PAGEPAGE1《果酒和果醋的制作》1．發(fā)酵：通過(guò)微生物技術(shù)的培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。2．常見有氧發(fā)酵有醋酸發(fā)酵、谷氨酸發(fā)酵等，常見無(wú)氧發(fā)酵有酒精發(fā)酵、乳酸發(fā)酵(泡菜)等。3．酵母菌（真核生物）是兼性厭氧菌型微生物真菌，酵母菌的生殖方式：主要通過(guò)出芽生殖，還有分裂生殖、孢子生殖。4．在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，增加菌種數(shù)量。反應(yīng)方程式：C6H12O6＋6O2＋6H2O6CO2＋12H2O＋能量5．在無(wú)氧條件下，酵母菌（主要）進(jìn)行酒精發(fā)酵。反應(yīng)方程式：C6H12O62C2H5OH＋2CO2＋能量6．20℃左右最適宜酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18℃-25℃。7．在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌。在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。8．醋酸(桿)菌(原核生物)是單細(xì)胞細(xì)菌，代謝類型是異養(yǎng)需氧型，生殖方式為二分裂。9．當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷７磻?yīng)方程式：C2H5OH＋O2CH3COOH＋H2O10．控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。11．實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）12．酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。（先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色。）13．充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出二氧化碳的；出料口是用來(lái)取樣的。排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。 【疑難解答】（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？如要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。（3）為什么不能反復(fù)沖洗葡萄？在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌。反復(fù)沖洗導(dǎo)致葡萄皮上的菌種流失。（4）為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。《腐乳的制作》1．起主要作用的是（絲狀）毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是孢子生殖。營(yíng)腐生生活。(還有青霉、酵母、曲霉、毛霉等參與腐乳發(fā)酵。)2．腐乳制作原理：毛霉等微生物產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶。蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。3．實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制4．釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。（前期發(fā)酵的主要作用：①創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)。使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。②后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過(guò)程。通過(guò)各種輔料與酶的緩解作用，生成腐乳的香氣。）5．制作的溫度控制在15～18℃。6．發(fā)酵毛霉的來(lái)源①來(lái)自空氣中的毛霉孢子，②直接接種優(yōu)良毛霉菌種。7．加鹽腌制：同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量。（鹽的濃度過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高會(huì)影響腐乳的口味）8．食鹽的作用：①抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì)；②調(diào)味作用。（用鹽比例是4:1左右。）9．配制鹵湯：鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。（酒精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。）10．酒的作用：①防止雜菌污染以防腐；②賦予腐乳風(fēng)味。11．香辛料的作用：①調(diào)味作用；②殺菌防腐作用。12．防止雜菌污染：封瓶時(shí)最好在酒精燈的火焰（外焰）附近，防止瓶口被污染。【疑難解答】（1）利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí)，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？豆腐生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說(shuō)是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。（2）為什么要撒許多鹽，將長(zhǎng)毛的豆腐腌起來(lái)？鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。（3）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來(lái)做腐乳？含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。（4）吃腐乳時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有害嗎？它的作用是什么？“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲（匍匐菌絲），對(duì)人體無(wú)害。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。（5）生物的營(yíng)養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取、利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。（6）為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。（7）將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。《制作泡菜》1．制作泡菜所用微生物是乳酸菌(原核生物)，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。分裂方式是二分裂。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。2．在無(wú)氧條件下，乳酸菌分解葡萄糖(蔬菜中)為乳酸。反應(yīng)式為：C6H12O62C3H6O3+能量3．含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。4．泡菜腌制過(guò)程會(huì)產(chǎn)生亞硝酸鹽。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑，一般不會(huì)危害人體健康。在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。（一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好。）5．檢測(cè)亞硝酸鹽原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。6．亞硝酸鹽含量變化曲線：【疑難解答】（1）培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻到50℃左右時(shí)才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度不燙手時(shí)就可以倒平板。（2）為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。（3）平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。（4）在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，所以最好不用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。（5）怎樣鑒別欲用來(lái)接種微生物的培養(yǎng)基是否被污染？將一個(gè)空白培養(yǎng)基(將未接種的培養(yǎng)基)置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間(1～2天)，若無(wú)菌落形成則該培養(yǎng)基沒有被污染，反之污染，棄之。（6）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。