黃酮醇、黃酮醇-3-O-糖苷 (+) 二氫黃酮、二氫黃酮醇-3-O-糖苷、黃酮（醇） (-)(3). 四氫硼鈉反應 NaBH4 二氫黃酮類 紅紫色 其他黃酮類 (-)(4). 磷鉬酸 二氫黃酮 棕褐色,紅紫色,2.4.2 金屬鹽類試劑的絡合反應,黃酮類分子中含有下列結構單元時，常可與鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑反應，生成有色絡合物。,(1). 鋁鹽 1% 三氯化鋁或硝酸鋁溶液，生成的絡合物多為黃色（415nm），并有熒光，可用于定性定量。(2). 鉛鹽 1%堿式醋酸鉛或醋酸鉛，生成黃-紅色沉淀。 堿式醋酸鉛還可與單個酚羥基生成沉淀，可用于分離。,(3). 鋯鹽 2% ZrOCl2 黃綠色絡合物，并有熒光 3-OH，4C=O 5-OH，4C=O (二氫黃酮醇除外) 加入枸櫞酸后，5-羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，3-羥基黃酮不褪色。可用于3-羥基和5-羥基黃酮的鑒別。,(4). 鎂鹽 醋酸鎂的甲醇溶液 二氫黃酮(醇) 天藍色熒光， 5位有羥基色澤更為明顯 黃酮（醇）,異黃酮 黃-橙黃-褐色,(5). 氯化鍶(SrCl2) 具有鄰二酚羥基的化合物與氯化鍶的氨性甲醇溶液可生成綠色-棕色乃至黑色沉淀。,(6). 三氯化鐵(FeCl3) 具有氫鍵締合的酚羥基(如鄰二酚羥基,5-OH等)，反應明顯。,2.4.3 硼酸顯色反應,具有下列結構單元的黃酮類(5-OH黃酮，2-OH查耳酮等)在無機酸或有機酸存在下,可與硼酸反應，生成亮黃色。在草酸存在下顯黃色并有綠色熒光，在枸櫞酸丙酮條件下，只顯黃色而無熒光。,2.4.4 堿性試劑顯色反應(1). 遇堿成鹽共軛鏈延長，顏色加深。NH3可逆, Na2CO3不可逆。 (2). 二氫黃酮遇堿開環形成查爾酮，顯橙-黃色。(3). 黃酮醇類先呈黃色，通入空氣后變為棕色。(4). 分子中有鄰二酚羥基或3,4-二OH，在堿液中不穩定，易氧化，由黃 深紅 綠棕色沉淀。,第三節 黃酮類化合物的提取與分離(extraction and isolation of flavonoids),3.1 提取和粗分 (1). 溶劑法 用中等極性溶劑回流提取，可提出大部分黃酮苷元(氯仿、乙醚、乙酸乙酯等)。用水、含水醇、醇加熱提取可提出苷和多數苷元。 (2). 萃取法 醇或水提取液(一般相當于生藥100-200),3-4倍量醇,靜置,過濾,多糖,粘液,樹膠,蛋白等,醇液,回收醇，加水稀釋,水溶液,萃取,乙酸乙酯(苷元和極性小的苷),正丁醇(苷),水液（水雜）,(3). 堿提取酸沉淀法 利用酚羥基遇堿成鹽易溶于水，加酸后亦可沉淀析出的原理進行提取（如蘆丁的提取)。堿液的濃度不宜過高，以免在強堿下黃酮被破壞。酸化時，酸性也不宜過強(pH 4較好)，以免生成鹽重新溶解。當藥材中含有大量果膠、粘液等雜質時(如花、果等藥材),用石灰乳或石灰水較好，上述雜質可形成鈣鹽不被溶出，過濾也容易。,(4). 活性炭吸附法( 見第一章),3.2 分離 3.2.1 柱色譜法 3.2.1.1 硅膠柱色譜 適用的范圍最廣，主要用于分離極性小的和極性中等的化合物。也可采用分配色譜方法分離極性較大的化合物，如黃酮苷、多羥基黃酮等。 3.2.1.2 聚酰胺柱色譜 (1). 聚酰胺的性質及吸附原理 聚酰胺（Polyamide)高分子聚合物，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚等常用的溶劑，對堿較穩定。對酸尤其是無機酸穩定性較差，可溶于濃鹽酸、冰醋酸及甲酸。一般屬于氫鍵吸附。,(2). 洗脫劑的洗脫能力 尿素/水 二甲基甲酰胺 甲酰胺 堿水溶液 丙酮 甲(乙) 醇 水 常用的溶劑: 水 乙醇 一般不用含氯的溶劑(可溶解聚酰胺或其中的交聯劑)。