ICS65.020.20CCSB05DB2308佳木斯市市場監督管理局發布DB2308/T211—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件某些內容可能涉及專利，本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由佳木斯市農業農村局提出并歸口。本文件由佳木斯市市場監督管理局批準發布。本文件起草單位：黑龍江省農業科學院水稻研究所。本文件主要起草人：王桂玲、宋成艷、陸文靜、韓笑、周雪松。本文件2024年首次發布。DB2308/T211—2024水稻稻瘟病菌孢子保存技術規程本文件規定了佳木斯市水稻稻瘟病病菌定義、使用設備、保存方法等。本文件適用于佳木斯市水稻稻瘟病病菌保存技術，為更深入研究稻瘟病菌提供菌種來源。2規范性引用文件本文件沒有規范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1病原物pathogeny稻瘟病菌：無性階段為灰梨孢菌（學名：PyriculariaoryzaeCav.），有性階段為灰色大角間座殼菌（學名：MagnaporthegriseaBarr.），屬子囊菌廣大角間座殼屬。3.2水稻莖節ricestemnodes水稻莖節是指水稻莖上的特定部位，這些部位是芽與葉的著生處，通常凸出或微凹下，是辨別莖枝的主要特征。以下簡稱稻節。4材料和用具4.1常用儀器用具常用儀器及用具包括：剪刀、超凈工作臺、小試管（直徑12mm，長100mm）、接種針、培養皿、冰箱、生物顯微鏡、培養箱、高壓滅菌器、干燥滅菌器、醫用白瓷盤、變色硅膠、普通玻璃干燥器、酒精燈、記號筆，鑷子等。4.2試劑及培養基2DB2308/T211—2024試劑：75%酒精、凡士林。培養基：稻節。5預保存菌株要求培養在試管斜面培養基上的或培養皿里的菌種，以及高梁粒培養基上的新鮮菌種，都可以使用。6保存方法6.1稻節采集與備用秋季水稻（普通水稻，不包括彩色水稻等特種稻）收獲時，采集水稻植株較細的莖節，用剪刀剪成長約3cm～5cm的稻節，且要求稻節干凈無病，采集后放在干燥通風處晾干保存備用。6.2稻節培養基的制備選保存備用的干凈稻節，保留節部，剪成長約0.5cm～1cm的小節，用蒸餾水洗凈后放在容器內，根據需要放入稻節數量，然后加入蒸餾水適量（沒過稻節以上15cm），加熱煮沸20min后，常溫烝餾水冷過濾至常溫，然后裝入小試管內，每管放10個稻節，蓋上棉塞，放入高壓滅菌器（蒸氣滅菌器）內溫度達到121℃,滅菌40min，取出晾涼備用。6.3接種培養在無菌室內，把要保存的新鮮菌株切成小的菌塊，接種在稻節培養基上，在試管上注明菌株編號、接種日期，放入28℃恒溫培養箱內培養，待菌絲長滿稻節后，從培養箱內取出放在室內通風干燥處。6.4變色硅膠干燥將變色硅膠倒入玻璃培養皿或者瓷盤中，放入烘箱80℃干燥2h至硅膠變為深藍色(干燥的變色硅膠呈深藍色，根據吸濕量的多少顏色會依次呈淡藍色、藍白色、藍紫色和粉紅色)后冷卻，然后倒入玻璃干燥器中備用。6.5病菌保存準備普通玻璃干燥器（根據需要準備干燥器型號），在干燥器底部放入變色硅膠(干燥的變色硅膠呈深藍色)，把通風干燥后的小試管5個～10個為一組，用硫酸紙包住試管上部（棉塞部分）扎好，DB2308/T211—2024做上編號標記便于查找，在干燥器磨口處摸上凡士林，蓋上干燥器蓋子，用力壓實，以干燥器磨口處不漏氣為準，最后將干燥器放入低溫（4℃)通風干燥處保存。6.6保存菌種干燥狀態檢查檢查玻璃干燥器中硅膠顏色的變化，濕度為0時呈深藍色；濕度約為10%時呈淡藍色；濕度約為25%時呈藍白色；濕度約為40%時呈藍紫色；濕度約為50%時呈粉色，菌種保存過程中如果變色硅膠呈粉紅色，表明其吸濕性已經很弱，無法繼續維持所保存菌種的干燥環