ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.1—2011飼料中4種β－內酰胺類藥物的測定Determinationoffourkindsofβ-lactamsinfeed河北省質量技術監督局發布DB13/T1384.1—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規則起草。本標準由河北省質量技術監督局提出。本標準起草單位：河北大學、河北省食品質量監督檢驗研究院、河北醫科大學、北京出入境檢驗檢疫局技術中心、石家莊市疾病預防控制中心、河北省飼料產品質量監督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、李揮、呂品、叢斌、盧曉宇、張敬軒、沈磊、米振杰、賈茜、張宏、楊立學、李志平、高振同、武英利。IDB13/T1384.1—2011飼料中4種β－內酰胺類藥物的測定1范圍本標準規定了飼料中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林4種β-內酰胺類藥物的液相色譜-串聯質譜測定方法。本標準適用于飼料中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的測定。本標準的方法檢出限：青霉素G、青霉素V為1.0μg/kg；氨芐西林、阿莫西林為2.0μg/kg。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法。3原理試樣中的4種β-內酰胺類藥物殘留，用OasisHLB或相當的固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯質譜OasisHLB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預處理，4.7青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液：準確稱取適量的每種標準物質，分別用乙腈配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備溶液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。4.8青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準工作溶液：根據需要吸取適量青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液，用空白樣品稀釋成適當濃度的基質混合標準工作溶液。1DB13/T1384.1—20115.3漩渦混勻器。5.4固相萃取真空裝置。5.5微量進樣器：25μL，100μL。5.6刻度樣品管：5mL，精度為0.1mL。5.7真空泵：真空度應達到80kPa。5.8pH計：測量精度0.01。5.9氮吹儀。5.10高速離心機。6測定步驟6.1試樣溶液的制備稱取5g試樣（精確到0.01g）置于100mL離心管中，加人45mL去離子水，于漩渦混勻器上快速混合5min，以5000r/min離心10min，將上清液移至OasisHLB柱中，以小于或等于3mL/min的流速通過固相萃取柱后，用5mL水洗柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽干20min，最后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，于40℃水浴中用氮吹儀吹干，用乙腈定容至1mL，搖勻后，供液相色譜-串聯質譜儀測定。6.2測定6.2.1液相色譜條件表1液相色譜梯度洗脫條件水（含0.4％乙酸）/（％）離子源：電噴霧離子源（ESI）。定性離子對、定量離子對，見表2。其余質譜條件見附錄A。2DB13/T1384.1—2011表2定性離子對與定量離子對青霉素G青霉素V氨芐西林阿莫西林定性離子對335/160335/176351/160351/192350/192350/160366/114366/208（m/z）定量離子對335/160351/160350/160366/208（m/z）6.2.3液相色譜－串聯質譜測定6.2.3.1定性測定在相同試驗條件下，樣品中待測物質與基質標準溶液中對應物質的保留時間偏差在±2.5％之內；樣品色譜圖中各定性離子對相對豐度與濃度接近的基質標準溶液的色譜圖中離子相對豐度相比，若偏差不超過表3規定的范圍，則可判定為樣品中存在該殘留。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度＞50±20＞20～50±25＞10～20±30≤10±50允許的最大偏差在儀器最佳工作條件下，用青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液配成的基質混合標準溶液分別進樣，以標準工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。在上述色譜條件下，青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的總離子流圖與保留時間見附錄B。X=c×V×1000………………（1）X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）。3DB13/T1384.1—2011c——從標準工作曲線得到的試樣溶液中被測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。V——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）。m——最終試樣溶液所代表的試樣質量，單位為克（g）。注：計算結果需將空白值扣除。8精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15％。4DB13/T1384.1—2011AA附錄A（資料性附錄）參考質譜條件A.1電噴霧電壓：5500V。A.２霧化氣壓力：0.055MPa。A.３氣簾氣壓力：0.079MPa。A.４輔助氣流速：6L/min。A.５離子源溫度：400℃。A.６去簇電壓（DP），聚焦電壓（FP）、碰撞能量（CE）及碰撞室出口電壓（CXP），見表A.1。表A.1去簇電壓，聚焦電壓、碰撞能量及碰撞室出口電壓定性離子對（m/z）335/160335/176351/160351/192350/192350/160366/114366/208定量離子對碰撞能量去簇電壓聚焦電壓碰撞室出口電名稱（m/z）vvv壓/v202320152