,(3). 結構與吸附力的關系 (A). 形成氫鍵的基團數目越多，吸附能力越強；,(B). 易形成分子內氫鍵者，吸附力降低；,(C) . 芳香化程度高，吸附力強；,(D). 苷元相同； 苷元 單糖苷 雙糖苷 三糖苷(E). 酚羥基的數目和位置相同； 黃酮醇 黃酮 查耳酮 二氫黃酮(醇) 異黃酮(F). 與C=O基締合的酚羥基 雙糖苷 單糖苷。,3.2.2 梯度PH萃取法,乙醚液,5% NaHCO3,乙醚液,堿液(7,4-二OH-黃酮),5%Na2CO3,乙醚液,堿液(7或4-OH黃酮),乙醚液,0.2%NaOH,堿液(一般黃酮),4%NaOH,乙醚液(脂雜),堿液(僅含3-OH和或5-OH黃酮),第四節 黃酮類化合物結構鑒定(structural identification of flavonoids),4.1 色譜法在黃酮類化合物鑒定中的應用 雙相紙色譜(PPC)在確定黃酮類化合物的純度和類型(如苷或苷元)上是一個很有用的方法。 (1). 常用的溶劑有兩類 一類是醇性溶劑或有機溶劑，如n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5,上層,BAW)，t-BuOH-HOAc-H2O (3:1:1,TBA)，C6H6-HOAc-H2O(125:72:3)，CHCl3-HOAc-H2O(13:6:1)等；另一類是水性溶劑，如2% -6%HOAc，3%NaCl等。 (2). 醇性或有機溶劑展開以分配為主，水性溶劑展開以吸附為主。苷宜用水性溶劑，苷元宜用醇性溶劑。,(3). 用水性溶劑展開時，平面型分子如黃酮、黃酮醇、查耳酮幾乎停留在原點不動(Rf雙糖苷單糖苷苷元。 (4). 用醇性溶劑展開時，分子極性越大，Rf值越小，與水性溶劑相反。,4.2 紫外及可見光譜在黃酮類鑒定中的應用,紫外及可見光譜在黃酮類化合物結構測定中占有非常重要的地位，尤其是在解決黃酮類化合物的基本骨架和羥基的取代位置中是一個非常有力的工具。 黃酮類化合物的紫外光譜由兩部分組成，桂皮酰部分(Cinnamoyl system I帶)和苯甲酰部分(Benzoyl system II帶)，從長波往短波數第一峰稱I帶，第二峰稱II帶。,A,B,C,4.2.1 在甲醇溶液中的紫外光譜 4.2.1.1 黃酮(醇)類,(1). I帶和II帶吸收強度相差不大;(2). I帶 黃酮類 304-350nm； 黃酮醇(3-OH取代) 328-357nm； 黃酮醇(3-OH游離) 352-385nm； B環 OH 波長，特別是4-OH 紅移大。 (3). II帶 240-285nm； A環 OH 波長 B環OH對波長影響不大,但影響峰型,3 4二OR時可分裂成雙峰或一個主峰一個肩峰，4OR時為單峰。,I帶,II帶,4.2.1.2 查耳酮類和橙酮類,2,6,2,4,(1). 桂皮酰系統得到加強，故I帶強，II帶弱相差較大。(2).查耳酮 II帶 220-270nm, I帶340- 390nm，有時可分裂成兩個峰(Ia 340- 390nm,Ib300-320nm),2-OH I帶紅移 20nm(與C=O締合),4-OH I帶紅移30- 40nm。(3). 橙酮 I帶370-430nm， I帶和II帶均可裂為兩個峰。,I帶,II帶,4.2.1.3 異黃酮類和二氫黃酮(醇)類,(1). 因為只有苯甲酰系統，故II帶強，I帶僅呈肩峰。 (2). 異黃酮 II帶245-270nm。(3). 二氫黃酮（醇） II帶 270- 295nm。,I帶,II帶,根據I帶和II帶的峰形就可判斷黃酮的類型,4.2.2 甲醇鈉(NaOMe)對UV的影響 4.2.2.1 黃酮(醇)類,所有羥基都可成鹽引起紅移，主要用于確定4-OH。(1). 4 -OH I帶紅移 40-60nm,且強度不降。(2). 3-OH，但無4-OH I帶紅移50-60nm，強度降低。 (3). 7-OH 320-330nm有峰。(4). 3,4二OH； 3,3,4三OH；3,4,5三OH 隨時間延長吸收強度降低。 (1)-(3)為與甲醇溶液比較; (4)為自身比較。,按插烯規律為對苯二酚可氧化成醌。,4.2.2.2 二氫黃酮（醇）類和異黃酮類 (1). 5,7二OH II帶紅移35-40nm； (2). 無5-OH I帶移至400nm(異構成查耳酮)； (3). 5,6,7或5,7,8-三OH， 隨時間延長吸收強度降低。 (1)和(2)與甲醇溶液比； (3)自身比,OH-,4.2.2.3 查耳酮類 (1). 4-OH I帶紅移60-100nm ，吸收強度增加。 (2). 無4-OH，但有4 -OH或2-0H I帶紅移60-100nm， 吸收強度不變. (3). 4-OH和2 -OH或4-OR I帶紅移40-50nm。 與甲醇溶液比,4.2.2.4 橙酮類 (1). 4 -OH I帶紅移80-95nm，吸收強度增加。 (2). 6 -OH I帶紅移60-70nm。 與甲醇溶液比較。,4.2.3 醋酸鈉（NaOAc）對UV的影響,醋酸鈉的堿性比甲醇鈉弱，只能使7-OH和4-OH解離。市售的醋酸鈉經熔融脫除微量醋酸后，其對UV的影響與甲醇鈉相似(指4 -OH和7-OH)。當市售的醋酸鈉未經熔融時，由于含有微量的醋酸，限制了4 - OH的解離，故多用于7-OH的確定。,4.2.3.1 黃酮(醇) (1). 7-OH II帶紅移5-20nm。 (2). 黃酮中有7-OH，6,8二OR時，II帶紅移幅度降低。 (3). 4-OH，但無3-及或7-OH I帶在長波一側有明顯肩峰。 (4). 5,6,7或6,7,8或3,3,4三OH 隨時間延長,吸收強度降低。 (1)-(3)與甲醇溶液比較； (4)自身比較。4.2.3.2 二氫黃酮（醇）類 (1). 5,7二OH II帶紅移35nm。 (2). 7-OH (無5-OH) II帶紅移60nm (異構化)。 (3). 5,6,7或6,7,8三OH 隨時間延長，吸收強度降低。 (1)和(2)與甲醇溶液比較； (3)自身比較。4.2.3.3 異黃酮類 (1). 7-OH II帶紅移6-20nm(與甲醇溶液比較)。 (2). 5,6,7或6,7,8 三OH 隨時間延長，吸收強度降低(自比)。,4.2.4 醋酸鈉/硼酸對UV的影響 硼酸在堿性條件下可與鄰二酚羥基螯合使相應峰帶紅移，故可用于確定鄰二酚羥基。,4.2.4.1 黃酮(醇)類 (1). B環有鄰二酚羥基 I帶紅移12-30nm (2). A環有鄰二酚羥基(不含5,6位) II帶紅 移5-10nm (3). 均為與甲醇溶液比較(與醋酸鈉比可能 為紫移) 4.2.4.2 異黃酮類和二氫黃酮(醇)類 A環有鄰二酚羥基(不含5,6位) II帶紅移10-15nm(與甲醇溶液比較)。,4.2.5 AlCl3及AlCl3/HCl對UV的影響 Al3+可與3-OH，C4=O或5-OH，C4=O或鄰二酚羥基螯合形成螯合物。當3-OH與5-OH共存時，形成3-OH，C4=O螯合物，當3-OH或和5-OH與鄰二酚羥基共存時，形成二螯合物。 螯合物對酸的穩定性: 3-OH(黃酮醇) 5-OH(黃酮) 5-OH(二氫黃酮) 鄰二酚羥基 3-OH(二氫黃酮醇),(1). AlCl3/HCl 譜 = AlCl3 譜 無鄰二酚羥基(2). AlCl3/HCl譜 = AlCl3譜 可能有鄰二酚羥基 I帶紫移30-40nm B環有鄰二酚羥基 I帶紫移50-60nm A,B環均可能有鄰二酚羥基(3). AlCl3/HCl譜 = 甲醇譜 3或和5位無羥基(4). AlCl3/HCl譜 = 甲醇譜 可能有3或和5羥基 I帶紅移35-55 nm 只有5-OH I帶紅移60nm 只有3-OH I帶紅移50-60nm 可能同時有3和5羥基 I帶紅移17-20nm 除有5-OH外尚有6-OR取代,小結MeOH 確定黃酮類型甲醇鈉 確定4-OH和7-OH醋酸鈉 確定7-OH醋酸鈉硼酸 確定鄰二酚羥基AlCl3及AlCl3/HCl 確定3-OH，5-OH及鄰二酚羥基,甲醇譜I帶和II帶相似,I帶為359nm故為黃酮醇(3-氧代)。