ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.6—2011飼料中泰樂菌素的測定Determinationoftylosininfeed河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T1384.6—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。本標準由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標準起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院、石家莊市疾病預防控制中心、北京出入境檢驗檢疫技術(shù)中心、河北醫(yī)科大學、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、楊立學、盧曉宇、呂品、賈茜、李志平、馬春玲、米振杰、沈磊、范斌、高振同、武英利。IDB13/T1384.6—2011飼料中泰樂菌素的測定1范圍本標準規(guī)定了飼料中泰樂菌素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標準適用于飼料中泰樂菌素的測定。本標準的方法檢出限為1.0μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987)3原理試樣用堿性溶液溶解后，用固相萃取柱萃取，洗脫液濃縮后用甲醇溶液定容，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標法定量。4.8泰樂菌素標準儲備溶液：1.0mg/mL。準確稱取適量的泰樂菌素標準物質(zhì)（4.7），用甲醇配成1.0mg/mL的標準儲備液。儲備液貯存在4℃冰箱中，可使用兩個月。4.9泰樂菌素標準工作溶液：用空白樣品提取液分別配成泰樂菌素濃度為2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL標準工作溶液。標準工作溶液在4℃保存，可使用一周。乙酸鈉緩沖液（pH＝5.5，0.15mol/L）：稱取12.30g醋酸鈉于1000mL量瓶中，加900mL1DB13/T1384.6—20115.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。5.2分析天平：感量0.lmg和0.0lg各一臺。5.3氮吹儀。5.4旋渦混勻器。5.5離心管：100mL。5.6高速離心機。5.7濾膜過濾器：0.45μm，有機相。5.8刻度離心管：10mL。6試樣的制備6.1提取準確稱取5g樣品（精確至0.01g）于100mL離心管中，加入30mL二氯甲烷于旋渦混勻器上快速混勻10mim,5000r/min離心5min。將上清液移至20mL試管中，氮吹儀吹至近干，加1mL甲醇溶解殘渣，再加入乙酸鈉緩沖溶液4mL,輕輕搖勻，在離心管中加入5mL正己烷，輕輕搖勻，于5000r/min離心5min,使分層，取水相待凈化。6.2凈化將水相移入OasisHLB柱器（使用前分別用3mL甲醇和5mL水預處理，保持柱體濕潤）中，以不高于2mL/min的流速過柱，待溶液完全流出后，用5mL水洗離心管和貯液管并過柱,然后再用5mL甲醇＋水（20＋80）洗柱，棄去全部淋出液。在65kPa的負壓下，減壓抽干10min，最后用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于10mL刻度離心管中，于50℃氮吹儀吹干，用甲醇＋水（30＋70）定容至1.0mL，過0.45μm的濾膜到進樣瓶中，供液相色譜－質(zhì)譜儀測定。7.1測定流動相：水（A）+甲醇（B）。霧化氣、鞘氣為高純氮氣，碰撞氣為高純氦氣。電噴霧電壓、碰撞電壓等自動優(yōu)化至最佳值。定性離子對(m/z)：916.5/174，916.5/772.5。2DB13/T1384.6—2011定量離子對(m/z)：916.5/174。7.2液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定泰樂菌素標準工作溶液在液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜設(shè)定條件下分別進樣，以樣品峰面積為縱坐標，工作溶液濃度（ng/mL）為橫坐標，繪制6點標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中泰樂菌素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。泰樂菌素標準物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄A。7.3空白試驗除不稱取試樣外，均按上述步驟進行。8結(jié)果計算結(jié)果用色譜數(shù)據(jù)處理機或按式(1)計算，計算結(jié)果需扣除空白值：X=c?Vm...........................................................(1)式中：X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）。c——從標準工作曲線上得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL)。m——樣品溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。9