（7）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（8）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。《微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)》1．培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)分為液體培養(yǎng)基(常應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn))、固體培養(yǎng)基(常應(yīng)用于微生物的分離和鑒定)和半固體培養(yǎng)基(常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等)。2．按照成分培養(yǎng)基分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。(合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。)3．按照培養(yǎng)基的用途可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。（選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。）4．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)常用瓊脂(是從紅藻中提取的一種多糖)作凝固劑。5．培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子等。(碳源是能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)，如CO2、NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。氮源是能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)，如N2、NH3、NO3-、NH4+（無(wú)機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無(wú)氧的條件)6．無(wú)菌技術(shù)包括消毒和滅菌。(①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。⑤無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。)7．消毒與滅菌的區(qū)別：消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒；滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能8．接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。9．制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。10．倒平板操作的步驟：（①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。）11．純化大腸桿菌意思是分離提純大腸桿菌。12．微生物接種的方法最常用的是平板劃線法(使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。)和稀釋涂布平板法(分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。)。13．涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行保證無(wú)菌操作。(應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如酒精燈與培養(yǎng)皿的距離合適、吸管頭不要接觸其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍。)14．菌種的保存：①臨時(shí)保藏方法(頻繁使用的菌種)，②甘油管藏的方法(長(zhǎng)期保存的菌種)。(臨時(shí)保藏方法，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。該法的缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。甘油管藏的方法，在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。)15．分離土壤中分解尿素的細(xì)菌（含脲酶）的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基（以尿素為唯一氮源）。16．影響微生物生長(zhǎng)的因子：營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等。17．加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。18．測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法：稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。19．稀釋涂布平板法一般選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，本法限于形成了菌落的微生物。20．微生物的“天然培養(yǎng)基”是土壤。21．每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）·M(C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù))22．纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。23．纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。)24．分離土壤中分解纖維素的細(xì)菌（含纖維素酶）的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基（以纖維素為碳源）。25．篩選纖維素分解菌方法：剛果紅染色法。能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。(剛果紅是一種染料，它與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。)26．纖維素分解菌的帥選流程：土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落27．加入剛果紅的順序：一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。《植物的組織培養(yǎng)技術(shù)》1．植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)：細(xì)胞全能型。2．植物組織培養(yǎng)的流程：離體的植物組織或細(xì)胞→愈傷組織→根或芽等器官3．愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。4．離體的（高度分化的）植物組織或細(xì)胞形成愈傷組織的過(guò)程，稱為脫分化（去分化）。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)形成根或芽等器官的過(guò)程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。5．生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程叫細(xì)胞分化。6．細(xì)胞分化本質(zhì)：基因選擇性表達(dá)。7．植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。8．菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝（生長(zhǎng)旺盛嫩枝）作材料。9．植物的組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基。10．MS培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)的（一般情況下只有①～⑤）成分：①大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，②微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，③植物激素，④蔗糖，⑤瓊脂，⑥有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素等。（大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。）11．植物激素主要是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。在培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例不同影響結(jié)果不用。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果生長(zhǎng)素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化比值高時(shí)促根分化，抑芽形成先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化比值低時(shí)促芽分化，抑根形成同時(shí)使用分化頻率提高比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)12．植物組織培養(yǎng)的影響因素：PH、溫度、光等。