甲醇鈉譜I帶紅移(410-359)51nm,示有4-OH ,327nm有峰,示有7-OH。AlCl3/HCl譜I帶紫移(433-402)31nm示B環有鄰二酚羥基；I帶紅移(402-359)43nm示有5-OH。醋酸鈉譜II帶紅移(271-259)12nm示有7-OH。醋酸鈉硼酸譜I帶紅移(387-359)28nm示B環有鄰二酚羥基。,4.3 氫核磁共振在黃酮類結構分析中的應用 4.3.1 A環質子 4.3.1.1 5,7二羥基黃酮類化合物, 5.70-6.90, d J = 2.5Hz 8-H 6-H 7-OH成苷后 8-H和6-H向低場位移， ,4.3.1.2 7-羥基黃酮類化合物,5-H 7.7-8.2 d J = 7-9 Hz6-H 6.4-7.1 dd J = 7-9 Hz 和 2 Hz8-H 6.3-7.0 d J = 2 Hz 6-H可以大于8-H,4.3.2 B環質子 4.3.2.1 4-氧取代黃酮類化合物,2和6-H 7.1-8.1 (與C環氧化程度有關) d(AABB系統，類似于AB系統) J=7-9Hz 3和5-H 6.5-7.1 2和6-H 3和5-H (4-OR的屏蔽作用和C環的負屏蔽作用),4.3.2.2 3,4-二氧取代黃酮類,5H 6.70-7.10 d J = 7-9 Hz 6 H 7.20-7.90 dd J = 7-9 Hz和1.5-2.5 Hz2 H 7.20-7.90 d J = 1.5-2.5 Hz,4.3.2.3,3,4-二氧取代異黃酮,二氫黃酮(醇)類,2-H,5-H,6-H 6.70-7.10 m(或兩組峰),4.3.2.4 3,4,5三氧取代黃酮類化合物 2-H,6-H: 3-R = 5-R S ; 3-R = 5-R 各為 d J = Ca 2.0 Hz ; 6.50-7.50,4.3.3 C環質子 4.3.3.1 黃酮類 4.3.3.2 異黃酮類,3-H 6.30 , S易與A環質子混淆,2-H 7.60-7.80 (DMSO,8.50-8.70) S,4.3.3.3 查耳酮類 -H 6.70-7.40; -H 7.30-7.70 各為d J = 17 Hz 4.3.3.4 橙酮類 芐基質子 6.50-6.70(DMSO 6.37-6.94) S,4.3.3.5 二氫黃酮類,Hb,2-H 5.2 dd J = 11Hz 和 5Hz3-Ha 2.8 dd J = 11Hz 和 17Hz3-Hb 2.8 dd J = 5Hz 和 17Hz 3-Ha和3-Hb化學位移值相近，有時疊在一起不易辨認。,4.3.3.6 二氫黃酮醇類 2-H 4.9； 3-H 4.3 各為d J = 11Hz 二氫黃酮（醇）的絕對構型用CD測定。,4.3.4 糖上的質子 對于黃酮類化合物葡萄糖苷來說，通過糖上端基質子的化學位移值，C3-OH成苷很易與 C4,C5,C7-OH成苷相區別；黃酮醇-3-O-葡萄糖苷和3-O-鼠李糖苷也易區別。,蘆丁糖葡萄糖(6 1) -L-鼠李糖和新橙皮糖葡萄糖(2 1)- -L-鼠李糖是黃酮類化合物常見的雙糖，可以通過鼠李糖上端基質子和甲基質子的化學位移值給于區別。,4.4 碳核磁共振在黃酮類結構分析中的應用 4.4.1 黃酮類化合物骨架類型的判斷,根據C=O基碳的化學位移值可將黃酮類化合物分為三類: (1) 黃酮(醇)、異黃酮; (2) 橙酮; (3)二氫黃酮(醇)、查耳酮。根據C-2和C-3的化學位移值和裂分(偏共振譜)情況又可將每一類細分。