酶標儀酶免疫分析是基于酶催化反應的特性來進行檢測和定量分析免疫反應。在實踐上，首先要讓酶標記的抗體或抗原與相應的配體（抗原或抗體）發生反應，然后再加入酶底物。酶催化反應發生后，可通過檢測下降的酶底物濃度或升高的酶催化產物濃度來達到檢測或定量分析抗原抗體反應的目的。一、酶免疫分析的基本原理酶是一種能催化化學反應的特殊蛋白質，其催化效力超過目前所有的人造催化劑，一般可使反應加速108一1010倍。此外，酶還具有高度的專一性，即每一種酶只催化一種或一組密切相關的化學反應。免疫技術是利用Ag-Ab反應進行的檢測方法，特點是具有高度的特異性和敏感性。如將Ag或Ab用標記物(如熒光素、酶、放射性同位素等)進行標記，則在與標本中的相應Ab或Ag反應后，可以不必測定Ag-Ab復合物本身，而測定復合物中的標記物，通過標記物的放大作用，進一步提高了免疫技術的敏感性。

EIA是將酶催化的放大作用與抗原、抗體的免疫反應相結合的一種微量分析技術。酶標記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應特異性，也不改變酶本身的催化活性，即在相應的反應底物參與下，標記的酶可以使底物基質水解而呈色，或使供氫體由無色的還原型轉變為有色的氧化型，這種有色產物可以通過肉眼、光學顯微鏡或電子顯微鏡進行觀察，也可以用分光光度計加以測定。呈色反應顯示了反應體系中酶，即被標記的抗體（或抗原）的存在，從而證明發生了相應的免疫學反應。因此，EIA是一種特異而敏感的檢測技術，可以在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，也可以在微克、甚至納克水平上對其進行半定量、定量測定。二、酶免疫分析方法中的主要組成部分

（－）固相載體非均相EIA免疫實驗所用的固相載體應具備以下條件：①可結合抗體（抗原）的容量大、種類多；②可將抗體（抗原）牢固地固定在其表面，雖經長期保存和多次洗滌也不脫落；③不影響所固定抗體（抗原）的免疫反應性；④抗體的Fc段（或抗原）被固定在載體上時其與抗原（抗體）的結合空間位點應朝向反應液。常用的材料有：

1．塑料如由聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的微孔反應板（48孔、96孔）或小珠、小試管等產品，是目前應用最廣、最普及的一種固相載體，主要通過非共價鍵吸附抗原或抗體。該類載體的應用可以簡化整個EIA的操作步驟，使之易于實現自動化。

2、可磁化顆?；颦傊侵檫@類固相載體通過共價鍵結合抗原或抗體，在檢測中可分散到整個反應混合液中，有很大的表面積，結合容量較大，因此結合較為有效，使免疫反應得以迅速進行；但制備固相抗體有較嚴格的技術要求。（二）包被蛋白經過純化后，大部分抗原、抗體都可作為ELA反應的包被蛋白?？乖蚩贵w的濃度高，吸附在載體表面的也越多。（三）待測樣品

EIA中的待測樣品可以為細胞、血清、腦脊液、胸腹水及其他體液中的任何抗原、抗體，某些反應，如間接法檢測丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、競爭抑制法檢測乙型病毒性肝炎核心區外型抗體（抗-HBcIgG）等需要對待測樣品進行稀釋后再進行分析.（四】酶標記物酶標記物是指將酶通過某些化學物（交聯劑）和抗原、抗體、Fab片段等蛋白結合在一起的復合物，利用該復合物可以檢測相對應的免疫反應原性蛋白。目前常用的交聯劑有：戊二醛、氟二硝基苯、過碘酸鈉等。（五）各種緩沖液如：包被液、封閉液、稀釋液、洗液、顯色底物和緩沖液、終止液等。三、酶免疫分析技術（－）均相EIA均相EIA技術的測定對象為小分子抗原或半抗原，主要用于藥物測定。當酶與半抗原聯結形成的酶標記物與相應的抗體反應后，由于抗體分子的空間阻礙效應或因酶的構型發生變化而激發或妨礙了它與底物的作用。因此，發生免疫結合反應后的酶呈激活或抑制狀態，增強或不能催化底物的呈色反應；當加入樣品后，樣品中的半抗原競爭性地結合可與酶標記物反應的抗體，此時酶標記物就不再結合抗體分子，從而使酶標記物解除了激活或抑制狀態，重新變為初始狀態，因此，在此實驗中無需分離即可直接測定發生特異性免疫反應的（二）異相EIA

1．競爭性EIA檢測方法

1）酶標記抗原的競爭性EIA

在這種EIA中，將含特異性抗體的免疫球蛋白包被在固相載體上，然后以不同比例加人含待測抗原和酶標記抗原的溶液，過量的酶標記抗原和非標記抗原與限量的、包被在固相載體上的抗體一起溫育，由于油結合位點數比總的抗原結合位點數少，因此，Ag－E與Ag互相競爭與固相抗體結合。洗去游離的Ag－E和Ag后，測定固相抗體結合的Ag－E酶的活性，即可對被測Ag進行定量。其示意圖如圖1所示。

圖1競爭法測抗原2．非爭性EIA檢測方法

1）直接法這與免疫熒光技術的直接法相似，將所選擇的酶標記抗體與相應的抗原共同孵育，然后用該酶的特殊底物進行顯色，揭示抗原一抗體復合物的存在。2）雙抗體夾心法①將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。然后洗滌除去未結合的抗體及雜質。③加受檢標本使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。然后洗滌除去其他未結合的物質。③加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。然后徹底洗滌未結合的酶標抗體。。此時，固相載體上帶有的酶量就代表標本中受檢抗原的量。④加底物顯色。夾心式復合物中的酶催化底物變為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。‘圖2雙抗體夾心法測抗原測量原理光密度檢測利用了Labsystems傳統垂直光密度檢測的概念，即光束經過整個標本的垂直測光法。在垂直測光法中，光的吸收與板孔中吸光物質的多少成比例。吸光值由以下公式表示：A=(a/s)×mA=(a/s)×m式中，