1、2020/8/9/1，脫落細胞學，梁松河，哈爾濱醫科大學大慶校區臨床基礎實驗室部，2020/8/9/2，第1章，脫落細胞學檢查技術及臨床應用的評價，脫落細胞學：對人體各部位的脫落細胞，特別是腔管器官表面的脫落細胞，或通過細針吸取病變組織獲得的細胞進行染色，并在顯微鏡下觀察和診斷，也稱為診斷細胞學。標本來源：自然滲出物體腔抽吸液，細針抽吸液，2020年8月9日3。第1節標本采集和涂片制備，1。標本采集原則：盡量減少受檢者的痛苦，獲得合作；該方法簡單、實用、經濟。嘗試獲取足夠的細胞成分進行診斷；及時快速的檢查和即時生產；絕對避免污染；標本編號有清晰的標記。方法：細針穿刺；脫落細胞學檢查，2020年

2、8月至9月，常用方法：直視采集：用刮刀刮，用吸管吸，用自然分泌物刷；痰涂片、尿涂片、前列腺液涂片、乳頭分泌物涂片灌洗；盆腔器官、骨盆或腹部摩擦；鼻咽、食道和胃的針吸；漿膜關節腔積液。漿膜腔積液的處理：提取后應立即送檢(4份保存，標本在24小時內處理)。過多的成熟紅細胞和標本嚴重凝固，需要治療。紅細胞可以通過淋巴細胞分離液或低滲法去除。凝結的滲出液將吸出凝塊，剩余的液體將被離心涂抹。2020/8/9，6，2。涂片制作：(1)要求：1標本新鮮，2操作溫和，細胞分布均勻；不要擠壓和摩擦，以免細胞損傷和變形；3片載玻片應清潔，4片涂片應牢固，5片涂片編號和6個標簽應準確，2020/8/9，7，(2)涂

3、片制備法，推涂法，吸管推涂法和噴射印刷法，2020/8/9，8，(3)涂片固定，目的是保持細胞形態和結構，防止其自溶。固定溶液：優選95%乙醇、乙醇乙醚和氯仿乙醇。注意：巴氏染色，涂片不應在空氣中干燥后染色；固定時間不少于15分鐘(巴氏染色在48小時內進行)；固定解應達到90以上；液體樣本應在離心后涂抹，然后在濕式干燥后固定。刮刀片、痰涂片、網涂片、內鏡刷涂片和宮頸針吸涂片應立即固定。2020/8/9/9，固定方法：濕固定和干固定時間：1530分鐘(4)涂片染色目的：使細胞結構清晰顯示；用各種染色劑使細胞質和細胞核適當地呈現不同的顏色。使單元格結構透明清晰。方法：常規染色為巴氏染色，結合蘇木精

4、-伊紅、姬姆薩和特殊染色。2020/8/9/10/1巴氏染色水合作用：固定涂片用乙醇蒸餾水染色，每次1分鐘；蘇木精染色35分鐘；分色：1在鹽酸中幾秒鐘；水洗發藍：放入飽和碳酸鋰溶液中1分鐘。水洗脫水：50、70、80、95乙醇各1分鐘；在橙色溶液中染色24分鐘；在EA36染料溶液中用95%乙醇洗滌兩次，每次45分鐘；脫水：95，無水乙醇各12分鐘；二甲苯透明23分鐘；2封：中性膠封，2020年8月9日；結果表明，細胞核呈紫藍色，核仁呈紅色。適用于上皮細胞染色和陰道涂片觀察女性激素的影響。優點：細胞是多色的。缺點：染色程序復雜，2020年8月9日。注意事項：染料溶液應充分溶解，蘇木精應在染色前數