,異橙酮類,4.4.2 取代基位移的影響,取代基對黃酮類化合物化學位移的影響與一般芳環類化合物相似，具有一定的加合性。,150-160,145,150,140,160,100-110,160,96-100,4.5 質譜在黃酮類結構測定中的應用 黃酮類化合物在EI-MS中苷元可得到很強的M+，故一般不用制成衍生物，直接進樣即可。苷得不到M,一般要FD-MS、FI-MS、ESI-MS、FAB-MS才可得到M，或偽分子離子峰(準分子離子峰)M+ 1，M+- 1，M+ Na，M+ K以及碎片峰。分子離子峰或偽分子離子峰的豐度很大，是測定苷的分子量的好方法。,4.5.1 黃酮類基本裂解途徑 黃酮類化合物主要有兩種基本裂解途徑，并且這兩種裂解途徑是相互競爭，相互制約的。B2+及B2-CO+離子豐度大致與A1+及B1離子以及它們經一步裂解得到的子離子的豐度互成反比。由于A1,B1+,B2+離子保留著A環和B環的骨架，且相應碎片的質荷比之和等于分子離子的質荷比，故在結構鑒定中有重要意義。,黃酮在有四個以上氧取代基時常給出中等強度的A1+及 B1碎片，但黃酮醇則不然，當超過四個時，只能產生微弱的A1及B1碎片離子。,當C3，C6，C8位含有C-異戊烯基時，可得到M-C4H7碎片，并可重排成穩定的卓鎓離子。,當含有甲氧基時，可得到M-15, M+-43等碎片。,4.5.2 黃酮醇類基本裂解途徑,多數黃酮醇苷元，分子離子峰是基峰，在裂解時主要按途徑II進行。與途徑II相比，途徑I通常不太重要。可以通過B2碎片推測A環和B環的取代情況。如三羥基黃酮醇經全甲基化后在質譜中B2+碎片與B環的取代關系如下： B2+(m/z) B環取代情況 105 無-OH 135 單-OH (單-OCH3) 165 二 OH (二 OCH3) 195 三-OH (三-OCH3),具有2-OH或2-OCH3的黃酮醇類在質譜中可以通過失去OH或OCH3，形成一個穩定的五元雜環。,4.5.3 黃酮苷類化合物的FD-MS,黃酮苷類化合物在EI-MS上既無分子離子峰，也無糖基的碎片峰，其苷與苷元基本一致。,這是上述化合物的FD-MS圖，從圖中可以看到m/z :485(M+ Na)，463(M+1)，462(M+)，433(M+2-CH2OH)，404(M+-C2H4O2)，300(苷元)等碎片峰和分子離子峰以及偽分子離子峰。,在FD-MS中，M+Na離子的強度隨溶劑極性及發射絲電流強度的改變而變化。故可用于區別分子離子峰和偽分子離子峰。,通過m/z：462和133的碎片峰可以推測六碳糖是內側糖，五碳糖是外側糖；苷元的分子量為300，可能是三羥基單甲氧基黃酮。,4.6黃酮類化合物在結構研究中的注意事項 4.6.1 Wessely-Moser 重排,黃酮類C6-和C8-碳苷在常規酸水解條件下不能被水解，但可發生互變生成C6-和C8-碳苷的混合物。,4.6.2 黃酮類化合物的立體化學問題 除側鏈外有立體化學問題的就是二氫黃酮(醇)及其衍 生物的C-2和C-3的構型問題，可用下列幾種方法確定它們的絕對構型。,(1). 化學法 用不改變C2構型的化學降解法使二氫黃酮降解成分子量較小的化合物后與構型已知的化合物的比旋度進行比較，從而確定絕對構型。,S,(2). 單晶X-射線衍射法 需要單晶，有時需要引入重原子。(3). 核磁共振法 需用手性試劑,(4). 圓二色譜(Circular Dichroic Spectroscopy)及CD激子手性 法(CD exciton chirality),由長波向短波看，先上后下的峰稱正Cotton效應。二氫黃酮醇類化合物從長波看為+ - + - + Cotton效應時，為2R,3R構型，反之為2S,3S構型。由圖可看出兩個化合物雖然橢圓度相差很大，旋光方向可能相反或比旋度相差較大，但CD譜峰形一致，故構型相同(2R,3R)。,+,-,+,-,+,二氫黃酮類化合物從長波向短波為+ - + Cotto