13．MS培養(yǎng)基采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。14．微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。15．外植體的消毒溶液：①70%的酒精中持續(xù)6～7s，②0.1%的HgCl2中1～2min。16．注意：對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。17．接種過(guò)程中插入培養(yǎng)基的外植體形態(tài)學(xué)上端朝上，要求無(wú)菌操作。18．組織培養(yǎng)的產(chǎn)物露天栽培前需將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境進(jìn)行壯苗。19．外植體在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底、培養(yǎng)基滅菌不徹底、接種中被雜菌污染、錐形瓶密封性差等。20．被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段。21．花粉離體培養(yǎng)的最佳時(shí)期：?jiǎn)魏似凇；ɡ龠x擇完全未開放的花蕾。22．產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過(guò)：23．胚狀體：類似胚的結(jié)構(gòu)，又稱為細(xì)胞胚。24．影響花藥培養(yǎng)的主要因素是材料的選擇與培養(yǎng)基的組成。25．確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。26．植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。工業(yè)生產(chǎn)上，獲取天然β-胡蘿卜素的方法有：①?gòu)闹参镏刑崛。虎诶梦⑸锏陌l(fā)酵生產(chǎn)。結(jié)合所學(xué)知識(shí)，請(qǐng)回答以下問題：用組織培養(yǎng)的方法培育胡蘿卜植株，過(guò)程如圖：離體組織eq\o(→,\s\up7(A))愈傷組織eq\o(→,\s\up7(B))長(zhǎng)出叢芽、生根→移栽成活(1)A過(guò)程表示________，B過(guò)程表示________。(2)培養(yǎng)過(guò)程中通常用的培養(yǎng)基為________。(3)培養(yǎng)基中需要添加的植物激素是_________________，這是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。(4)若離體組織為胡蘿卜的根尖細(xì)胞，則培養(yǎng)成的植株葉片的顏色為________，說(shuō)明根尖細(xì)胞具有_______________。10.育種工作者常采用花藥培養(yǎng)的方法，使花粉粒發(fā)育為單倍體植株。下面是采用水稻的花藥進(jìn)行培養(yǎng)過(guò)程的流程：選取水稻花藥→對(duì)花蕾消毒→接種和培養(yǎng)→植物體。(1)選取的水稻花藥應(yīng)為____________期，此時(shí)細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)，花藥培養(yǎng)成功率最高。(2)通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株一般有兩種途徑：一種是花粉通過(guò)__________階段發(fā)育為植株；另一種是在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成____________，再將其誘導(dǎo)分化成植株。(3)試管苗形成過(guò)程中，必須從培養(yǎng)基中獲得______________________和小分子有機(jī)物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(4)要促進(jìn)花粉細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中應(yīng)有____________和__________________兩類植物激素。(5)若接種過(guò)花藥的培養(yǎng)基上出現(xiàn)了污染，則可能的原因________________________。(6)右圖表示花藥離體培養(yǎng)及單倍體育種的大致過(guò)程，過(guò)程①是把幼小的花藥分離出來(lái)，在無(wú)菌條件下放在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。配制該培養(yǎng)基時(shí)，需要的物質(zhì)應(yīng)該含有_________________。(7)過(guò)程②是花藥在MS培養(yǎng)基所提供的特定條件下進(jìn)行脫分化，發(fā)生細(xì)胞分裂，形成____________，此過(guò)程進(jìn)行細(xì)胞分裂的方式是_____________。過(guò)程③是誘導(dǎo)再分化出芽和根，最后長(zhǎng)成植株，長(zhǎng)成的植株(不考慮核與核之間融合)是________植株，其特點(diǎn)是植株弱小，高度不育，生產(chǎn)上無(wú)推廣應(yīng)用的價(jià)值，若要使其結(jié)子結(jié)果，可在移栽后在幼苗莖尖滴加適宜濃度的B物質(zhì)_______________。過(guò)程②與過(guò)程③所用培養(yǎng)基有差異，主要是____________的差異。《DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)》1．DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精（特別是95％冷卻酒精）。在0.14mol/L時(shí)溶解度最小；較高濃度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。2．預(yù)冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點(diǎn)。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。3．提取DNA還可以利用DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。4．DNA的變性是指DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在80℃以上，如在PCR技術(shù)中DNA變性溫度在95℃。5．DNA鑒定在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。6．DNA粗提取實(shí)驗(yàn)材料的選取原則：DNA含量高、材料易得、便于提取。7．DNA粗提取實(shí)驗(yàn)的材料：雞血細(xì)胞。8．防止血液凝固的試劑：檸檬酸鈉溶液。9．注意事項(xiàng)：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；雞血靜置或離心以提高細(xì)胞懸液濃度；使用塑料燒杯；使用尼龍布過(guò)濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細(xì)胞破裂快速攪拌）；玻棒不要碰到燒杯壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。《植物有效成分的提取》1．天然香料的來(lái)源：植物、動(dòng)物。不同植物的根、莖、葉、花、果實(shí)、種子都可以提取芳香油。2．芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取等。3．芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以萜類化合物及其衍生物為主。4．水蒸氣蒸餾法原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來(lái)形成油水混合物，冷卻后水油分層。方法有水中蒸餾，原料放在沸水中加熱蒸餾；水上蒸餾，原料隔放在沸水上加熱蒸餾；水汽蒸餾，利用外來(lái)高溫水蒸氣加熱蒸餾。缺點(diǎn)是有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解此時(shí)通常用壓榨法（通過(guò)機(jī)械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來(lái)的一種簡(jiǎn)單操作）。5．萃取法原理：芳香油易溶于有機(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。6．萃取法方法：原料浸泡在溶劑中→得到浸泡液→有機(jī)溶劑揮發(fā)→芳香油。缺點(diǎn)是有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)。7．蒸餾裝置（左）、分液漏斗（右）：8．安裝蒸餾裝置儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時(shí)相反。9．油水分離用分液漏斗。10．向乳濁液加入0.1g/mL氯化鈉溶液：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離。11．加入無(wú)水硫酸鈉：吸收油層中的水分，過(guò)濾除去硫酸鈉。12．提取玫瑰精油注意事項(xiàng)：蒸餾時(shí)間不能過(guò)短，溫度不能過(guò)高。13．橘皮精油的主要成分：檸檬烯，主要分布在橘皮中。14．石灰水：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過(guò)濾不堵塞篩眼。15．小蘇打、硫酸鈉：促進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.