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動物細胞融合技術和單克隆抗體第二章第二節本節聚焦什么是動物細胞融合技術？01單克隆抗體是如何制備的？在臨床上有哪些應用？02從社會中來針對新冠肺炎真正的特效藥是什么？有著怎樣的特點？新冠感染痊愈者捐獻的血漿對新冠感染患者有什么作用？為什么不能只依靠痊愈者血漿中得到的抗體來治療病人？從社會中來針對新冠肺炎真正的特效藥是什么？有著怎樣的特點？新冠感染痊愈者捐獻的血漿對新冠感染患者有什么作用？為什么不能只依靠痊愈者血漿中得到的抗體來治療病人？特效藥是針對新冠病毒的單克隆抗體。這種單克隆抗體可以和新冠病毒特異性結合，準確定位、藥效強、持續時間久，并且可以大量儲備生產。血漿中有新冠病毒的抗體,可以用于治療新冠感染患者。但血漿中直接獲得的抗體，存在產量低、純度低、特異性差等缺陷。從社會中來產量低、純度低,特異性差（已免疫的）B淋巴細胞體外不能無限增殖能無限增殖能否讓這兩種細胞雜交，培育出既能產生抗體，又能大量增殖的細胞呢？動物細胞融合技術動物細胞融合技術

：使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。雜交細胞特點：原理：融合方法：意義：具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息細胞膜的流動性PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。（化學法、

物理法、

生物法

）動物細胞融合特有突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。已成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段，特別是雜交瘤技術，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。動物細胞融合技術過程：滅活的病毒顆粒滅活的病毒顆粒粘附于細胞表面細胞膜融合細胞核融合形成雜交細胞在病毒的作用下，使細胞互相凝聚滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結構。滅活病毒誘導細胞融合原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融合。動物細胞融合實質及完成的標志：細胞核的融合動物細胞融合技術19世紀30年代，科學家曾在患肺結核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細胞。如何解釋這一現象？病人體內的病毒等誘導多個體細胞融合形成了多核細胞。肺結核病人病理切片動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞融合前的處理方法誘導細胞融合的方法結果意義細胞膜具有一定的流動性植物細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞電融合法、離心法、PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法雜種植株雜交細胞打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育植物新品種。突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。單克隆抗體及其應用動物細胞融合雜交瘤細胞動物細胞培養單克隆抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒發明了單克隆抗體的制備技術，于1984年獲得了諾貝爾生理學或醫學獎。既能迅速大量增殖,又能產生專一抗體單克隆抗體及其應用

注射特定抗原

脾臟中獲取B淋巴細胞骨髓瘤細胞培養骨髓瘤細胞獲得產生特定抗體的B淋巴細胞骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合誘導融合多種雜交細胞篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞既能大量增殖又能產生抗體單克隆抗體及其應用①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。基于上述知識，設計一種篩選雜交瘤細胞的方法，并分析誘導融合處理后各細胞種類的培養結果。在通用培養基中加入氨基喋呤，制成選擇培養基，并培養誘導融合后的細胞。a.骨髓瘤細胞及同型融合細胞，不能增殖，一段時間后死亡；b.B淋巴細胞及同型融合細胞，不能無限增殖，一段時間后死亡；

c.雜交瘤細胞；能無限增殖，在培養條件下生長增殖。單克隆抗體及其應用經歷一次篩選得到的雜交瘤細胞就能用于單克隆抗體的生產了嗎？還存在什么問題？從小鼠脾臟中獲取的B淋巴細胞有多種，第一次篩選后得到的雜交瘤細胞也包含多種類別，并不能直接用于生產專一抗體，還需進一步篩選。單克隆抗體及其應用雜交瘤細胞進行培養并稀釋96孔板培養和篩選每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞陽性孔中的細胞不能保證是來自單個細胞，需挑選陽性孔的細胞繼續進行3～4次有限稀釋。抗原抗體的特異性結合單克隆抗體及其應用單克隆抗體及其應用雜交瘤細胞篩選抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞既能大量增殖又能產生專一抗體在體外培養注射到小鼠腹腔內培養液中獲取腹水中獲取單克隆抗體單克隆抗體及其應用梳理復述單克隆抗體的制備過程。單克隆抗體制備需要應用到動物細胞工程技術，及其原理？給小鼠注射抗原的目的？誘導細胞融合的方法？雜交瘤細胞的特點？兩次篩選的目的？增殖雜交瘤細胞獲得單克隆抗體方法？獲得能產生相應抗體的B淋巴細胞。物理:電融合法；化學:聚乙二醇；生物:滅活的病毒。第1次篩選得到多種雜交瘤細胞；第2次篩選得到能產生所需抗體的雜交瘤細胞。體外培養或注射到小鼠腹腔內增殖。既可以產生特異性抗體，又可以大量增殖。動物細胞融合、動物細胞培養技術，原理分別為細胞膜的流動性和細胞增殖。單克隆抗體及其應用使用高效的細胞毒素類藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞。但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應用。抗體—藥物偶聯物（antibody-drugconjugate，ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如下圖所示。單克隆抗體及其應用ADC各部分具有什么作用？抗體通過特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；藥物發揮治療效應。除了細胞毒素外，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯的藥物？①可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療；②一些作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療。ADC在臨床應用上各具有什么優勢？ADC能夠協同發揮抗體特異性識別的靶向作用和細胞毒素對腫瘤細胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點清楚、毒副作用小等優點。單克隆抗體及其應用單克隆抗體診斷試劑盒在臨床應用上具有什么優勢？單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原發生反應，因此檢測的特異性和靈敏度大大提高。生產單克隆抗體的雜交瘤細胞可以傳代培養、冷凍保存和復蘇利用，有利于控制產品的質量和標準化生產診斷試劑盒。抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體比原來診斷方法提前了10d左右，準確率在90﹪以上。單克隆抗體及其應用單克隆抗體的優點：（1）