ICS65.020B16DB13河北省地方標準DB13/T2211—2015馬鈴薯抗早疫病室內鑒定技術規范Indooridentificationstandardofpotatovarietiesresistancetoearlyblight河北省質量技術監督局發布DB13/T2211—2015前言本標準按GB/T1.1-2009規定起草。本標準由保定市質量技術監督局提出。本標準起草單位：河北農業大學。本標準主要起草人：楊志輝、朱杰華、楊毅清、張維宏、劉麗麗、何佳昱。IDB13/T2211—2015馬鈴薯抗早疫病室內鑒定技術規范1范圍本標準規定了馬鈴薯品種（系）和種質資源對早疫病抗性的室內鑒定技術規程，包括馬鈴薯品種室內抗性鑒定方法、馬鈴薯品種（系）和種質資源對早疫病的抗病性分級標準及評價。本標準適用于馬鈴薯品種（系）和種質資源對早疫病抗性室內鑒定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T496肥料合理使用準則通則NY/T5222馬鈴薯生產技術規程3術語和定義由茄鏈格孢（Alternariasolani）引起的馬鈴薯上的一種氣流傳播的真菌病害，主要為害馬鈴薯葉片，在葉片上形成具有同心輪紋的壞死斑，也可為害地上莖和薯塊，形成壞死斑，該病發生程度與寄主生育期相關，主要表現為生育后期感病嚴重。用于人工接種而引起馬鈴薯早疫病的病原體，在本標準中指用于接種的茄鏈格孢分生孢子懸浮液。利用接種體對被鑒定材料葉片進行人工接種，創造病原菌侵染和發病所需的最佳溫、濕度以及光照條件，通過對接種葉片發病程度的科學界定（病情分級）來評價被接種馬鈴薯對早疫病的抗性。1DB13/T2211—2015脫毒馬鈴薯種薯Virus-freeseedpotato除去馬鈴薯X病毒（PVX）、馬鈴薯S病毒（PVS）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、馬鈴薯A病毒（PVA）和馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）等主要病毒的馬鈴薯種薯。3.6病斑特征Lesionfeature被接種葉片發病后在不同馬鈴薯材料上的特異性表現。3.7病斑直徑Lesiondiameter采用十字交叉法測定病斑的長度和寬度之和的平均值。4室內抗性鑒定方法4.1對照品種的選擇選擇對不同地區適應性強、抗性程度已知的脫毒馬鈴薯作為室內抗性鑒定的對照品種。對照品種包括一個生產中主栽的感病品種費烏瑞它和一個馬鈴薯抗性測定單位提供的參考對照品種。4.2栽培及管理被測馬鈴薯品種（系）、種質資源按NY/T5222要求進行田間種植；施肥按照NY/T496要求進行。待馬鈴薯生長至塊莖膨大期時采集葉片，采集植株中下部大小一致（寬度約為3cm），且無孔洞、無病斑的健康葉片，裝入密封袋帶回室內。將含有10.5μmol/L萘乙酸（NAA）和10μg/mL鹽酸四環素的0.5%水瓊脂倒入滅菌玻璃皿（d=15cm）將選擇的早疫病菌菌株活化后接種到番茄汁培養基（番茄125g，瓊脂粉5g，補充蒸餾水至1000mL）中，25℃黑暗培養7d，然后用無菌水沖洗，刮除菌絲，在紫外光下照射5min～10min，20℃培養3d，再采用微量移液器準確量取4.6所制備的分生孢子懸浮液25μL，利用懸滴法接種到葉片正面中部的主2DB13/T2211—2015葉片接種后先置于25℃黑暗條件下培養12h，以利于病原菌的侵入。然后，將接種葉片放置在人工氣候室或光照培養箱中，每天12h光照、12h黑暗，關照強度為8000Lux～10000Lux，25℃培養7d～10d，以生產上主栽感病品種充分發病為準，來確定具體培養時間。4.9調查方法和數據處理從接種后第7d開始觀察對照品種的發病情況，待其充分發病后開始馬鈴薯接種葉片發病情況程度調查。采用十字交叉法測量接種發病葉片病斑的長度和寬度，填寫馬鈴薯接種葉片發病情況調查表（表1），注意當天必須調查完畢。表1馬鈴薯接種葉片發病情況調查表樣品葉片編號長度（mm）寬度（mm）病斑特征1234567895抗病性標準及評價5.1抗性標準根據被測馬鈴薯接種葉片上病斑有無、病斑大小及病斑上霉層特征，制訂了馬鈴薯抗早疫病室內鑒表2馬鈴薯品種對早疫病抗性鑒定標準抗性類型免疫病斑直徑（mm）00無病斑或僅有過敏性壞死斑12邊緣無褪綠暈圈；病斑上無霉層。5＜d≤1034注：d=（l+w）/2。其中，“d”為病斑直徑，“l”為十字交叉法測定病斑的長度，“w”為十字交叉法測定病斑。3DB13/T2211—2015只有當感病對照品種充分發病，與預期發病級別一致，且每個處理9個葉片以上均勻發病時，才視該批鑒定材料試驗數據有效。5.3抗性評價結果根據鑒定試驗材料葉片的病斑特征，按表1判定馬鈴薯品種（系）或種質資源對早疫病的抗性水平。馬鈴薯抗早疫病鑒定室內試驗要求重復2次，抗性類型相同才能出具抗性鑒定評價報告；若抗性類型不同，以發病級別高的抗性類型為準出具抗性鑒定評價報告。抗性鑒定評價報告式樣參見附錄A。4DB13/T2211—2015AA附錄