ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.2—2011飼料中土霉素、四環素、金霉素的測定Determinationofstrain/tetracycline/aureomycininfeed河北省質量技術監督局發布DB13/T1384.2—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規則起草。本標準由河北省質量技術監督局提出。本標準起草單位：河北省食品質量監督檢驗研究院、石家莊市疾病預防控制中心、河北醫科大學、北京出入境檢驗檢疫技術中心、河北省飼料產品質量監督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、楊立學、盧曉宇、呂品、沈磊、米振杰、賈茜、李志平、馬春玲、張敬軒、高振同、武英利。IDB13/T1384.2—2011飼料中土霉素、四環素、金霉素的測定1范圍本標準規定了飼料中土霉素、四環素、金霉素的液相色譜-串聯質譜測定方法。本標準適用于飼料中土霉素、四環素、金霉素的測定。本標準的方法檢出限：50μg/kg。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法（GB/T6682－1992，neqIS03696：1987）3原理試樣提取液經離心后，上清液用OasisHLB固相萃取柱和陰離子交換柱凈化，液相色譜-串聯質譜4.40.4mol/L鹽酸溶液：準確量取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。4.5草酸。4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：準確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。4.8甲酸溶液：準確量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻即可。4.9土霉素、四環素、金霉素標準物質：純度≥95％。4.10土霉素、四環素、金霉素標準儲備溶液：0.1mg/mL。準確稱取適量的土霉素、四環素、金霉素、標準物質，分別用甲醇配成0.1mg/mL的標準儲備液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。4.11土霉素、四環素、金霉素基質混合標準工作溶液：根據需要吸取適量土霉素、四環素、金霉素標準儲備溶液，用空白樣品提取液稀釋成適當濃度的基質混合標準工作溶液，基質混合標準工作溶液在4℃保存，可使用三天。OasisHLB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水1DB13/T1384.2—20115儀器5.1液相色譜-串聯四級桿質譜儀，配有電噴霧離子源。5.2分析天平：感量0.lmg和lmg各一臺。5.3旋渦混勻器。5.4固相萃取儀。5.5高速離心機。5.6具塞錐形瓶：50mL。5.7離心管：50mL，5mL。5.8氮吹儀。5.9旋轉蒸發器。6試樣的制備6.1提取準確稱取3.0g樣品（準確至0.01g），置于50mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，加入鹽酸溶液（4.4）30mL，旋渦混勻1min，超聲20min，移至50mL離心管中，5000r/min離心10min，取上清液，待凈化。6.2凈化取10mL上清液與40mL水稀釋混勻，再移入下接OasisHLB柱的貯液器中。溶液以小于1.0mL/min的流速過柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，減壓抽干20min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗脫，收集洗脫液于40℃減壓旋轉蒸發至干,用1.0mL流動相溶解殘渣，12000r/min離心10min，經0.45μm有機濾膜過濾后，待測。離子源：電噴霧離子源；2DB13/T1384.2—2011表1三種四環素族抗生素定性離子對、定量離子對土霉素四環素金霉素461/426461/443461/381445/410445/154445/428479/444479/154479/462定性離子對/（m/z）定量離子對/m/z）461/426445/410479/4447.1.3液相色譜-串聯質譜測定用土霉素、四環素、金霉素基質混合標準工作溶液分別進樣，以峰面積為縱坐標，工作溶液溶度為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中土霉素、四環素、金霉素的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。土霉素、四環素、金霉素標準總離子流圖見附錄A。7.2平行試驗按以上步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。7.3空白試驗除不稱取試樣外，均按上述步驟同時完成空白試驗。8結果計算V1000X=c??m1000.............................................(1)式中：X——試樣中被測組分殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；M——樣品溶液所代表最終試樣的質量，單位為克（g）。注：計算結果應扣除空白值。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20％。3DB13/T1384