1、食品中菌落總數的測定實驗一、 實驗目的：了解稀釋平板計數的原理，掌握涂抹平板培養法和混合平板培養法，認識細菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落計數法是將等測樣品經適當稀釋后，其中的微生物充分分散為單個細胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自樣品中的多個細胞。因此平板菌落計數的結果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數的結果，現在已傾向使用菌落形成單位(col

2、ony-forming units，cfu)而不以絕對菌落數來表示樣品的活菌含量。該計數法的缺點是操作較繁，結果需要培養一段時間才能取得，而且測定結果易受多種因素的影響，但是這種計數方法最大的優點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗，以及食品、飲料和水等含菌指數或污染度的檢測三、試劑和材料1.儀器恒溫培養箱：（36 1 ，30 1 。）均質器或振蕩器無菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸頭無菌錐形瓶：容量 250 ml、500 ml、無菌培養皿：直徑 90 mm菌落計數器 2.樣品 1）平板計數瓊脂（plate count ag

3、ar，PCA）培養基：蛋白胨5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、瓊 脂15.0 g、蒸餾水1 000 ml、pH 7.00.2。將所有成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH。分裝試管或錐形瓶，121 高壓滅菌15 min。注：用平板計數瓊脂，稱取23.5 g于1 000 ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121 高壓滅菌20min，冷卻至4547左右備用。 2）無菌生理鹽水：氯化鈉（NaCl）5.875g 蒸餾水(純凈水) 500ml 稱取5.875NaCl溶于500ml蒸餾水中，121 高壓滅菌20min。 3.器材 100ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、天平、稱樣瓶、

4、記號筆、酒精燈等。四、 操作及實驗步驟 1.樣品的稀釋：25 g(ml)樣品+225 ml 稀釋液，均質。10倍系列稀釋。每遞增稀釋一次，換用 1 次1 ml 無菌吸管或吸頭。（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面）選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液，各取1 ml分別加入無菌培養皿內。吸取 1 ml 空白稀釋液作空白對照。每皿中加入15 ml20 ml 平板計數瓊脂培養基，并轉動平皿使其混合均勻。 2.培養：待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 1 培養48 h2 h。水產品 30 1 培養 72 h3 h。（如果有彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（約 4 ml），凝固后翻轉平板。） 3.菌落計數：記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。五、計算公式: 式中：N樣品中菌落數； C平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和； n1第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數； n2第二稀釋度（高稀