5、月準備好。應該每天過濾一次，并添加新的溶液。在低室溫下不易染色，因此在分化前可在顯微鏡下觀察，用50鹽酸加熱以確定分化時間。涂片在橙色溶液中不應過長。EA36染料溶液配制和使用前，應使用濾紙進行調試。在2020/8/9，13，2 HE染色中，透明度好，核漿對比鮮明，染色效果穩定，核呈紫藍色，果肉呈淺玫瑰紅。該程序簡單，適用于痰涂片。3德國國會大廈姬姆薩染色：主要用于血液和骨髓的細胞學檢查，2020年8月14日。與液基薄層細胞學相比，2020年8月15日，I. Wrights染色(Wrights)的特點是：固定和染色在一起，該方法操作簡單，染色時間短，對白細胞特異性顆粒染色好。通常，它是氯化物鹽

6、，即亞甲藍氯化物，其有色部分是陽離子，無色部分是陰離子。亞甲藍很容易被氧化成二級染料，如單-、二-和三甲基硫堇。一些市售的亞甲藍已經被氧化成天藍色。曙紅(E-)通常是鈉鹽，曙紅鈉的有色部分是陰離子，無色部分是陽離子，有色部分是酸。當曙紅和亞甲藍混合時，產生疏液膠體曙紅亞甲藍中性沉淀(ME)，即瑞德染料(溶解在甲醇中，即瑞德染料溶液)。ME(弗氏染料)M E -，2020/8/9，16，2。甲醇的作用：甲醇用作弗氏染料的溶劑，稱為弗氏染液。甲醇是萊特染料的良好溶劑，它有兩個作用：(1)33，360甲醇的溶解使亞甲基藍和曙紅在溶液中解離，使細胞組分選擇性吸附其中的有色物質而顯色。在制備好的弗氏染料

7、溶液中，亞甲藍可以被氧化并含有天青。亞甲藍和曙紅的化合物能把細胞核染成紫紅色，但不能把細胞質染成藍色。過量的亞甲藍會將細胞質染成藍色。染色主要是一種化學作用，是離子相互結合的反應。(2)固定，加熱：甲醇具有很強的脫水能力，可以將細胞固定在一定的形狀，增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料的吸收。同時，由于甲醇吸收了染液中的水分，染液被加熱，加速了染色反應。2020/8/9，17，3。染色原理：細胞具有物理吸附和化學親和力。各種細胞成分的化學性質不同，它們對各種染料的親和力也不同。血紅蛋白、嗜酸性顆粒是堿性蛋白質，它與酸性染料曙紅結合并染成紅色，稱為嗜酸性物質；核蛋白和淋巴細胞胞質是酸性蛋白，與堿

8、性染料亞甲藍或天藍色結合并染成藍色，稱為嗜堿性物質；中性粒子處于等電狀態，可與曙紅和美藍結合，并被染成淺紫紅，稱為中性物質。2020/8/9，18，4。細胞染色的影響因素：細胞的所有成分都是不同的蛋白質。因為蛋白質是兩性電解質，電荷取決于溶液的酸堿度。在微酸性環境中，電荷增加，易與曙紅結合，呈紅色；在堿性環境中，負電荷增加，易與亞甲藍或天青結合，染色呈藍色。因此，細胞染色對氫離子濃度非常敏感，染色片必須干凈，無酸堿污染。必須用優質甲醇配制瑞特溶液，必須用緩沖液稀釋染料溶液，沖洗水應接近中性，否則可能導致各種細胞的異常染色反應，造成鑒定困難甚至錯誤。空氣氧化：新制備的染料呈弱堿性，必須在室溫或3

9、7下儲存一段時間。當染料成熟時，只有在亞甲基藍逐漸轉化為天青b后才能使用，儲存時間越長，染色效果越好。在儲存揮發性：瑞德染液的過程中，必須將其緊密堵塞，以防止甲醇揮發和氧化成甲酸。有人主張在配方中加入30毫升甘油，以防止甲醇揮發，使細胞染色清晰。甲醇必須是純的(氬級)。例如，甲醇中的丙酮含量太高，并且染色是酸性的，這使得白細胞著色不良。，2020/8/9/19/5。弗氏染料溶液的制備：(1)弗氏染料溶液：830毫克弗氏染料或500毫升1克甲醇或15毫升600毫升甘油。首先，將干燥的弗氏染料(在培養箱中干燥一夜)放入研缽中，用牛奶棒輕輕將染料打碎成粉末，并研磨至聽不見為止。加入少量甲醇溶解并研磨

10、，使染料在牛奶罐中呈現“一面鏡子”的光澤，而不會有染料粉末沉淀。加入更多的甲醇進行研磨，使其像鏡子一樣發亮，靜置一段時間，將上層液體倒入干凈的儲存瓶中(最好是一個裝滿甲醇的空瓶)，然后加入甲醇進行研磨，重復幾次，直到研缽中的染料和甲醇用完，搖勻，用甘油封住瓶口，并在室溫下避光保存一段時間。2020年8月9日，(2)瑞特染料溶液緩沖液：1)緩沖功能：染色對氫離子濃度非常敏感。觀察到酸堿度的變化會使蛋白質和染料形成的化合物再次解離。緩沖液必須保持一定的酸堿度以穩定染色，酸堿度一般為6.46.8。堿性染料可以中和緩沖液中的酸性基團，而酸性染料可以中和緩沖液中的堿以保持酸堿度恒定。2)緩沖液制備(pH

11、6.46.8，弱酸性):配方1:配方2: KH _ 2 PO _ 4 0.3克Na2 HPO _ 4 0.2克(1%磷酸二氫鉀30毫升加1%磷酸氫二鈉20毫升)將H2O(新鮮)加入到1000毫升中，并在室溫下置于黑暗的地方。瓶口是密封的，以防止霉菌污染。如果有污染，應該丟棄，2020/8/9/21/6。染色： a。取干血涂片，用蠟筆在血膜的兩端畫線。將血液涂片平放(放在染色架上)，用滴管將3-5滴染料溶液滴在片上，用滴管或吸球分散染料溶液，使其覆蓋全血膜，放置約30秒鐘。c、加入等量的緩沖溶液，用吸球輕輕吹，將染料溶液和緩沖溶液充分混合，靜置染色約5-10分鐘。然后用少量的自來水沖洗紙張末端的

12、染料溶液。不要先傾倒染料溶液，然后用水沖洗。切片在自然干燥后可以用顯微鏡檢查。2020/8/9/22，第2節顯微鏡檢查，1。讀片要求：檢查檢驗單和涂片的數量；了解病史、臨床情況和檢查目的；涂片應密封；首先，用低倍鏡一張一張地仔細閱讀膠片，每個視場部分重疊以避免遺漏；要找到具有診斷意義或值得討論的細胞，標記它們。觀察項目：涂片中的細胞成分；細胞的排列；一組細胞的鄰接；單細胞的特征；芯與漿的比率；細胞退化；涂片背景中的細胞和非細胞成分。2020/8/9/23，診斷報告，分級診斷和描述性診斷。改良巴氏五級分類：分級：見異常細胞：有異型性但無惡性腫瘤的細胞：疑似惡性腫瘤但證據不足：高度提示惡性腫瘤：明

13、確惡性腫瘤，2020/8/9/24，細胞學診斷質量管理體系，標本采集和制備過程中定期隨訪，診斷理論研究和復習咨詢，2020/8/9/25，脫落細胞學檢查第三節優點：安全、簡便、快速、準確，檢查范圍廣。(1)癌癥預防概況；(2)腫瘤治療后隨訪觀察；(4)癌前病變的隨訪觀察；(5)監測指標作為一定的處理方法；(5)評估卵巢功能和指導內分泌治療，2020年8月9日，26，細胞診斷學的應用價值；(1)初步篩選實現早期診斷(3)具有廣泛應用的基礎(4)當難以獲得組織學診斷材料時，細胞學診斷可以彌補形態學診斷的空白。2020/8/9/27，細胞學診斷的局限性和片面性是由以下原因造成的：(1)取材不良；(2

14、)制劑質量差；(3)病理情況：腫瘤大小、腫瘤性質、腫瘤分化程度、腫瘤組織類型、腫瘤的早晚、腫瘤與周圍組織的關系等。，2020年8月，2020年9月28日。缺點：1 .有一定的誤診率：細針穿刺假陰性10例，痰涂片假陰性2例，痰涂片假陰性2例。具體位置很難確定。很難對腫瘤進行分類。非腫瘤疾病的診斷研究；細胞學診斷的準確性低于組織病理學診斷，因此細胞學診斷依賴于組織病理學診斷的確認。2020/8/9/29，輔助檢查，組織化學免疫組織化學，流式細胞術，DNA分析，染色體倍性分析，電子顯微鏡，2020/8/9/30，第2章，脫落細胞檢查的基本知識，第1節，細胞診斷的基本概念，活性細胞增殖，細胞體積增加，

15、細胞核明顯增大，核染色質增多，顆粒變粗，核仁增多。第二，在組織損傷或修復過程中從新上皮脫落的細胞的特征：細胞像合胞體細胞一樣以碎片形式出現，并且排列規則；細胞略有增大，細胞核也增大，細胞核不深染，細胞質仍豐富且深染；核仁明顯增大或增多；可能有有絲分裂圖像。2020/8/9/31，組織修復細胞，2020/8/9/32，3。未成熟鱗狀化生細胞的特征：細胞大小類似于正常上皮外底層；它成組出現，可以以砌磚的方式排列；細胞呈圓形或橢圓形，邊緣有小突起。細胞質中通常有小液泡，使細胞質透明。成熟鱗狀化生細胞的特征：細胞大小與正常鱗狀上皮中層細胞相似；有許多組，細胞是多邊形的，有銳角突起和各種形狀；小液泡在細

16、胞質中很常見。細胞質少，排列緊密，無細胞間橋。2020/8/9，33，鱗狀化生，2020/8/9，34，2020/8/9，35，2020/8/9，36。第四，儲備細胞的增殖是柱狀上皮細胞下一層具有分化潛能的未成熟細胞(或未分化細胞)。形態特征：細胞小，類似于鱗狀上皮內底細胞的大小；圓形或橢圓形，細胞質中有小突起；胞漿內可見小液泡，淡染；核偏離可能在大小上稍有不一致；細胞核染色質均勻而薄，可見核仁和幾個大小相同的核仁，細胞常聚集在一起，有時相互連接；它經常伴隨著化生細胞。2020/8/9/37，聚集的增生基底細胞，支氣管粘膜，2020/8/9/38，5。細胞增殖，細胞分裂增強，數量增加，體積增大

17、，形狀異常。細胞大，細胞核大，核染色質增多增厚，雙核或多核，核仁明顯，核膜增厚甚至稍有不規則。可分為輕度增生和重度增生。6.細胞從未成熟細胞分化為具有完整結構和功能的成熟細胞的過程。上皮細胞分化的形態學表現：1 .細胞體積從小到大；2.細胞質數量從小到大；3.核質從大到小的比率；5.染色質排列從松散到緊密；6.核仁由大到小，由大到小，2020/8/9，39，柱狀上皮增生混有杯狀細胞；2020/8/9，40，7。核分裂的病理有絲分裂圖像應與核分裂1相關。人為退化的原因：標本放置時間過長，細胞自溶；將細胞置于高滲或低滲溶液中；固定液濃度或時間不當，過濕或過干等形態學特征：細胞大，結構不清，所有細胞均增大或縮小，細胞質多為紅色，各類細胞的變性形式一致。2020/8/9，41，有絲分裂像，2020/8/9，42，2。自然細胞變